主動免疫治療習(xí)慣性流產(chǎn)的療效研究*

李 睿 王宗軍 張業(yè)霞 李澤武

(菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校病原學(xué)教研室，山東 菏澤 274030)

習(xí)慣性流產(chǎn)，尤其原因不明的流產(chǎn)，目前在國內(nèi)外仍屬產(chǎn)科的難題之一。目前，國內(nèi)治療此類患者仍大部分以常規(guī)安胎保胎治療為主，或中藥安胎治療，但療效不一[1]。近年來，國內(nèi)部分大醫(yī)院開始探討用免疫療法治療不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)，但鑒于免疫治療不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)的機(jī)理仍不太清楚，總結(jié)病例較少，故免疫療法治療不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)仍在探討之中。我們自2000年以來, 對門診習(xí)慣性流產(chǎn)的病例建立常規(guī)病因篩查, 對原因不明的原發(fā)性習(xí)慣性流產(chǎn)病例進(jìn)行主動免疫治療，取得較好療效?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料

1.1研究對象 為我院門診2000年10月至2009年9月連續(xù)流產(chǎn)3次或3次以上，年齡在22～39歲之間，平均年齡25.15歲，經(jīng)門診診斷為習(xí)慣性流產(chǎn)的102例患者，經(jīng)篩查后，有59例未找出病因, 診為原因不明習(xí)慣性流產(chǎn), 她們的配偶身體健康，全血常規(guī)正常，甲、乙、丙肝炎病毒及 HIV 病毒檢測陰性，精液常規(guī)分析在正常范圍內(nèi)，性生活正常，夫婦雙方染色體核型分析未發(fā)現(xiàn)異常。排除遺傳、解剖、感染、內(nèi)分泌及自身免疫等引起的習(xí)慣性流產(chǎn)。

1.2方法

1.2.1一般情況 詳細(xì)詢問患者現(xiàn)病史、既往史、月經(jīng)史、生育史、遺傳史等情況。

1.2.2婦科常規(guī)檢查 優(yōu)生四項(xiàng)(TORCH)；不孕習(xí)慣流產(chǎn)抗體系列：抗精子抗體(AS-Ab)、抗子宮內(nèi)膜抗體(EM-Ab)、抗卵巢抗體(AO-Ab)、抗心磷脂抗體(ACA-Ab)、抗HCG抗體(HCG-Ab)、抗透明帶抗體等；激素系列：雌二醇(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH )、黃體生成素(LH)、催乳素(PRL)、睪酮(T)、甲狀腺功能(T3、T4)；子宮、輸卵管造影；婦科盆腔B超，婦科常規(guī)檢查及陰道分泌物涂片。

1.2.3方法 夫妻雙方對主動免疫治療有充分的了解, 并樂意接受治療。抽取其丈夫肘靜脈血30 ml加入適量肝素鈉抗凝，取淋巴細(xì)胞分離液(美國 CE2 DARLANE)置于滅菌離心管內(nèi)，將血液沿管壁徐徐加入離心管，使血液重疊于淋巴細(xì)胞分離液上(分離液與血液體積比例為1︰1)，兩者之間有一明顯界面，用水平離心機(jī)以5000～ 6000 r /min離心15 min。離心后管內(nèi)容物分為三層：上層為血漿，中間層為分離液，底層為紅細(xì)胞和多形白細(xì)胞，在上、中層液體界面可見乳白色混濁的單個核細(xì)胞層，用無菌吸管輕輕插到白膜層，沿試管壁周緣吸取該層單個核細(xì)胞(PBMC)，移入另一試管，用 RPMI1640培養(yǎng)液洗滌三遍，2500 r /min離心5 min。將淋巴細(xì)胞分離液分離的淋巴細(xì)胞移入尼龍毛柱 , 37℃下孵育 30 min后，洗去T淋巴細(xì)胞，然后擠壓洗下B淋巴細(xì)胞，用無菌生理鹽水離心洗滌3次，計(jì)細(xì)胞數(shù)，調(diào)整 B淋巴細(xì)胞數(shù)達(dá)( 2 ～3)×107個 /ml，最后用生理鹽水恢復(fù)1 ml。于妻子前臂掌側(cè)皮內(nèi)注射5個皮丘, 每個皮丘0.2 ml，每次間隔1周，共6次，即孕前注射3次，注射后用比林氏自然排卵預(yù)測法指導(dǎo)患者盡早妊娠，治療后半年以上未妊娠者，再給予4次免疫即可讓其懷孕，發(fā)現(xiàn)懷孕后再注射3次，間隔同上。對孕期治療3次后仍有先兆流產(chǎn)癥狀的患者，再增強(qiáng)治療2～4次。

