犬瘟熱病的研究概況

胥清芳，王慶華

（1.西南大學(xué)動物科技學(xué)院，重慶北碚400715；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌402460)

犬瘟熱(CD)是世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生的一種犬的急性、高接觸性的病毒傳染病，其病原為犬瘟熱病毒(CDV)，它于1905年首次報(bào)道，隸屬于副黏病毒科麻疹病毒屬，其自然宿主包括大部分的食肉目動物。它以早期雙相熱型、急性鼻卡他及隨后的支氣管炎、卡他性肺炎、嚴(yán)重的胃腸炎和神經(jīng)癥狀為特征，有些患病動物的鼻和足墊還表現(xiàn)過度角化。它是一種傳染性強(qiáng)，臨床癥狀多樣，容易繼發(fā)細(xì)菌和其他病毒的混合感染或繼發(fā)感染，發(fā)病率高達(dá)80%，患病動物在康復(fù)后還易留有麻痹、抽搐、癲癇樣發(fā)作等后遺癥。常規(guī)免疫接種在正常情況下是一種高度有效的預(yù)防保護(hù)措施，但據(jù)報(bào)道，犬瘟熱在德國、法國、日本、美國和芬蘭等國家常規(guī)免疫執(zhí)行很好的地區(qū)也會有不同程度的流行，這表明預(yù)防接種過的犬也可能發(fā)病，而發(fā)病機(jī)制可能存在新的變化。

一、流行病學(xué)

CDV宿主廣泛，犬科(犬、狐貍、豺、狼等)、鼬科(貂、雪貂、黃鼬、白鼬、貉等)和浣熊科(海豹、熊貓、浣熊、白鼻熊等)、貓科(虎、豹、獅)動物均易感，但犬是主要的宿主，純種犬比土種犬具有更明顯的易感性，幼小動物比成年動物更易感。在狐、水貂等皮毛獸養(yǎng)殖場，犬瘟熱可自然流行，雪貂自然發(fā)病的死亡率常達(dá)100%?，F(xiàn)已有報(bào)道證實(shí)在患Pagets疾病的病人組織中檢出了犬瘟熱病毒核酸。由此可見，犬瘟熱的感染范圍在不斷地?cái)U(kuò)大。

傳染源為患病動物和帶毒動物。病毒存在于患病動物和帶毒動物的鼻汁、淚液、血液、腦脊髓液、淋巴結(jié)、心包液、胸水，腹水等中，通過眼鼻分泌物、唾液、尿液和糞便向外排毒。有些病犬臨床癥狀恢復(fù)后可長時間向外界排毒。

傳播途徑主要是呼吸道，其次是消化道。胎兒可通過胎盤屏障而感染，造成流產(chǎn)和死胎。本病一年四季都可發(fā)生，但以冬季和早春季節(jié)多發(fā)。近年來，隨著養(yǎng)犬業(yè)的發(fā)展，犬的交流調(diào)運(yùn)頻繁，發(fā)病周期性不再明顯。

