• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黑龍江小麥麥胚多肽的制備及抗氧化功能研究Ⅱ.超濾法精制抗氧化麥胚多肽工藝條件的優(yōu)化

    2011-04-06 09:40:39張洪微楊銘鐸吳瑩瑩賈慶勝
    食品科學(xué) 2011年14期
    關(guān)鍵詞:多肽通量哈爾濱

    張洪微,楊銘鐸,吳瑩瑩,張 玲,賈慶勝

    (1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150076;2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)中式快餐研究發(fā)展中心博士后科研基地,黑龍江 哈爾濱 150076;3.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 大慶 163319;4.黑龍江生物科技職業(yè)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150025;5.黑龍江北大荒豐緣麥業(yè)集團(tuán)有限公司,黑龍江 哈爾濱 150076)

    黑龍江小麥麥胚多肽的制備及抗氧化功能研究Ⅱ.超濾法精制抗氧化麥胚多肽工藝條件的優(yōu)化

    張洪微1,2,3,楊銘鐸1,2,*,吳瑩瑩1,2,張 玲4,賈慶勝5

    (1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150076;2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)中式快餐研究發(fā)展中心博士后科研基地,黑龍江 哈爾濱 150076;3.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 大慶 163319;4.黑龍江生物科技職業(yè)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150025;5.黑龍江北大荒豐緣麥業(yè)集團(tuán)有限公司,黑龍江 哈爾濱 150076)

    采用3ku和6ku的超濾膜對(duì)麥胚多肽進(jìn)行分級(jí)分離,考察3種分離產(chǎn)物對(duì)DPPH·的清除能力,發(fā)現(xiàn)分子質(zhì)量在3ku以下的麥胚多肽對(duì)DPPH·的清除率可達(dá)75.32%,高于其他分離產(chǎn)物。采用響應(yīng)面試驗(yàn)方法對(duì)麥胚多肽的超濾條件進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn),結(jié)果表明,最佳超濾條件為超濾壓力0.08MPa、超濾時(shí)間23min、超濾pH6.83、溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%,此時(shí)膜通量為4.85L/(m2·h)。所得分子質(zhì)量小于3ku的麥胚多肽在質(zhì)量分?jǐn)?shù)11%時(shí),其DPPH·清除率為78.93%。超濾法精制的麥胚多肽具有良好的DPPH·的清除能力。

    麥胚多肽;DPPH·清除作用;超濾法

    小麥胚芽因含有豐富的蛋白質(zhì)、油脂、碳水化合物、維生素等人體需要的營(yíng)養(yǎng)素及谷胱甘肽、黃酮類物質(zhì)和二十八烷醇等生理活性物質(zhì)而被營(yíng)養(yǎng)學(xué)家譽(yù)為“人類天然營(yíng)養(yǎng)寶庫(kù)和人類的生命資源”[1-2]。小麥胚芽中的蛋白質(zhì)含量高達(dá)30%,而且氨基酸比例合理,是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源[3]。麥胚蛋白在酶的作用下多肽鏈被打斷,釋放各種肽類化合物,使其功能性質(zhì)得到改善,并具有一定的生物活性。有研究表明[4],小麥蛋白經(jīng)過(guò)水解后的多肽具有抗氧化活性,多肽的抗氧化活性還同分子質(zhì)量有關(guān)[5-6]。

    超濾技術(shù)是在0.05~0.1MPa的靜壓差推動(dòng)下,截留蛋白質(zhì)、酶等相對(duì)分子質(zhì)量大于500u的大分子及膠體,形成濃縮液,達(dá)到溶液的凈化、分離及濃縮目的[7]。采用超濾技術(shù)對(duì)酶解后的麥胚多肽進(jìn)行分級(jí)分離,可以得到具有較高抗氧化活性的多肽產(chǎn)品[8]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)麥胚蛋白的酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾,得到具有較高DPPH·清除能力的麥胚多肽,并采用響應(yīng)面分析方法對(duì)超濾條件進(jìn)行優(yōu)化,為麥胚多肽的生產(chǎn)提供一定參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    小麥胚芽 黑龍江北大荒豐源麥業(yè);堿性蛋白酶Alcalase F G、木瓜蛋白酶 諾維信酶制劑公司;DPPH· (1,1-二苯基-2-三硝基苯肼) 日本W(wǎng)ako公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    3、6ku圓片平板聚醚砜超濾膜、MSC300型杯式超濾器 上海摩速科學(xué)器材有限公司;R-205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海申勝生物技術(shù)有限公司;ZDO-2型真空冷凍干燥箱 寧夏亞麻技術(shù)設(shè)備有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 麥胚多肽的制備工藝流程

