類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型在中醫(yī)藥研究中的進(jìn)展及思考

柴鐵玲

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎又稱(chēng)類(lèi)風(fēng)濕(rhenmatoid arthritis, RA)，是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對(duì)稱(chēng)性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病。該病具有易復(fù)發(fā)、難治愈的特點(diǎn)，其致殘率較高，發(fā)病1年內(nèi)致殘率可高達(dá)20%，10年內(nèi)可達(dá)60%左右[1]。目前西醫(yī)治療RA 尚無(wú)特效方法，主要采用非甾體類(lèi)、抗生素、激素類(lèi)藥物和手術(shù)治療，這些治療只能暫時(shí)控制或緩解病情，而且長(zhǎng)期服藥毒性和不良作用較大。中醫(yī)藥在防治RA方面的巨大潛力與優(yōu)勢(shì)正受到廣泛關(guān)注[2]。動(dòng)物模型在中醫(yī)藥治療RA的研究中具有重要的作用，本文就現(xiàn)階段中醫(yī)藥研究中所用的RA動(dòng)物模型進(jìn)行總結(jié)，并根據(jù)中醫(yī)臨床辨證的特點(diǎn)，對(duì)建立符合中醫(yī)藥研究需要的RA動(dòng)物模型提出一些自己的看法。

1 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀

1.1 單純疾病模型

1.1.1 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型

佐劑性關(guān)節(jié)炎模型是細(xì)菌學(xué)家Freund于上世紀(jì)五十年代創(chuàng)立，它是建立免疫性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的基本方法。該方法采用大鼠足拓部皮下注射經(jīng)滅活的卡介苗液體石蠟乳劑進(jìn)行造模。該方法簡(jiǎn)單易行，其病理表現(xiàn)也類(lèi)似于RA，在中國(guó)被廣泛用于RA或防治RA藥物的研究[3]。

1.1.2 膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型

膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型是Trentham等于1977 年創(chuàng)立的。該方法通過(guò)在大鼠背部皮內(nèi)、尾根部皮內(nèi)和足拓部注射天然膠原的醋酸溶液與等量的弗氏完全佐劑或不完全佐劑混合成的穩(wěn)定乳劑進(jìn)行造模。該造模方法臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與人類(lèi)RA密切相關(guān)，是篩選和研究治療RA藥物的理想模型[4]。

1.1.3 卵蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型

該模型最早由Dumonde和Glynn于1962年創(chuàng)立的。該模型造模時(shí)，將卵蛋白溶解于生理鹽水，與等量弗氏佐劑混勻，注入動(dòng)物背部皮下致敏，連續(xù)3周致敏，末次注射后2周，于關(guān)節(jié)內(nèi)注入5 mg溶解的卵蛋白[5]。

該模型可在兔、羊等動(dòng)物上復(fù)制，而且不需要使用近交系動(dòng)物，炎癥的發(fā)生易于復(fù)制，且關(guān)節(jié)相對(duì)較大，比較適用于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療研究。

除以上三種疾病模型外，常用的RA疾病模型還有：蛋白多糖誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、軟骨低聚體基質(zhì)蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、輔劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、Avridine 誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、樸日斯烷誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、油誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、 鏈球菌誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型、 佐劑角叉菜膠誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型等[6]。

1.2 中醫(yī)證候動(dòng)物模型

1.2.1 腎虛痹證模型

中醫(yī)認(rèn)為類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎屬于痹證，為久治不愈的慢性疾病，久病多至虛，而且多為腎虛。艾景錄等以Ⅱ型膠原免疫注射制作實(shí)驗(yàn)性痹證模型，復(fù)加雄鼠雌激素應(yīng)用法和雌鼠卵巢切除法所致腎虛，建立了腎虛痹證模型[7]。

1.2.2 風(fēng)寒濕痹證模型

王安民等將大鼠放入冷水中游泳后再注射Ⅱ型膠原作為抗原，觀察寒濕因素對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的影響，結(jié)果顯示外界寒濕因素，能加重疾病的病變，該模型可用于中醫(yī)痹證的研究[8]。

