EBV感染與嬰兒肝炎綜合征相關分析

山東省淄博市周村區(qū)人民醫(yī)院檢驗科(255300) 況紅星

嬰兒肝炎綜合征簡稱嬰肝(IHS)是指 1歲以內的嬰兒(包括新生兒)因病毒、細菌、弓形體等感染和全身性感染引起的中毒性肝炎、先天性代謝異常以及肝內或肝外膽道阻塞或畸形等原因引起的肝臟炎癥的臨床癥候群,常發(fā)生各種合并癥或并發(fā)癥,其預后各不相同,重者可致死亡或留有嚴重的神經系統(tǒng)后遺癥[1-2]。研究資料顯示,引起該綜合征的感染因子很多,包括乙型肝炎病毒、巨細胞病毒、EB病毒、單純皰疹病毒、風疹病毒等。近年來,人們對ISH的研究主要集中在 CMV感染上,而對由 EBV感染導致的 ISH報道較少。

本研究對 80例 ISH患兒和 40例正常對照嬰兒進行了 EBV VCA-IgM的檢測。對患兒外周血細胞EB基因進行定量檢測,PCR-Southern檢測患兒咽分泌物 EBV DNA。探討 ISH與 EBV感染的關系,借以對該病進行早期預防、治療干預,延緩各種急慢性并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展,從而改善患兒的生活質量。

1 主要儀器和試劑

1.1 主要儀器 1)DNA擴增儀 480型(美國 PE公司)。2)PE Geneamp5700型實時熒光定量 PCR分析儀(美國 ABI公司)。

1.2 主要試劑 1)酶聯(lián) EBV VCA-Ig抗體測定試劑盒(德國 NOVATEC公司)。2)EBV PCR熒光檢測試劑盒(中山大學達安基因股份有限公司)。

2 資料來源及方法

2.1 患兒組 選擇 2006年 3月至 2009年 6月我院兒科病區(qū)收治的 80例 ISH患兒作為研究對象,其中男 41例,女 39例,年齡 1天至 11月,平均(3.2±2.6)個月。80例患兒均具有黃疸、肝脾腫大、肝功異常等癥狀及體征,符合 ISH的診斷標準[3]。

2.2 對照組 選擇 2006年 3月至 2008年 6月在我院健康查體的兒童 40例,其中男 20例,女 20例,年齡 1個月至 1歲,平均(3.3±2.8)個月。研究組和對照組嬰兒的性別、年齡間差異無顯著性。

2.3 方法 1)PCR-Southern檢測咽分泌物 EBVDNA。2)實時熒光定量 PCR技術檢測外周血 EBVDNA。3)酶聯(lián) EBV VCA-IgM測定。

2.4 統(tǒng)計學分析 采用計數(shù)資料卡方檢驗中的四格表資料的 X2檢驗和四格表精確檢驗法,SPSS11.6統(tǒng)計軟件對實驗結果進行統(tǒng)計學分析。

3 結 果

3.1 EBV特異性 IgM抗體檢測結果 ISH患兒組與正常對照組血清病毒特異性 IgM抗體陽性率比較,ISH組 80例,EB-VCA-IgM為 11.25(9/80),正常對照組 40例,EB-VCA-IgM為 2.5(1/40)。與對照組比較,P＜0.01。

3.2 PCR檢測 EBV DNA結果 PCR-Southern檢測咽分泌物 EBV DNA的結果,及 EBV BamHⅠ-W片段擴增產物長度為 129bp,部分標本 Southern雜交結果 ,見圖 1。

圖1 PCR-Southern雜交檢測部分患兒咽分泌物EBV DNA結果 Lane 1：陽性對照 B95-8細胞;Lane 2：陰性對照 Ramos細胞;Lane 3,5,6,7,9,10,15,16：EBV陽性標本;Lane 4,8,11,12,13,14：EBV陰性標本。

3.3 實時熒光定量 PCR檢測血標本 EBV DNA結果見表 1。

表1 嬰兒肝炎綜合征患兒組與對照組PCR檢測結果

4 討 論

ISH是一組由多種病因引起的病理及臨床表現(xiàn)基本相似的臨床癥候群,其臨床主要表現(xiàn)為黃疸、肝脾腫大及肝功能異常,多發(fā)生在 1歲以內的嬰兒,是主要由病毒感染引起的一組綜合征[3]。EB病毒的原發(fā)感染在嬰幼兒往往呈隱形感染,臨床可表現(xiàn)出上呼吸道病毒感染癥狀,還因為 B細胞的大量激活而引起淋巴結以及肝脾腫大,并可引起肝損傷[4]。

EBV感染在小兒非常普遍,我國 3～5歲兒童VCA-IgG抗體陽性率達 90%以上[5]。幼兒期 EBV感染多呈隱性而無臨床癥狀,少數(shù)兒童 EBV感染后臨床上可以出現(xiàn)上呼吸道病毒感染癥狀以及心肌炎、嬰兒肝炎、過敏性紫癜、嗜血細胞綜合征等多種疾病[6]。嬰兒 EBV感染后導致嬰兒肝炎的主要臨床表現(xiàn)同巨細胞病毒性肝炎相似,主要表現(xiàn)為肝功能損害和肝脾腫大。

本研究中,25例患兒咽分泌物 EBV DNA陽性,16例患兒外周血 EBV DNA陽性,兩者檢出率明顯高于正常對照組,其中咽分泌物 EBVDNA的檢出率更高,表明咽上皮細胞和唾液腺是 EBV增殖的重要場所。

VCA-IgM是 EBV原發(fā)感染的標志,有研究認為VCA-IgM僅見于 EBV的原發(fā)感染。本研究中 80例患兒中 9例 VCA-IgM陽性,提示部分嬰兒肝炎是由EBV的原發(fā)感染所致?；純航M VCA-IgM陽性率與正常對照組相比差異無顯著性,可能與患兒免疫功能低下,產生 IgM能力弱以及 VCA-IgM檢測的靈敏度有關。

血清 VCA-IgM陽性率低于外周血和咽分泌物EBV DNA陽性率,可能由于研究對象均為 1歲以內的患兒,其細胞和體液免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟,產生IgM能力相對成人來說較弱,部分患兒病毒感染后不能有效產生免疫應答。

EBV感染參與部分 ISH的發(fā)生發(fā)展,臨床對年齡較小伴肝功能損害的患兒,在排除宮內感染,尤其巨細胞病毒、乙肝病毒等感染后,應考慮到 EBV感染的可能。

[1] 姚楨.嬰幼兒肝炎綜合征的研究進展[J].臨床肝膽病雜志,1994,10(1)：12

[2] 朱啟镕,王曉紅,王建設.嬰兒肝病綜合征診治修訂方案[J].中華傳染病雜志,2004,22(5)：357

[3] 魏克倫.兒科疾病診治指南[M].沈陽：東北大學出版社,1996：215

[4] Shibyya A,TsuchihashiT,WatanabeM,etal.Severe chronic active epstein-barr infection associated with multiple necrotic Icsions in the liver[J].Hepatol Res,2003,25：447

[5] 吳葆菁,李文益,張玉蘭,等.小兒 EB病毒感染相關疾病臨床研究[J].臨床兒科雜志,2003,21(8)：455

[6] Okan M.Overview and problematic standpoints of severe chronic active Epstein-Barr virus infection syndrome[J].Oncol Hematol,2002,(44)：273