    小麥胚芽→粉碎→過(guò)100目篩→脫脂→堿提(pH 10.0)→酸沉(pH4.0) →離心→棄上清液→冷凍干燥→麥胚蛋白粉→酶解→麥胚蛋白酶解物→超濾→冷凍干燥→麥胚多肽

    1.3.2 清除DPPH·能力的測(cè)定

    取一定濃度的樣品1mL,加入1×10-4mol/L DPPH·無(wú)水乙醇溶液1mL,混均后在室溫避光保存30min,在517nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定吸光度,空白組以等體積無(wú)水乙醇溶液代替DPPH·溶液,對(duì)照組以等體積蒸餾水代替樣品溶液,并以等體積蒸餾水和無(wú)水乙醇混合液空白調(diào)零,所有測(cè)定值均為3次結(jié)果的平均值,清除率計(jì)算[9]公式如下:

    式中:A0為對(duì)照組吸光度;Ai為樣品組吸光度;Aj為空白組吸光度。

    1.3.3 膜通量的確定式中:V為透過(guò)液的體積/L;S為膜的有效面積/ m2;t為運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)間/h;L為膜通量/(L/(m2·h))。1.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.4.1 超濾膜的選擇

    將麥胚蛋白酶解物依次通過(guò)6ku和3ku的超濾膜,將麥胚蛋白酶解物分級(jí)為<3、3~6、>6ku,將分級(jí)后的麥胚多肽水溶液進(jìn)行冷凍干燥,測(cè)其對(duì)DPPH·清除效果,選擇抗氧化效果最好的組分進(jìn)行超濾條件的確定。

    1.4.2 超濾條件的優(yōu)化

    1.4.2.1 單因素試驗(yàn)

    超濾時(shí)膜通量的大小主要受超濾壓力、超濾時(shí)間、pH值和溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響,因此選擇以上4個(gè)因素進(jìn)行超濾條件優(yōu)化的單因素試驗(yàn),試驗(yàn)水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

    1.4.2.2 響應(yīng)曲面法對(duì)超濾條件的優(yōu)化

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,采用Box-behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法對(duì)超濾條件進(jìn)行優(yōu)化,選取超濾壓力、超濾時(shí)間、pH值、溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)4個(gè)因素為自變量,以膜通量為響應(yīng)值,因素水平見(jiàn)表1。

    表1 響應(yīng)曲面分析因素水平設(shè)計(jì)表Table 1 Coded values and corresponding actual values of the optimization parameters used in the response surface analysis

    2 結(jié)果與分析

    2.1 超濾膜的選擇結(jié)果分析

    圖1 不同分子質(zhì)量范圍的麥胚多肽對(duì)DPPH·清除率的影響Fig.1 DPPH free radical scavenging rates of wheat germ peptides with different molecular weights

    由圖1可知,經(jīng)過(guò)分級(jí)后的麥胚多肽,其清除DPPH·的能力有所不同。隨著麥胚多肽分子質(zhì)量的降低,其清除DPPH·的能力逐步提高,當(dāng)分子質(zhì)量在3ku以下時(shí),其清除能力達(dá)到75.32%,比6ku以上的麥胚多肽清除能力提高了17.74%。這是因?yàn)榻?jīng)過(guò)3ku膜超濾處理的麥胚多肽,除去了大部分的大分子蛋白,使得其疏水性氨基酸含量大大增加,而這些疏水氨基酸對(duì)體外抗氧化有著很好的效果。此結(jié)論與大豆多肽[10]、雞胚多肽[11]、雞骨膠原蛋白肽[12]結(jié)論相同。