二、發(fā)病機(jī)制

自然感染途徑主要是經(jīng)上呼吸道。CDV經(jīng)鼻、咽和上呼吸道侵入機(jī)體后首先在其附近的淋巴結(jié)和扁桃體中增殖，24 h內(nèi)在組織巨噬細(xì)胞中增殖并擴(kuò)散至整個細(xì)胞，從局部淋巴管到達(dá)扁桃體和支氣管淋巴結(jié)。感染后2～4 d病毒在扁桃體和咽后淋巴結(jié)、支氣管淋巴結(jié)中繁殖。4～6 d后CDV在脾臟淋巴濾泡、胃及小腸的固有層、腸系膜淋巴結(jié)和肝臟星形細(xì)胞內(nèi)增殖，動物表現(xiàn)為最初的體溫升高和白細(xì)胞減少。感染后第一周出現(xiàn)病毒血癥，借助于血液循環(huán)，CDV散布到全身的淋巴器官、骨髓和上皮結(jié)構(gòu)的固有膜，身體的所有分泌物中開始向外排毒。50%的犬于感染后迅速產(chǎn)生抗體，8～9 d時即可測出。在感染后8～9 d病毒進(jìn)一步擴(kuò)散到上皮組織和CNS組織，身體的所有分泌物中開始向外排毒，甚至處于亞臨床感染階段的犬也開始排毒。免疫水平良好的犬感染后14 d具有了足夠的CDV抗體，細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性從大部分組織中清理病毒，動物不表現(xiàn)犬瘟熱的臨床癥狀，免疫水平差的犬在感染后9～14 d病毒擴(kuò)散到其組織，包括皮膚、內(nèi)分泌腺、胃腸道上皮、呼吸道上皮、泌尿生殖道上皮等，呈現(xiàn)出病毒侵害多系統(tǒng)的臨床癥狀。CDV在腦組織中主要表現(xiàn)為對血管壁細(xì)胞的激活過程繼而引起神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)，出現(xiàn)脫髓鞘性腦炎，在感染后3～4周時出現(xiàn)神經(jīng)癥狀而死亡。

三、癥狀

CD的臨床癥狀決定于毒株的毒力、環(huán)境、宿主年齡及免疫水平等各種因素。

（一）多系統(tǒng)癥狀 溫和型臨床癥狀比較常見，出現(xiàn)精神沉郁、厭食、雙相熱和呼吸道癥狀。雙相熱表現(xiàn)為開始體溫升高至40℃左右，持續(xù)8～18 h，經(jīng)1～2 d無熱期后，體溫再度升高至40℃左右，3～6 d，出現(xiàn)暫時的發(fā)熱和淋巴細(xì)胞減少。呼吸道癥狀最初表現(xiàn)為漿液性鼻汁，以后發(fā)展為粘液膿性并伴隨咳嗽和呼吸困難。同時，病毒血癥可能導(dǎo)致全身性的淋巴器官感染，包括脾臟、胸腺、淋巴結(jié)、骨髓、黏膜相關(guān)淋巴組織、胃腸道黏膜固有層巨噬細(xì)胞和肝臟枯否氏細(xì)胞。

（二）皮膚損傷 可見到水泡性和化膿性皮炎，腹下皮膚常見有米粒大小的紅色丘疹或化膿性丘疹，皮屑大量脫落，唇、眼、肛門皮膚增厚，鼻鏡龜裂，母犬外陰腫脹。病程稍長者，足墊增厚、變硬甚至干裂，這是臨床診斷的重要指征之一。

（三）神經(jīng)癥狀 神經(jīng)癥狀是該病的特點(diǎn)之一，通常在病的恢復(fù)期后7～21 d出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，但也有部分犬剛開始發(fā)熱時就表現(xiàn)出來，或者在嚴(yán)重的全身癥狀出現(xiàn)后伴隨出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。癲癇發(fā)作、四肢輕癱或后軀輕癱、肌痙攣、共濟(jì)失調(diào)是臨床上經(jīng)?？吹降纳窠?jīng)癥狀。神經(jīng)癥狀的變化決定于病毒侵害神經(jīng)系統(tǒng)的部位，大腦受損表現(xiàn)為癲癇、好動、轉(zhuǎn)圈和精神異常；中腦、小腦、前庭和延髓受損表現(xiàn)為運(yùn)動或站立姿勢異常；脊髓受損表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、反射異常；腦脊膜發(fā)炎表現(xiàn)為感覺過敏、頸背部肌肉強(qiáng)直。痙攣多見于顏面部、唇部和眼瞼。CDV感染可能經(jīng)過連續(xù)的神經(jīng)系統(tǒng)傳播進(jìn)入而引起腦灰質(zhì)和白質(zhì)疾病，主要由病毒株決定。