中醫(yī)認(rèn)為風(fēng)、寒、濕邪常同時(shí)發(fā)生，為痹證的外在原因，而虛體是痹證的內(nèi)在原因。中醫(yī)所說(shuō)的虛體主要與免疫功能低下有關(guān)。金祝秋等運(yùn)用Frenund`s完全佐劑合用風(fēng)寒濕因素的方法成功建立了大鼠痹證病理模型，該模型比單用Frenund`s完全佐劑有炎癥周期長(zhǎng)、模型穩(wěn)定的特點(diǎn)，更適合慢性炎癥的研究[9]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為認(rèn)為脾胃虛弱(尤其是脾虛) 在痹證(類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的發(fā)病和防治中均有著不可忽視的作用。肖誠(chéng)等以大黃瀉下加饑飽失常造成脾虛模型，在此基礎(chǔ)上加以II型膠原誘發(fā)脾虛痹證(類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)，以此建立脾虛痹證模型。并利用芎附散對(duì)該模型進(jìn)行了方藥反證[10]。

肖長(zhǎng)虹等在大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的基礎(chǔ)上，通過(guò)風(fēng)寒濕與風(fēng)濕熱兩種不同的條件刺激以其與葡萄糖球菌腸毒素B外涂共同作用，制出了風(fēng)寒濕痹與風(fēng)濕熱痹RA模型。

2 目前中醫(yī)藥研究中使用RA動(dòng)物模型存在的問(wèn)題

以上動(dòng)物模型按其造模方法是否聯(lián)系RA的證候特征，可以分為兩大類(lèi)。一類(lèi)不考慮中醫(yī)的證候特點(diǎn)，僅為疾病模型；一類(lèi)考慮中醫(yī)的證候特點(diǎn)，在建立疾病模型的同時(shí)，加入中醫(yī)病因因素。

對(duì)于第一類(lèi)疾病模型，最大的優(yōu)勢(shì)在于模型較為成熟，癥狀、體征和理化指標(biāo)較為明確，造模時(shí)可明確判斷，重復(fù)性好，該類(lèi)模型可用于病理和治療機(jī)制的研究。但是這類(lèi)模型與中醫(yī)理論關(guān)系不大，只是與疾病特異性的病理變化具有相關(guān)性，沒(méi)有明顯的臨床病因?qū)W基礎(chǔ)，難以體現(xiàn)中醫(yī)證候的特征[11]。

對(duì)于中醫(yī)而言，同一種疾病，由于病因或體質(zhì)不同，或處于不同的發(fā)展階段，而出現(xiàn)同病異證的現(xiàn)象。按照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則的內(nèi)容，目前類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床中主要有濕熱痹阻證、寒濕痹阻證、腎氣虛寒證、肝腎陰虛證、瘀血痹阻證等5種證候類(lèi)型。

雖然有學(xué)者利用方藥對(duì)模型證候?qū)傩赃M(jìn)行反證，但由于方證的非唯一對(duì)應(yīng)性、一方對(duì)多證、方證不對(duì)應(yīng)并非絕對(duì)無(wú)效等問(wèn)題，使得以方測(cè)證推理的嚴(yán)密性日益受到質(zhì)疑，故而這種認(rèn)定不具有特異性。

對(duì)于第二種造模方法，在建立疾病動(dòng)物模型過(guò)程中加入中醫(yī)病因因素，建立相應(yīng)的模型，在有些文章中稱(chēng)為病證結(jié)合動(dòng)物模型，這也是目前中醫(yī)藥研究中應(yīng)用較多的造模方法[12]。筆者認(rèn)為這類(lèi)模型應(yīng)屬于病因病理結(jié)合模型。

這類(lèi)造模方法既運(yùn)用了中醫(yī)的發(fā)病學(xué)說(shuō)，又考慮了西醫(yī)的致病原理，顯示出各自對(duì)病證發(fā)生、發(fā)展的致病特點(diǎn)。但病因造模和病理造模兩種因素簡(jiǎn)單的疊加，即病+證的1+1的模式，不符合辨證是中醫(yī)對(duì)疾病的診斷過(guò)程和分類(lèi)方法這一基本原則。而且單純的外在致病因素對(duì)于中醫(yī)證候的產(chǎn)生而言并非是直接的發(fā)病因素，多為誘發(fā)因素而已，其主觀性和差異性較大，該方法存在證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)困難、穩(wěn)定不好等問(wèn)題。