    2.2 超濾條件優(yōu)化的結(jié)果分析

    2.2.1 超濾壓力對(duì)膜通量的影響

    圖2 超濾壓力對(duì)膜通量的影響Fig.2 Effect of pressure on membrane flux

    由圖2可以看出,隨著超濾壓力的增加,膜通量呈上升趨勢(shì),超濾壓力由0.05MPa上升到0.07MPa過(guò)程中,膜通量上升迅速,而由0.07MPa上升到0.09MPa時(shí),膜通量趨于平穩(wěn)。這是因?yàn)椋瑸V壓力增大的初期,隨著超濾壓力的增加,膜兩側(cè)的壓力逐步加大,使得膜通量迅速增加;當(dāng)超濾壓力繼續(xù)增加時(shí),會(huì)很快造成濃差極化現(xiàn)象,而當(dāng)壓力過(guò)大時(shí),反而會(huì)造成組分中物質(zhì)的沉積,造成膜通量下降[13]。因此,超濾壓力的選擇不宜過(guò)大,本試驗(yàn)中,選擇0.07MPa作為單因素試驗(yàn)中的最佳超濾壓力。

    2.2.2 超濾時(shí)間對(duì)膜通量的影響

    圖3 超濾時(shí)間對(duì)膜通量的影響Fig.3 Effect of time on membrane flux

    由圖3可以看出,隨著超濾時(shí)間的增加,膜通量呈下降趨勢(shì),在20~30min內(nèi),膜通量下降緩慢,在40~50min時(shí),膜通量下降迅速。這是因?yàn)?,?dāng)超濾時(shí)間增加時(shí),造成溶液中組分沉積,濃差極化現(xiàn)象嚴(yán)重,因此,選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ髦芷?,可以有效地防止膜通量下降,本試?yàn)選擇30min作為一個(gè)工作周期。

    2.2.3 超濾pH值對(duì)膜通量的影響

    麥胚蛋白在pH4時(shí)達(dá)到等電點(diǎn),在等電點(diǎn)時(shí),未被酶解的蛋白從溶液中沉淀出來(lái),會(huì)造成超濾膜的堵塞,膜通量下降,隨著pH值向中性偏移,溶液中的麥胚蛋白不再析出,膜通量上升,而當(dāng)pH值過(guò)高時(shí),堿性環(huán)境會(huì)造成蛋白的變性[14],溶液黏度增加,反而不利于超濾的進(jìn)行。因此,選擇pH7作為超濾單因素試驗(yàn)中的最佳pH值。

    圖4 pH值對(duì)膜通量的影響Fig.4 Effect of pH on membrane flux

    2.2.4 溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)膜通量的影響

    圖5 溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)膜通量的影響Fig.5 Effect of wheat germ hydrolysate concentration on membrane flux

    由圖5可以看出,隨著溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,超濾的膜通量逐漸下降,這是因?yàn)槿芤嘿|(zhì)量分?jǐn)?shù)越大,超濾時(shí)會(huì)造成過(guò)多的組分沉積在超濾膜上,影響超濾效果。但是,過(guò)小的質(zhì)量分?jǐn)?shù),會(huì)造成超濾過(guò)程中的實(shí)際膜效能降低[15],增加后期冷凍干燥的工作量,因此超濾單因素試驗(yàn)中的最佳質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%。

    2.2.5 響應(yīng)曲面法對(duì)超濾條件的優(yōu)化

    2.2.5.1 響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果(見(jiàn)表3)

    2.2.5.2 響應(yīng)曲面試驗(yàn)結(jié)果分析

    應(yīng)用Design expert 7.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)表3試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,得到回歸方程為:

    Y=4.7-0.078A+0.017B+0.1C+2.5×10-3D-0.028AB-0.1AC-0.03AD-0.02BC+0.068BD+0.06CD+0.02A2-0.051B2-0.13C2-0.013D2

    對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,得到結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知,模型項(xiàng)、A、AC影響顯著,C、C2影響極顯著,失擬項(xiàng)不顯著。說(shuō)明模型的擬合性良好,可以用于模型分析。決定系數(shù)和校正決定系數(shù)分別為0.7765和0.5531,說(shuō)明該模型的擬合性良好,可以用于模型分析。本模型的信噪比為7.539,說(shuō)明該模型可以用于生產(chǎn)應(yīng)用當(dāng)中。

