IVF失敗者ICSI效果觀察

劉海萍，王海玉，郝天羽，王建業(yè)，李云飛

(濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院，濟(jì)南250031)

在實(shí)施體外受精—胚胎移植(IVF-ET)治療的周期中有5% ～15%［1～5］受精失敗，以往常于 IVF后18～20 h行卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射(ICSI)治療，但臨床效果并不理想［6，7］。2007年 9月 ～2011年 5月，我們?cè)诔Ｒ?guī)IVF后8 h對(duì)65例受精失敗者行ICSI治療，效果滿意?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 在我院生殖醫(yī)學(xué)中心行IVF治療的原發(fā)性不孕患者831例，共獲卵10 893枚;其中65例642枚MⅡ期卵子短時(shí)授精后8 h未觀察到第二極體。65例受精失敗患者年齡(32.56±1.81)歲，不孕時(shí)間(4.1±2.3)年;不育原因?yàn)檩斅压芤蛩?8例、盆腔粘連4例、子宮內(nèi)膜異位癥3例，原因不明30例。

1.2 IVF、ICSI方法 超促排卵采用常規(guī)長(zhǎng)方案，當(dāng)至少有3個(gè)卵泡直徑達(dá)16 mm時(shí)注射10 000 U HCG，注射后36～38 h在超聲引導(dǎo)下經(jīng)陰道取卵。取卵后培養(yǎng)2～4 h授精，精液采用密度梯度離心+上游法處理，精子濃度為5～10萬(wàn)條/卵，精卵共育4～8 h。IVF后4 h拆卵觀察第二極體，對(duì)未出現(xiàn)第二極體的卵子于8 h后再次觀察，若未出現(xiàn)原核或第二極體則判為完全受精失敗，立即對(duì)其行ICSI補(bǔ)救，操作過(guò)程同常規(guī) ICSI［8］。ICSI后 16 ～18 h 確認(rèn)受精情況，繼續(xù)培養(yǎng)至第3天移植。選擇優(yōu)質(zhì)胚胎(Ⅰ、Ⅱ級(jí)胚胎)2～3枚進(jìn)行移植，移植后35 d后超聲觀察到妊娠囊及胎心搏動(dòng)的判為臨床妊娠。

2 結(jié)果

本組ICSI后16 h觀察到541枚卵子出現(xiàn)雙原核及第二極體，判斷為正常受精，正常受精率為84.3%;12枚卵出現(xiàn)3個(gè)原核為異常受精，89枚卵未受精。第2天受精卵均出現(xiàn)卵裂，第3天觀察到289個(gè)6～8個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)胚胎，優(yōu)質(zhì)胚胎率為53.4%。移植補(bǔ)救ICSI胚胎152個(gè)，平均移植2.34個(gè)。移植后50 d行B超檢查發(fā)現(xiàn)臨床妊娠29例，臨床妊娠率44.6%。

3 討論

導(dǎo)致受精完全失敗的根本原因是精卵不能識(shí)別或識(shí)別失敗，IVF后18 h行挽救性治療，雖可受精，但受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、5個(gè)細(xì)胞以上胚胎率均低。其原因可能為卵齡延長(zhǎng)及暴露于培養(yǎng)液中的卵母細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)及染色體發(fā)生異常的幾率增加［9］，胚胎發(fā)育能力低，而且胚胎發(fā)育狀況與子宮內(nèi)膜不同步，所以妊娠率并不理想。我們以往采用授精后18 h對(duì)受精失敗的卵子進(jìn)行ICSI補(bǔ)救，23例患者中僅2例妊娠。因此，探索早期卵子受精的判斷和最適宜的補(bǔ)救ICSI時(shí)間有重要意義。

第二極體的排出是卵子受精的早期表現(xiàn)。Nagy等［10］報(bào)道，ICSI授精后 2、4、6 h 約有 23%、68%、90%的受精卵出現(xiàn)第二極體，而46.37%的卵于授精后8 h出現(xiàn)原核［11］。我們發(fā)現(xiàn)，授精后4、8 h通過(guò)觀察第二極體的出現(xiàn)判斷受精的符合率分別為86.0%和96.8%，所以本研究對(duì)8 h未觀察到第二極體或原核的卵子實(shí)施 ICSI，可以最大限度減少誤穿，從而避免多精受精的可能。本研究對(duì)642枚未出現(xiàn)第二極體的MⅡ期卵子立即行ICSI，ICSI后16 h 541枚卵子出現(xiàn)雙原核及第二極體，判斷為正常受精，正常受精率為84.3%，優(yōu)質(zhì)胚胎率53.4%，臨床妊娠率44.6%。這表明IVF后8 h對(duì)失敗者實(shí)施ICSI補(bǔ)救，可避免卵子老化，其受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、受精和胚胎的發(fā)育模式更接近于常規(guī)ICSI，且可供冷凍胚胎數(shù)多，累積妊娠率也增加，而異常受精率并未增加。值得注意的是，IVF授精8 h后4% ～5%的卵細(xì)胞有可能出現(xiàn)延遲受精，ICSI對(duì)這部分卵子會(huì)造成多精受精。其次，當(dāng)?shù)谝粯O體出現(xiàn)分裂或碎片時(shí)很難與第二極體區(qū)別，易造成誤判，實(shí)施ICSI后亦可造成多精受精。本結(jié)果顯示，有12枚受精卵出現(xiàn)3個(gè)原核，所占比例較小。對(duì)于極體分裂難于區(qū)分是否是第二極體時(shí)，通過(guò)8 h觀察早期原核的出現(xiàn)可顯著減少誤判。因此，我們認(rèn)為IVF后8 h對(duì)未出現(xiàn)原核或未排出第二極體的卵子及時(shí)實(shí)施ICSI，可成為預(yù)防受精失敗的有效方法。

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