小兒遺尿分散片的制劑處方篩選與α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚含量測(cè)定＊

陳日來(lái)，陳澤彬，李玉珍，羅奇志，李 成，朱錦善

（1.廣東省深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院，廣東 深圳 518049； 2.廣東省深圳市兒童醫(yī)院，廣東 深圳 518026；3.廣東省深圳市福田人民醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

小兒遺尿方劑包括石菖蒲、益智仁、桑螵蛸、山藥等多味中藥材。小兒遺尿分散片是在我院多年應(yīng)用的小兒遺尿方劑基礎(chǔ)上，通過(guò)提取有效成分、改進(jìn)劑型而制成，近年來(lái)我院用來(lái)治療小兒遺尿癥取得很好的效果[1]。前期藥理實(shí)驗(yàn)表明，處方中石菖蒲所含α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚可能是其主要活性成分。制成小兒遺尿分散片，可提高有效成分的溶解度，且給藥方便，能有效提高患者的服藥順應(yīng)性。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國(guó) Agilent公司），包括GB15BDAD檢測(cè)器、D1316A恒溫箱、GB11A四元泵、GB22A真空脫氣機(jī)、rheodyne7725i手動(dòng)進(jìn)樣器、Cessation工作臺(tái)；梅特勒托利多AG285型電子天平（瑞士梅里達(dá)）；中藥提取罐，旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)；ZPS－4型智能溶出儀。益智仁、桑螵蛸、山藥、遠(yuǎn)志、石菖蒲、覆盤(pán)子、熟地黃、烏藥、金櫻子、炒芡實(shí)、肉桂、炙麻黃等中藥飲片均購(gòu)自深圳市一致藥材公司；α－細(xì)辛醚對(duì)照品（自制，采用峰面積歸一法測(cè)定，含量為99.16％）；β－細(xì)辛醚對(duì)照品（自制，采用峰面積歸一法測(cè)定，含量為99.20％）；小兒遺尿分散片（自制，批號(hào)為090501，090515，090530，規(guī)格為1 g/片）；其他輔料均符合2005年版《中國(guó)藥典（一部）》規(guī)定；試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備工藝

2.1.1 壓片工藝選擇

小兒遺尿分散片以中藥提取物為原料，流動(dòng)性差，引濕性較大。采用直接壓片法壓制時(shí)，主藥與輔料難以均勻混合，粘沖現(xiàn)象嚴(yán)重，片劑難成型；而先將主藥與輔料制成顆粒，則其流動(dòng)性增大，引濕性降低，所制片劑成型性好。因此，筆者選擇濕法制粒壓片。

2.1.2 崩解劑篩選

本方為復(fù)方制劑，成分眾多，有較大的黏性，不易分散，因此在設(shè)計(jì)分散片處方時(shí)應(yīng)從分散片的崩解分散性和可壓性?xún)蓚€(gè)方面考慮。分散片常用的崩解劑有交聯(lián)羥基纖維素鈉、微粉硅膠、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、羥甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等[2]。筆者分別取浸膏、輔料不同量，以1 000片為處方量，崩解時(shí)間、分散均勻性、可壓性為指標(biāo)，篩選輔料的不同配比和最佳處方設(shè)計(jì)。結(jié)果表明，處方4為最佳設(shè)計(jì)，崩解時(shí)間小于60 s，分散均勻性符合要求。最佳處方組成為浸膏150 g、甘露醇60 g、微晶纖維素40 g、低取代羥丙基纖維素30 g、微粉硅膠20 g、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮4 g、硬脂酸鎂2 g、阿斯巴甜2 g、聚乙烯吡咯烷酮適量。具體方案見(jiàn)表1、表2。

2.1.3 矯味劑篩選

小兒遺尿分散片用于兒童，要求口感良好、無(wú)刺激性。中藥復(fù)方提取物口味較苦，加入矯味劑調(diào)整口感可提高患者順應(yīng)性。本試驗(yàn)選用阿斯巴甜作為矯味劑。結(jié)果表明，在最佳處方組合中（處方4）加入2 g的矯味劑阿斯巴甜可明顯改善口感。

表1 輔料配比方案

表2 不同的輔料配比對(duì)崩解時(shí)間、分散均勻性和可壓性的影響

2.1.4 處方與成型工藝確定

藥材干顆粒的處方與制備：取中藥材益智仁、桑螵蛸、山藥、遠(yuǎn)志、石菖蒲、覆盤(pán)子、熟地黃、烏藥、金櫻子、炒芡實(shí)各1 500 g，肉桂、炙麻黃各750 g，投入中藥提取罐提取兩次，第1次1h，第2次45min，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20，加5倍量95％乙醇攪拌，靜置過(guò)夜，濾過(guò)回收乙醇濾液濃縮至適量，干燥，得膏率18％，質(zhì)量為2.2 kg，加淀粉7.5 kg，混合均勻，制成干顆粒為10 kg。