    表3 麥胚蛋白酶解物超濾條件優(yōu)化響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 3 Experimental design and corresponding results for response surface analysis

    由于AC影響顯著,作響應(yīng)面圖見(jiàn)圖6。由圖6可以看出,隨著超濾壓力的增大,超濾膜通量呈逐漸增加的趨勢(shì),在超濾壓力達(dá)到0.08MPa時(shí),膜通量達(dá)到4.72L/(m2·h);而超濾膜通量隨pH值的變化先增大后減小,這是因?yàn)辂溑叩鞍酌附馕镌谒嵝原h(huán)境中,由于接近其等電點(diǎn),會(huì)造成沉積物析出,而當(dāng)其處于堿性環(huán)境中時(shí),又會(huì)造成蛋白的變性。因此,選擇中性的pH值超濾效果最好。

    通過(guò)對(duì)回歸方程的分析,得到超濾條件的優(yōu)化結(jié)果為超濾壓力0.08MPa、超濾時(shí)間22.68min、超濾pH6.83、溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.00%。

    表4 響應(yīng)曲面方差分析表Table 4 Variance analysis of the established regression model

    圖6 超濾壓力與超濾pH值交互作用的等高線與響應(yīng)曲面圖Fig.6 Response surface and contour plots showing the effects of pressure and pH on membrane flux

    2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),但在超濾時(shí)間的選擇上考慮實(shí)驗(yàn)的可操作性,將最佳的超濾時(shí)間修正為23min。在此條件下,膜通量可達(dá)到4.85L/(m2·h),較為理想。同時(shí)對(duì)超濾精制后的麥胚多肽進(jìn)行DPPH·清除能力的測(cè)定,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),精制后的麥胚多肽其DPPH·清除能力較高,質(zhì)量分?jǐn)?shù)11%的麥胚多肽溶液對(duì)DPPH·清除率達(dá)到78.93%,說(shuō)明麥胚多肽有較強(qiáng)的清除DPPH·的能力。

    3 結(jié) 論

    3.1 分級(jí)分離后的麥胚多肽,其抗氧化性能有所不同,其中分子質(zhì)量在3ku以下的麥胚多肽組分抗氧化活性最高,其DPPH·清除能力可達(dá)到75.32%。

    3.2 通過(guò)單因素及響應(yīng)曲面法對(duì)3ku以下的麥胚多肽超濾條件進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳超濾條件為超濾壓力0.08MPa、超濾時(shí)間23min、超濾pH6.83、溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%,此時(shí)膜通量為4.85L/(m2·h)。

    3.3 精制后的麥胚多肽具有較好的DPPH·清除能力,麥胚多肽質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11%時(shí),其DPPH·清除率達(dá)78.93%。

    [1]周惠明, 朱科學(xué). 小麥胚中谷胱甘肽的純化與富集的研究[J]. 中國(guó)糧油學(xué)報(bào), 2003, 18(1)∶ 20-23.

    [2]金善寶. 中國(guó)小麥學(xué)[M]. 北京∶ 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1996.

    [3]程云輝, 王璋, 許時(shí)櫻. 麥胚蛋白的研究進(jìn)展[J]. 食品與機(jī)械, 2006, 22(2)∶ 105-108.

    [4]程云輝, 王璋, 許時(shí)櫻. 酶解麥胚蛋自制備抗氧化肽的研究[J]. 食品科學(xué), 2006, 27(6)∶ 147-151.

    [5]CHEN Huaming, MURAMOTO K, YAMAUCHI F, et al. Structural analysis of antioxidative peptides from soybean β-conglycinin[J]. J Agric Food Chem, 1995, 43(3)∶ 574-578.

    [6]ZHENG Xiqun, LI Lite, LIU Xiaolan, et al. Production of hydrolysate with antioxidative activity by enzymatic hydrolysis of extruded corn gluten[J]. Appl Microbiol Biotechnol, 2006, 73(4)∶ 763-770.

    [7]王湛. 膜分離技術(shù)基礎(chǔ)[M]. 北京∶ 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000.

    [8]殷微微. 麥胚蛋白提取及其酶解產(chǎn)物抗氧化活性研究[D]. 大慶∶ 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué), 2008.