（四）視覺癥狀 狗明顯的眼科損傷發(fā)生在視神經(jīng)和視網(wǎng)膜?；家暽窠?jīng)炎時會突然失明，同時伴有瞳孔散大，刺激瞳孔無反應(yīng)。視網(wǎng)膜可退化或壞死，發(fā)生部分或完全的視網(wǎng)膜脫落。

（五）胎盤感染 母犬懷孕期間感染CDV，可能出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎或生弱仔。胎兒在子宮內(nèi)感染犬瘟熱后，原始的免疫因子被損傷，可能出現(xiàn)永久性免疫缺陷。

（六）新生期感染 幼犬在恒齒萌發(fā)前感染犬瘟熱，可能損傷牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)和牙根。幼犬長出的牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)可能有不規(guī)則現(xiàn)象，稍大些的犬可能出現(xiàn)牙釉質(zhì)發(fā)育不全，并可能伴有神經(jīng)癥狀。

（七）混合感染 繼發(fā)細(xì)菌或病毒感染使犬瘟熱的癥狀復(fù)雜化。大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌、敗血桿菌、腺病毒、冠狀病毒等致病微生物可能和犬瘟熱混合感染，死亡率表現(xiàn)各異。

四、病理變化

（一）剖解變化 CDV為泛嗜性病毒，對上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞有特殊的親合力，因此病變分布非常廣泛。部分病例皮膚可出現(xiàn)水皰性或膿皰性皮炎，有些病例足底表皮角質(zhì)增生；呼吸道黏膜有卡他性或濃性滲出液；消化道可見卡他性腸炎、胃黏膜出血、小腸前段出血；部分病犬脾臟和膀胱黏膜出血；在無并發(fā)癥的情況下胸腺萎縮且可能呈膠凍狀；腎上腺皮質(zhì)變性；死于神經(jīng)癥狀的病犬，腦膜充血、出血，腦室擴(kuò)張，腦脊髓液增多。

（二）組織病理學(xué)變化 陳建國等報(bào)道，對病犬進(jìn)行組織學(xué)檢查可以發(fā)現(xiàn)，在很多組織細(xì)胞中有嗜酸性的核內(nèi)和胞漿內(nèi)包涵體，呈圓形或橢圓形，直徑1～2μm。脾竇擴(kuò)張淤血、出血，白髓和紅髓淋巴細(xì)胞明顯減少。肺泡壁增厚，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，肺泡腔內(nèi)充滿大量漿液、紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性白細(xì)胞、脫落的肺泡上皮細(xì)胞，在肺小葉的局部區(qū)域可見肺泡壁破裂發(fā)生肺氣腫，肺小葉間隔增寬，細(xì)支氣管壁炎性增厚。淋巴結(jié)被膜疏松、水腫、增厚，副皮質(zhì)淋巴竇和髓質(zhì)淋巴竇擴(kuò)張，其內(nèi)充滿大量漿液、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等。腸上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，腸腔內(nèi)充滿大量的粘液、壞死脫落的上皮細(xì)胞、中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞等，腺上皮粘液變形，杯狀細(xì)胞增多，有嗜酸性白細(xì)胞反應(yīng)，黏膜下層水腫、增厚，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、出血。扎西英派等報(bào)道脊髓灰質(zhì)中神經(jīng)細(xì)胞腫脹，染色質(zhì)溶解，神經(jīng)細(xì)胞周圍水腫，白質(zhì)有大量空泡，因脫髓鞘而呈海綿狀變化。

五、診斷

根據(jù)流行病學(xué)資料和臨床癥狀，可以作出初步診斷。包涵體檢查是診斷犬瘟熱的輔助方法，最后的確診需要依靠病毒的分離，病毒特異性抗原或抗體的檢測和特異性核酸檢測。