2 結(jié) 果

接受淋巴細(xì)胞主動免疫治療的患者59例都妊娠，其中9例早中期再次發(fā)生流產(chǎn)，妊娠32周以上者50例，成功率為85%。隨訪至今，最大的為9歲，最小的妊娠33周，出生后的嬰幼兒均發(fā)育正常。

3 討 論

生殖免疫學(xué)認(rèn)為不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)絕大多數(shù)與免疫因素有關(guān)，有研究認(rèn)為可能是由于胚胎抗原的免疫低反應(yīng)性所致，即患者由于對胚胎同種異體抗原無法產(chǎn)生足夠的封閉抗體而使胚胎得不到免疫防護(hù)而流產(chǎn)[2]；或是夫妻雙方HLA不相容性過弱，不能產(chǎn)生胎兒保護(hù)性抗體而使胎兒流產(chǎn)所致[3]；還有研究認(rèn)為可能與CD8 細(xì)胞數(shù)量下降，CD4/ CD8 比率上升有關(guān)[4-5]。從現(xiàn)代生殖免疫觀點(diǎn)看，習(xí)慣性流產(chǎn)的病因可能由母體對胚胎抗原免疫反應(yīng)不足或母體免疫系統(tǒng)不能識別胚胎抗原而導(dǎo)致流產(chǎn)?；谠摾碚搰鴥?nèi)外學(xué)者采用丈夫或無關(guān)個體白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等對母體進(jìn)行免疫治療，目的是誘導(dǎo)母體對胚胎抗原或相關(guān)同種異體抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)性。

維持正常妊娠最重要的是伴隨妊娠而產(chǎn)生的特異性免疫抑制因子，包括體液因子(封閉抗體)和細(xì)胞因子(抑制免疫細(xì)胞)，以及非特異性抑制因子，這些因子作用的結(jié)果，使母體的細(xì)胞免疫功能降低，體液免疫功能增強(qiáng)，胎兒胎盤抗原性減弱，妊娠順利進(jìn)行。封閉抗體存在于妊娠婦女血清中，可通過與胎兒胎盤滋養(yǎng)葉抗原結(jié)合或母體淋巴細(xì)胞結(jié)合而防止胚胎父系抗原被母體免疫系統(tǒng)識別和殺傷。封閉抗體的缺乏是習(xí)慣性流產(chǎn)的重要原因之一[6]。如母胎滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原一致 ,胎兒則不能激發(fā)母體產(chǎn)生封閉抗體，此時可用與母體滋養(yǎng)層細(xì)胞膜抗原不一致的淋巴細(xì)胞(如丈夫或第3者淋巴細(xì)胞)給流產(chǎn)婦女行皮下注射，促使其產(chǎn)生封閉抗體，此乃原發(fā)性習(xí)慣性流產(chǎn)的治療依據(jù)。

原因不明的習(xí)慣性流產(chǎn)婦女血清中缺乏該封閉抗體，但通過注射丈夫的PBMC可刺激機(jī)體產(chǎn)生封閉抗體[2,7]。本研究成功50例中，其中40 例治療前HLA-ABC抗體均為陰性，而治療后HLA-ABC抗體均為陽性，說明治療有效。

不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)病機(jī)制及病因尚不完全清楚, 目前認(rèn)為絕大多數(shù)與免疫因素有關(guān)，但由于檢測一些免疫項(xiàng)目(HLA、CD4、CD8等)的設(shè)備昂貴、技術(shù)要求高，故給診斷帶來困難，從而限制了其治療的開展[5]。我們用PBMC皮內(nèi)注射治療的59例不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)病人中，有效率達(dá) 85%，方法安全可靠，對孕婦及胎兒未發(fā)現(xiàn)任何負(fù)反應(yīng)。

用丈夫淋巴細(xì)胞主動免疫法治療原發(fā)性習(xí)慣性流產(chǎn)，其免疫反應(yīng)性強(qiáng)，發(fā)生快、持續(xù)時間短，是一種簡便可行的方法，目前未發(fā)生明顯的副反應(yīng)。本研究用丈夫的血液分離PBMC進(jìn)行治療，較無關(guān)個體免疫原來說，可減少潛在的血源性感染的危險(xiǎn)性[2]。此方法經(jīng)濟(jì)方便，病人易接受，具有較可靠的臨床效果及應(yīng)用價值。

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[4] 趙愛民,林其德,周涵春,等.原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化[J].中華婦產(chǎn)科雜志,1994, 29 (4) : 227-229.

[5] 李弘,王懷秀,王靜,等. 淋巴細(xì)胞注射治療免疫因素引起的習(xí)慣性流產(chǎn)[J].山西醫(yī)藥雜志,2003,32(4): 308-309.

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