    [9]趙艷紅, 李建科, 李國(guó)秀. 天然抗氧化物體外活性評(píng)價(jià)方法的優(yōu)選與優(yōu)化[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(6)∶ 65-66.

    [10]CHEN Huaming, MURAMOTO K, YAMAUCHI F, et al. Antioxidant activiy of designed peptides based on the antioxidative peptide isolated from digests of a soybean protein[J]. J Agric of Food Chem, 1996, 44(9)∶2619-2623.

    [11]馬麗娜, 張培正, 李坤, 等. 雞胚多肽的分級(jí)膜分離[J]. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng), 2007(7)∶ 43-44.

    [12]符群. 雞骨膠原蛋白肽的酶法制備及其抗氧化性研究[D]. 哈爾濱∶ 哈爾濱商業(yè)大學(xué), 2009.

    [13]任海偉, 王常青. 超濾法分離黑豆抗氧化活性肽[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(12)∶ 123-126.

    [14]謝筆均. 食品化學(xué)[M]. 北京∶ 科學(xué)出版社, 2003.

    [15]嚴(yán)瑞楦. 水處理應(yīng)用手冊(cè)[M]. 北京∶ 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000.

    Preparation and Antioxidant Activity of Germ Peptides from Helongjiang Wheat Ⅱ∶ Optimization of Ultra-filtration Separation of Wheat Germ Peptides

    ZHANG Hong-wei1,2,3,YANG Ming-duo1,2,*,WU Ying-ying1,2,ZHANG Ling4,JIA Qing-sheng5
    (1. Institute of Food Engineering, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China;2. Postdoctoral Research Base of the Chinese Fast Food Research and Development Center, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China;3. College of Food Science, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China;4. Heilongjiang Vocational College of Biology Scienece and Technology, Harbin 150025, China;5. Heilongjiang Beidahuang Fengyuan Wheat Industry Group Co. Ltd., Harbin 150076, China)

    Wheat germ protein hydrolysate prepared by enzymatic hydrolysis was separated with ultra-filtration membranes with a molecular weight cutoff (MWCO) of 3 ku and 6 ku, respectively. Four ultra-filtration parameters such as pressure, time, pH and sample concentration were optimized by response surface methodology to be 0.08 MPa, 23 min, 6.83 and 2%, respectively. Under these conditions, the ultra-filtration membrane flux of was 4.85 L/(m2·h). The obtained fraction of less than 3 ku in molecular weight exhibited a DPPH free radical scavenging rate of 78.93% at the concentration of 11%.

    wheat germ peptide;DPPH free radical scavenging activity;ultra-filtration

    TS210.9

    A

    1002-6630(2011)14-0171-05

    2010-12-17

    黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(C201041)

    張洪微(1975—),女,講師,碩士,研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail:fcwei_2004@126.com

    *通信作者:楊銘鐸(1956—),男,教授,博士,研究方向?yàn)閭鹘y(tǒng)食品工業(yè)化。E-mail:yangmingduo5663@163.com