3 病證結(jié)合動(dòng)物模型符合RA中醫(yī)藥研究的需要

“病”與“證”分別屬于西醫(yī)、中醫(yī)兩個(gè)不同的醫(yī)學(xué)體系，各自從不同角度對(duì)疾病進(jìn)行認(rèn)識(shí)，兩種認(rèn)識(shí)方法具有各自的優(yōu)勢(shì)。病證結(jié)合動(dòng)物模型將病、證兩種屬性同時(shí)考慮，對(duì)于中醫(yī)藥研究具有較大的優(yōu)勢(shì)。該模型以疾病模型為基礎(chǔ)，具有較好的可信度和重復(fù)性；該模型將宏觀與微觀、整體論與分析論相結(jié)合，在探討疾病生理病理變化的同時(shí)，可探討中醫(yī)證候的特征。目前建立的病證結(jié)合動(dòng)物模型有小型豬心肌缺血血瘀證動(dòng)物模型、高血壓肝火上炎證模型等[13，14]。

對(duì)于病證結(jié)合動(dòng)物模型的制備許多學(xué)者提出了許多新的觀點(diǎn)。例如宋劍南提出的“動(dòng)物證候?qū)W”，認(rèn)為疾病動(dòng)物在其疾病進(jìn)程中的某個(gè)時(shí)段應(yīng)出現(xiàn)與該疾病臨床辨證四診相同的中醫(yī)證候，并可因證候演變、造模方法和動(dòng)物種屬的差異出現(xiàn)同病異證或異病同證現(xiàn)象[15]。

崔軼凡等提出，通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查和無(wú)監(jiān)督方法，建立疾病的證候診斷標(biāo)準(zhǔn)，以此為標(biāo)準(zhǔn)，從多種病證結(jié)合動(dòng)物模型建立方法中選擇出與臨床最吻合的一種，再通過(guò)方證相應(yīng)及方證不相應(yīng)對(duì)動(dòng)物模型的進(jìn)行反證，評(píng)價(jià)其證候?qū)傩訹16]。

趙慧輝等通過(guò)分析目前使用的幾種病證結(jié)合證候動(dòng)物模型判定方法的不足，提出采用與臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的等效對(duì)應(yīng)進(jìn)行動(dòng)物模型證候?qū)傩缘脑u(píng)價(jià)，詳細(xì)闡述了采用該方法進(jìn)行動(dòng)物模型證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)中的幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題：(1)證候臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)中的宏觀指標(biāo)與模型動(dòng)物宏觀指標(biāo)的等效對(duì)應(yīng)；(2)證候臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)中的微觀指標(biāo)與模型動(dòng)物微觀指標(biāo)的等效對(duì)應(yīng)；(3)證候臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)中的宏觀指標(biāo)與模型動(dòng)物微觀指標(biāo)的等效對(duì)應(yīng)[17]。

綜合以上觀點(diǎn)和方法，筆者認(rèn)為通過(guò)對(duì)公認(rèn)的RA疾病動(dòng)物模型進(jìn)行動(dòng)態(tài)的證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)，可建立符合中醫(yī)臨床辨證實(shí)際的RA病證結(jié)合動(dòng)物模型。

由于動(dòng)物依從性很差，動(dòng)物四診信息的獲取存在困難和不確定性，而且缺乏判別動(dòng)物行為表征內(nèi)涵的依據(jù)，所以目前模型動(dòng)物證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)方法存在著不標(biāo)準(zhǔn)、認(rèn)可度低的問(wèn)題。如果能尋找到溝通證候臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)與動(dòng)物宏觀和微觀指標(biāo)之間的橋梁，實(shí)現(xiàn)臨床辨證方法向動(dòng)物證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)方法的轉(zhuǎn)化，就可以建立標(biāo)準(zhǔn)、公認(rèn)的動(dòng)物證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)方法。