（一）包涵體檢查 包涵體檢查是診斷犬瘟熱的重要輔助方法。包涵體主要存在于膀胱黏膜、支氣管上皮細(xì)胞和腎盂上皮細(xì)胞內(nèi)。包涵體多數(shù)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，1個細(xì)胞可能有1～10個多形包涵體，呈圓形或橢圓形。

（二）電鏡及免疫電鏡檢查 這是檢查確定CDV感染簡便快速的方法，制備電鏡樣品方法有：磷鎢酸（PTA）負(fù)染色法、液相免疫電鏡和超薄切片法。電鏡觀察的最佳病料是糞便，該診斷法從制樣到鏡下觀察，整個過程只需要2～3 h，可用于快速檢查CDV粒子。

（三）病毒的分離培養(yǎng) CDV是具有囊膜的病毒，結(jié)構(gòu)較脆，易被光和熱滅活，對環(huán)境的抵抗力非常弱，因此病毒的分離成功率很低。病料采樣部位、時間、樣品的處理、病程類型、發(fā)病動物的抗病毒抗體的水平等因素對病毒分離成功與否有一定的影響，但最主要的是分離病毒的載體是否敏感和有效。閆喜軍報(bào)道了我國犬瘟熱病毒強(qiáng)毒株HBF-1培育成功，對研究犬瘟熱發(fā)病機(jī)理以及犬瘟熱疫苗的研究具有重要意義。

（四）動物回歸試驗(yàn) 雪貂最易感，死亡率接近100%，任何途徑接種后均可在8～14 d內(nèi)死亡，或者選用斷奶15 d后的幼犬，皮下、肌肉或腹腔注射10倍稀釋病料懸液3～5 ml。也可在雞胚、小鼠、倉鼠中適應(yīng)生長，但敏感性較低。

（五）血清學(xué)診斷 劉潤珍等用特異CD高免血清與金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）致敏，用協(xié)同凝集試驗(yàn)檢測CDV，僅3～5 min就可獲得診斷結(jié)果。吳曙光等用CDV雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）弱毒疫苗免疫綿羊制備瓊脂擴(kuò)散抗體，用病貉肝臟制備瓊脂擴(kuò)散抗原，建立了瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)方法。與瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)相比較檢出率提高20%。ELISA可用于評估犬瘟熱的免疫和檢測犬瘟熱病毒。Soma T等對比免疫過氧化物酶染色和抗體中和試驗(yàn)檢測抗體效價(jià)，結(jié)果顯示：免疫過氧化物酶染色可以檢測到感染早期低水平的抗體。袁書智等應(yīng)用直接熒光抗體染色法對CDV檢測，可作為CDV是否感染的指標(biāo)以及CD生前和死后診斷方法之一。Oyedele OI等建立了蝕斑減少中和法，評價(jià)疫苗接種效果和幼犬感染CDV的危險(xiǎn)性。蘇建青利用雙抗體夾心的原理，建立了犬瘟熱病毒膠體金免疫層析診斷試紙條。

（六）分子生物學(xué)診斷 王宏俊等采用地高辛標(biāo)記的cDNA為探針建立核酸探針檢測CDV的方法，該方法特異性強(qiáng)、靈敏度高（0.1pg），臨床初步應(yīng)用結(jié)果表明該方法完全適用于臨床檢測。Frisk A L等用RTPCR方法檢測臨床疑似病例樣品中的犬瘟熱病毒核衣殼蛋白基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：盡管所選取的引物的位置對RT-PCR的敏感性有很大的影響，但是這種核酸檢測系統(tǒng)在對犬瘟熱的生前診斷中表現(xiàn)出高度的特異性和敏感性。劉彩玉等根據(jù)GenBank中犬瘟熱病毒H基因保守序列設(shè)計(jì)合成了內(nèi) (FIP，BIP)、外 (F3，B3)2 對引物。通過對反應(yīng)條件中內(nèi)、外引物的比例、dNTP濃度、Mg2+濃度、反應(yīng)溫度和時間等條件逐一優(yōu)化，成功建立了犬瘟熱病毒的RT-LAMP檢測方法。該方法與常規(guī)RT-PCR檢測方法相比靈敏度高100倍。