    猜你喜歡
    多肽通量哈爾濱
    我平等地嫉妒每一個(gè)去哈爾濱的人
    冬小麥田N2O通量研究
    高多肽含量苦瓜新品種“多肽3號(hào)”的選育
    奇妙的哈爾濱之旅
    抗HPV18 E6多肽單克隆抗體的制備及鑒定
    《老哈爾濱的回憶》國(guó)畫(huà)
    新聞傳播(2016年13期)2016-07-19 10:12:05
    感受哈爾濱的冬天
    緩釋型固體二氧化氯的制備及其釋放通量的影響因素
    胎盤多肽超劑量應(yīng)用致嚴(yán)重不良事件1例
    徐寒梅:創(chuàng)新多肽藥物研究與開(kāi)發(fā)
    亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 欧美一区二区国产精品久久精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 一区二区三区高清视频在线| 久久精品91蜜桃| 少妇高潮的动态图| 女人十人毛片免费观看3o分钟| netflix在线观看网站| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| aaaaa片日本免费| 男人的好看免费观看在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 欧美乱妇无乱码| 最后的刺客免费高清国语| 最近中文字幕高清免费大全6 | 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲国产精品合色在线| 特级一级黄色大片| 国产激情偷乱视频一区二区| 看片在线看免费视频| 少妇的逼水好多| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 国产精品人妻久久久久久| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久久久久久中文| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产高清视频在线观看网站| АⅤ资源中文在线天堂| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产黄a三级三级三级人| 日韩欧美三级三区| 90打野战视频偷拍视频| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美zozozo另类| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一区二区三区免费毛片| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美成人性av电影在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成熟少妇高潮喷水视频| 特大巨黑吊av在线直播| 免费看日本二区| 天堂√8在线中文| 免费无遮挡裸体视频| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲经典国产精华液单 | 亚洲无线在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 岛国在线免费视频观看| 亚洲黑人精品在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日本一二三区视频观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 99热6这里只有精品| 久久久国产成人精品二区| 国产精品久久久久久久久免 | 麻豆一二三区av精品| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲av二区三区四区| 亚洲成人久久性| 99国产极品粉嫩在线观看| www日本黄色视频网| 欧美午夜高清在线| 久久精品国产自在天天线| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产精品不卡视频一区二区 | 欧美一区二区国产精品久久精品| 99国产综合亚洲精品| 免费看美女性在线毛片视频| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美激情在线99| 欧美在线一区亚洲| 男插女下体视频免费在线播放| 99riav亚洲国产免费| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| xxxwww97欧美| 麻豆av噜噜一区二区三区| 极品教师在线视频| 又爽又黄a免费视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精品一区二区免费欧美| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 看片在线看免费视频| 国产熟女xx| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 欧美丝袜亚洲另类 | 国产成人aa在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 男插女下体视频免费在线播放| 国产淫片久久久久久久久 | 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 99热这里只有是精品在线观看 | 在线天堂最新版资源| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 两个人的视频大全免费| 亚洲 国产 在线| 午夜福利高清视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 搡老岳熟女国产| 欧美午夜高清在线| www.999成人在线观看| 亚洲av免费在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 丰满乱子伦码专区| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美黑人巨大hd| 欧美日韩福利视频一区二区| 简卡轻食公司| 亚洲欧美激情综合另类| 老司机午夜福利在线观看视频| 99热这里只有精品一区| 99久久成人亚洲精品观看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 色噜噜av男人的天堂激情| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国内揄拍国产精品人妻在线| 丁香欧美五月| 一a级毛片在线观看| 丰满的人妻完整版| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产精品久久久久久精品电影| АⅤ资源中文在线天堂| 免费观看人在逋| 一区二区三区免费毛片| 精品人妻熟女av久视频| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩精品中文字幕看吧| 免费无遮挡裸体视频| 欧美一区二区精品小视频在线| www日本黄色视频网| 深夜精品福利| 国产高清有码在线观看视频| 精品欧美国产一区二区三| 别揉我奶头 嗯啊视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久久九九精品二区国产| 少妇丰满av| 九九热线精品视视频播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 一本一本综合久久| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产 一区 欧美 日韩| 黄色配什么色好看| 亚洲成人久久性| 精品国产三级普通话版| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美黑人巨大hd| 亚洲精品影视一区二区三区av| 久99久视频精品免费| 极品教师在线视频| 免费人成在线观看视频色| 国产亚洲精品久久久久久毛片| av中文乱码字幕在线| 色吧在线观看| 欧美激情在线99| 热99re8久久精品国产| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费看光身美女| 国产高潮美女av| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 十八禁网站免费在线| 久久亚洲真实| 很黄的视频免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产毛片a区久久久久| 