分散片的處方與制備：取藥材干顆粒10 kg，加入微晶纖維素2400g，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮300 g，硬脂酸鎂300 g，微粉硅膠300 g，低取代羥丙基纖維素1 000 g，調(diào)味劑200 g，甘露醇2 000 g，以上原、輔料采用濕法制粒壓片法，共制得15 000片，分為3批，批號(hào)分別為090501，090515，090530。

2.2 α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚含量測(cè)定[2]2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖1 高效液相色譜圖

色譜柱：HypersilODS柱（Agilent公司，250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（60∶40）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：25μL。在此色譜條件下，α－細(xì)辛醚與β－細(xì)辛醚分離度良好，并與其他成分能達(dá)到基線(xiàn)分離。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2.2 溶液制備

取α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚適量，干燥至恒重，精密稱(chēng)定。分別置50mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚對(duì)照品母液，質(zhì)量濃度分別為6.43，23.36 g/L。精密量取α－細(xì)辛醚母液0.5mL、β－細(xì)辛醚母液2.0mL，置10mL容量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，即得含α－細(xì)辛醚1.286 g/L、β－細(xì)辛醚4.672 0 g/L的對(duì)照品溶液。取本品20片，研細(xì)，混勻。精密稱(chēng)取240mg，置25mL具塞三角瓶中，加20mL 50％甲醇，超聲處理30min[3]；取出，放冷至室溫，加50％甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾；精密量取10.0mL濾液，置25mL容量瓶中，加50％甲醇至刻度，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。取按2.1.4項(xiàng)下的工藝制備缺石菖蒲的陰性樣品20片，按供試品溶液制備方法配制陰性對(duì)照品溶液，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。

2.2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：將對(duì)照品溶液分別稀釋1，4，10，16，25倍，注入色譜儀、測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程，α－細(xì)辛醚為 Y=2.83× 107X－0.15×107（r=0.999 6），β－細(xì)辛醚為 Y=2.36×107X－0.120×107（r=0.999 9）。結(jié)果表明，α－細(xì)辛醚質(zhì)量濃度線(xiàn)性范圍為0.054～1.286 g/L；β－細(xì)辛醚質(zhì)量濃度線(xiàn)性范圍為0.187～4.672 g/L。

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液（含α－細(xì)辛醚0.129 g/L和β－細(xì)辛醚0.467 g/L）10μL分別注入色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD分別為0.8％和0.7％（n=5），表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液10μL，分別于0，1，2，4，6時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果α－細(xì)辛醚的 RSD=1.25％，β－細(xì)辛醚 RSD=0.34％，表明供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，精密稱(chēng)定，按供試品溶液制備方法制備溶液測(cè)定。結(jié)果α－細(xì)辛醚平均含量為0.01％（RSD=0.893％），β－細(xì)辛醚平均含量為0.08％（RSD=0.713％），表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：取已知含量樣品粉末約200mg，共6份，精密稱(chēng)定，分別精密加入α－細(xì)辛醚對(duì)照品0.25 mg、β－細(xì)辛醚2.0 mg置錐形瓶中，按供試品溶液制備方法制備溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果α－細(xì)辛醚平均回收率為101.48％，RSD=1.07％（n=6）；β－細(xì)辛醚平均回收率為99.65％，RSD=1.31％（n=6）。

2.2.4 樣品含量測(cè)定

分別取3批號(hào)樣品，各5份，按供試品溶液制備方法配制溶液，進(jìn)樣量為25μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 小兒遺尿分散片含量測(cè)定結(jié)果（n=5）

3 討論

本試驗(yàn)選用微晶纖維素結(jié)合高膨脹率的交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、羥甲基淀粉鈉以及有崩解和黏結(jié)雙重作用的低取代羥丙基纖維素，制得片劑色調(diào)均勻、外觀(guān)良好、有較快的崩解速度，崩解時(shí)限符合要求。

中藥復(fù)方提取物口味較苦，經(jīng)過(guò)對(duì)乳糖、甘露醇、阿斯巴甜和甜橙香精等矯味劑的對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，加入甘露醇，可能對(duì)小兒遺尿癥狀控制有影響，加入適當(dāng)比例的阿斯巴甜后可明顯改善口感，無(wú)刺激性。

小兒遺尿分散片以石菖蒲為君藥，中醫(yī)認(rèn)為其能化痰開(kāi)竅、鎮(zhèn)靜止痙。α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚是石菖蒲揮發(fā)油的主要有效成分[4－5]。采用高效液相色譜法對(duì)該制劑中α－細(xì)辛醚和β－細(xì)辛醚的含量進(jìn)行測(cè)定，方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確。

[1]陳澤彬，陳日來(lái)，陳連劍，等.小兒遺尿分散片中α－細(xì)辛醚的含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010，4（11）：1－2.

[2]董 玉，石任兵，劉 斌.石菖蒲有效部位中α－細(xì)辛醚、β－細(xì)辛醚的含量測(cè)定[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30（5）：340－342.

[3]劉 郁，全紅梅，劉連新.中藥分散片及工藝研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16（6）：538－540.

[4]董小萍，鄧 放.石菖蒲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)展[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，24（1）：60.

[5]楊曉燕，陳發(fā)奎.菖蒲的化學(xué)成分研究概況[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，16（1）：71.