六、防治

在CD的預(yù)防與治療時，要考慮細(xì)胞免疫與體液免疫兩方面的因素。

（一）預(yù)防 CDV滅活苗或麻疹病毒疫苗都不能提供動物持久的免疫力，目前用于犬和經(jīng)濟(jì)動物的疫苗基本上是弱毒疫苗。但是弱毒疫苗的不足之處是熱不穩(wěn)定，對某些免疫缺陷幼犬和野生食肉動物的不安全性以及發(fā)生變態(tài)反應(yīng)等，因此，人們已開始使用新技術(shù)研制新型疫苗，包括基因工程亞單位苗、重組病毒苗以及核酸疫苗等。

母源抗體可通過初乳轉(zhuǎn)移給仔犬，幼犬母源抗體的半衰期是8.5 d，多數(shù)仔犬的母源抗體在8～12周齡開始減弱，15周齡消失。另外可給犬注射犬瘟熱單克隆抗體、犬瘟熱免疫血清、免疫球蛋白、干擾素等。當(dāng)血清中母源抗體下降到1:20以下時較易感，1:100以上時通常不易感，因此血清中和抗體滴度1:100是免疫接種的指示滴度。母源抗體滴度不明的幼犬，一般初免為6周齡，二免為8～9周齡，三免為10～11周齡，以后每年接種一次。

（二）治療 治療原則為對癥治療，控制細(xì)菌繼發(fā)感染，維持體液平衡，增強(qiáng)抵抗力，控制神經(jīng)癥狀。良好的護(hù)理是治療成功的關(guān)鍵。治療CD時一定盡早在大劑量使用高效價(jià)免疫血清的同時，進(jìn)行以防止繼發(fā)感染為中心的對癥治療與增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的治療，對于表現(xiàn)出神經(jīng)癥狀的病犬，治療的意義不大，癥狀進(jìn)一步惡化者，可以考慮安樂死。

治療方法：干擾素700萬IU，肌注，連用5 d，犬瘟熱病毒單克隆抗體5 ml，肌注，連用3～5 d；消炎：使用適宜的的廣譜抗菌藥并配合抗病毒藥物，靜注，注意不要長期使用一種抗菌藥，適量使用退燒藥。輸液以5%葡萄糖溶液、乳酸林格氏液為主，配以VC、VB6、ATP、輔酶A，在飲欲、食欲恢復(fù)前，保證每天輸液量不低于400 ml。另外可配合中藥治療，如金銀花12 g，連翹12 g，板藍(lán)根12 g，黃柏15 g，黃芩12 g，水牛角15 g，玄參12 g，生地12 g，知母12 g，甘草15 g，水煎，1 d1劑，分2次經(jīng)口給予。以上方法連用5 d后，觀察病犬情況，再根據(jù)情況進(jìn)行治療。

另一些最新的研究報(bào)道如：Alloferon1是從麗蠅體內(nèi)分離出的活性多肽，體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明對犬瘟熱病毒感染的小鼠有明顯的保護(hù)作用，有望成為犬瘟熱防治的一種新型藥物?？诜酵子⑩c與靜脈內(nèi)注射鹽酸普魯卡因聯(lián)合應(yīng)用治療神經(jīng)型犬瘟熱有良好的效果。體內(nèi)外試驗(yàn)證明利巴韋林（RIB）能夠抑制麻疹病毒的復(fù)制。EICAR是利巴韋林的類似物，在抑制CDV復(fù)制方面的活性強(qiáng)于利巴韋林，也同樣均有濃度和時間依賴性。金絲桃素為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物的提取物，在先毒后藥情況下可以有效抑制犬瘟熱病毒的增殖。

（略）