男人舔奶头视频| 五月玫瑰六月丁香| 夜夜爽天天搞| 一级黄片播放器| 国产精品电影一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 无遮挡黄片免费观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人午夜高清在线视频| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美激情综合另类| 国产综合懂色| 国产精品国产高清国产av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 少妇高潮的动态图| 国产真实伦视频高清在线观看 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产三级中文精品| 久久中文看片网| 亚洲av熟女| 精品一区二区三区视频在线| 日本三级黄在线观看| 91在线观看av| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲美女黄片视频| 天堂√8在线中文| 午夜老司机福利剧场| 一级av片app| 免费人成在线观看视频色| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 丰满乱子伦码专区| 一区二区三区四区激情视频 | 一级黄片播放器| 日本三级黄在线观看| 免费av观看视频| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产高清视频在线观看网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产日本99.免费观看| 99热这里只有是精品50| 国产亚洲精品av在线| 亚洲国产精品合色在线| 国产爱豆传媒在线观看| www.999成人在线观看| 日韩高清综合在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 国产午夜精品论理片| 999久久久精品免费观看国产| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久久久久久久久黄片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 欧美在线一区亚洲| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲成人免费电影在线观看| 无遮挡黄片免费观看| a级毛片a级免费在线| 在线观看午夜福利视频| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲电影在线观看av| 午夜福利欧美成人| 国产精品精品国产色婷婷| 热99re8久久精品国产| 中文字幕久久专区| 不卡一级毛片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一二三四社区在线视频社区8| 一区二区三区免费毛片| 欧美高清性xxxxhd video| 久久久久久久久久成人| 大型黄色视频在线免费观看| 久久人人爽人人爽人人片va | 日本黄色片子视频| 欧美高清性xxxxhd video| 91九色精品人成在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲美女视频黄频| 久久久久久久精品吃奶| 国产v大片淫在线免费观看| 在线观看舔阴道视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产视频内射| 高潮久久久久久久久久久不卡| av天堂中文字幕网| 久久人人精品亚洲av| 国产成人福利小说| 久久久色成人| av在线老鸭窝| 在线观看66精品国产| 国产不卡一卡二| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲人成网站在线播| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲综合色惰| 午夜精品久久久久久毛片777| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久亚洲精品不卡| 欧美性感艳星| 免费在线观看成人毛片| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av美国av| 国产精华一区二区三区| 黄色丝袜av网址大全| 在线观看一区二区三区| 舔av片在线| 久久99热6这里只有精品| 免费观看精品视频网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| а√天堂www在线а√下载| 国产日本99.免费观看| a级一级毛片免费在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 香蕉av资源在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 国产野战对白在线观看| 欧美精品国产亚洲| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品1区2区在线观看.| 男女下面进入的视频免费午夜| 男插女下体视频免费在线播放| 可以在线观看毛片的网站| 村上凉子中文字幕在线| 成年人黄色毛片网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久久久久久午夜电影| 欧美极品一区二区三区四区| ponron亚洲| 亚洲五月天丁香| 91在线观看av| 日韩成人在线观看一区二区三区| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产在线男女| av在线观看视频网站免费| 欧美性感艳星| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲国产精品久久男人天堂| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| xxxwww97欧美| 亚洲最大成人中文| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲黑人精品在线| 国产久久久一区二区三区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久9热在线精品视频| 亚洲av成人精品一区久久| 身体一侧抽搐| 国产亚洲欧美在线一区二区| 在线免费观看不下载黄p国产 | 免费人成在线观看视频色| 我的老师免费观看完整版| 舔av片在线| 国产中年淑女户外野战色| 免费一级毛片在线播放高清视频| 12—13女人毛片做爰片一| 床上黄色一级片| 无人区码免费观看不卡| 欧美乱色亚洲激情| 久久人人精品亚洲av| 综合色av麻豆| 很黄的视频免费| 91在线观看av| 男人舔女人下体高潮全视频| 一区二区三区免费毛片| 又爽又黄a免费视频| 精品国产亚洲在线| 亚洲精品色激情综合| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产精品野战在线观看| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国内精品久久久久精免费| 亚洲av二区三区四区| 热99在线观看视频| 欧美色视频一区免费| 色5月婷婷丁香| 香蕉av资源在线| 可以在线观看的亚洲视频| 国产亚洲精品av在线| 亚洲,欧美精品.