在同一疾病狀態(tài)下，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類(lèi)有著相似的病理生理基礎(chǔ)，在人類(lèi)疾病病理生理層面的變化伴隨著四診信息的出現(xiàn)，而在動(dòng)物這些病理生理層面的變化伴隨著行為表征的改變。因此，臨床四診信息與動(dòng)物行為表征間的關(guān)系可通過(guò)病理生理層面與臨床四診信息高度相關(guān)的特異性生物學(xué)指標(biāo)(群)作為溝通的媒介，實(shí)現(xiàn)臨床辨證方法到動(dòng)物證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)方法的轉(zhuǎn)化。

4 建立RA病證結(jié)合動(dòng)物模型對(duì)中醫(yī)藥研究具有重要意義

本文提出以RA疾病動(dòng)物模型為研究對(duì)象，建立符合中醫(yī)臨床辨證實(shí)際的RA病證結(jié)合動(dòng)物模型。通過(guò)RA病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究，可獲得從疾病到證候的完整信息，既有中醫(yī)特色，又能被西醫(yī)所認(rèn)同，而且對(duì)其他疾病病證結(jié)合動(dòng)物模型的制備也能起到一定的借鑒作用。

[1] 丁永明,傅華,朱靳良,等.關(guān)節(jié)炎對(duì)生活質(zhì)量的影響及防治對(duì)策[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2000,12(10):489-490.

[2] 王薇薇.中醫(yī)治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎淺述[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2010,8(6):71-72.

[3] 周金黃.藥理學(xué)進(jìn)展[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982：176.

[4] Trentham DE,Townes AS,Kang AH. Autoimmunity to type Ⅱcollagen :an experimemntal model of arthritis [J]. J Exp,1977, 146 (3): 857.

[5] Wollheim FA,Telhag H,Henricesson A, et al. Prevention of joint destruction in antigen induced arthritis[J]. Clin Immunopatho1,1994,70 (1):19221.

[6] 劉瓊,王晨瑤,方劍喬.類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2006,12(5):313-316.

[7] 艾景錄,呂愛(ài)平,徐世杰,等.性腺功能異常型腎虛痹證發(fā)生機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,1995,1(1):42-44.

[8] 王安民,呂愛(ài)平,曾曉蓮. 大鼠實(shí)驗(yàn)性痹證模型建立及其病理學(xué)研究[J ] . 中華中醫(yī)骨傷科雜志,1988,4(2) :8-10.

[9] 金祝秋,鄭建生,彭芝配,等.大鼠風(fēng)寒濕痹證模型的建立與前列腺素E2的關(guān)系[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1996,16(1):40-42.

[10] 肖誠(chéng)，李艷，左錚云，等.芎附散對(duì)脾虛痹證(類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎) 模型的影響[J].中醫(yī)雜志,2007,48(11):1016-1019.

[11] 趙慧輝,王偉.病證結(jié)合證候模型研究基本思路[J].中華中醫(yī)藥雜志,2006,21(12):762-764.

[12] 王春田,于靜.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志,2003,30(6):511-512.

[13] 許文玉,王偉,郭淑貞,等.小型豬心肌缺血血瘀證動(dòng)物模型的復(fù)制方法[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào),2008,6(4):409-413.

[14] 屈會(huì)化,趙琰,曲榮波,等.自發(fā)性高血壓大鼠早期中醫(yī)證候的研究[J].中醫(yī)雜志,2008,49(5):446-448.

[15] 宋劍南.論中醫(yī)證候基礎(chǔ)研究的模式和方法[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2007,13(2):81-83.

[16] 崔軼凡,王慶國(guó).病證結(jié)合動(dòng)物模型對(duì)中醫(yī)藥研究的意義及建模方法新思路[J].天津中醫(yī)藥,2009, 26(6):446.

[17] 趙慧輝,郭書(shū)文,王偉.病證結(jié)合動(dòng)物模型判定標(biāo)準(zhǔn)的建立[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,32(6):365.