| 成人av在线播放网站| 免费在线观看日本一区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 国产成人aa在线观看| 91九色精品人成在线观看| av国产免费在线观看| 欧美成人a在线观看| 级片在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 极品教师在线免费播放| 特大巨黑吊av在线直播| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 有码 亚洲区| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美乱色亚洲激情| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜免费激情av| 99久久精品一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲成人中文字幕在线播放| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产一级毛片七仙女欲春2| 中文字幕久久专区| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美zozozo另类| 极品教师在线视频| 久久国产精品影院| 亚洲精品色激情综合| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美日本视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 久9热在线精品视频| 9191精品国产免费久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品久久久久久成人av| 欧美区成人在线视频| 国产高清视频在线观看网站| 老司机午夜十八禁免费视频| 18+在线观看网站| 亚洲自拍偷在线| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 国产老妇女一区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本 av在线| 国产精华一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 美女免费视频网站| 成人无遮挡网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| av天堂在线播放| 狠狠狠狠99中文字幕| www.熟女人妻精品国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 少妇高潮的动态图| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 51国产日韩欧美| h日本视频在线播放| 天堂√8在线中文| 在线看三级毛片| 一本综合久久免费| 他把我摸到了高潮在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 国产三级在线视频| 无遮挡黄片免费观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品久久久久久精品电影| 久久久久性生活片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品一区二区三区av网在线观看| 在线观看一区二区三区| 日本黄色片子视频| av在线蜜桃| 一个人观看的视频www高清免费观看| 9191精品国产免费久久| 天堂动漫精品| 亚洲不卡免费看| 美女大奶头视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 免费av不卡在线播放| 欧美一区二区亚洲| 国内精品久久久久精免费| 村上凉子中文字幕在线| 成人av在线播放网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品电影一区二区三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久草成人影院| 国产男靠女视频免费网站| 毛片女人毛片| 一级黄色大片毛片| 日韩欧美免费精品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲,欧美精品.| 亚洲美女搞黄在线观看 | 直男gayav资源| 成人三级黄色视频| 热99re8久久精品国产| av在线蜜桃| 亚洲欧美清纯卡通| 波野结衣二区三区在线| 岛国在线免费视频观看| 91狼人影院| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美潮喷喷水| 亚洲av美国av| 内地一区二区视频在线| 精品久久久久久久久亚洲 | 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美日韩黄片免| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲一区二区三区不卡视频| АⅤ资源中文在线天堂| 国产精品一区二区免费欧美| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产v大片淫在线免费观看| 最好的美女福利视频网| 国产私拍福利视频在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲成人免费电影在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 特级一级黄色大片| 一级毛片久久久久久久久女| 99久久99久久久精品蜜桃| 精品久久久久久久久av| 中文在线观看免费www的网站| 少妇丰满av| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲精品亚洲一区二区| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲av熟女| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 色综合婷婷激情| 精品久久国产蜜桃| 窝窝影院91人妻| 丰满乱子伦码专区| 色综合婷婷激情| 九九热线精品视视频播放| 免费在线观看日本一区| 免费高清视频大片| 九色国产91popny在线| 美女黄网站色视频| 国产高清三级在线| 亚州av有码| 国产高清三级在线| 天堂动漫精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 一进一出抽搐动态| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美色视频一区免费| 国内精品美女久久久久久| 国产精华一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲av熟女| 老熟妇乱子伦视频在线观看| av视频在线观看入口| 黄色配什么色好看| 久久6这里有精品| 婷婷亚洲欧美| 69av精品久久久久久| 国产伦在线观看视频一区| 我要搜黄色片| 欧美激情国产日韩精品一区| 色综合站精品国产| 国产成人欧美在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 97碰自拍视频| 成人av在线播放网站| 日韩人妻高清精品专区| 精品人妻熟女av久视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 成人性生交大片免费视频hd| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲成人久久爱视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 很黄的视频免费| 亚洲乱码一区二区免费版| 女人被狂操c到高潮| 丁香欧美五月| 欧美高清性xxxxhd video| 久久99热这里只有精品18| 99久久成人亚洲精品观看| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲av.av天堂| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费在线观看日本一区| 丰满乱子伦码专区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产午夜精品论理片| 久久6这里有精品| 黄色日韩在线| 国产精华一区二区三区| av在线蜜桃| 无人区码免费观看不卡| 精品人妻1区二区| 女人被狂操c到高潮| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产午夜福利久久久久久| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 在现免费观看毛片| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美黑人欧美精品刺激| 成人欧美大片| 我要搜黄色片| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲五月婷婷丁香| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久久精品欧美日韩精品| 一个人看视频在线观看www免费| 免费搜索国产男女视频| 久久精品91蜜桃| 简卡轻食公司| 国产野战对白在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 88av欧美| 欧美日本视频|