口蹄疫O型、亞洲I型二價(jià)滅活疫苗免疫牛的ELISA抗體滴度與攻毒保護(hù)的相關(guān)性研究

劉宏，王延，2，朱剛，烏斯?jié)M江，彭飛，薛英，2，徐亞萍，黃炯，2*

(1.新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司，新疆烏魯木齊，830032；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆烏魯木齊 830032）

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高接觸性傳染病。由于豬、牛、羊等主要家畜均可感染此病，并能形成全球大規(guī)模流行，所以國(guó)際獸疫局（OIE）將該病列為A類家畜傳染病之首。目前我國(guó)對(duì)牛羊口蹄疫的預(yù)防主要使用口蹄疫0型、亞洲I型二價(jià)滅活疫苗，疫苗的免疫效果是預(yù)防和控制口蹄疫流行的關(guān)鍵。本文探討了液相阻斷ELISA方法測(cè)定的免疫動(dòng)物血清抗體滴度與攻毒保護(hù)效果的平行關(guān)系，試圖對(duì)現(xiàn)行疫苗田間應(yīng)用效果的評(píng)價(jià)方法進(jìn)行評(píng)判。

一、材料與方法

（一）疫苗 新疆天康公司生產(chǎn)的口蹄疫O、Asia-1型二價(jià)滅活疫苗。

（二）動(dòng)物 用液相阻斷ELISA法檢測(cè)血清抗體，滴度分別＜1:8的6月齡以上的健康易感牛用于試驗(yàn)。

（三）攻毒用強(qiáng)毒 口蹄疫疫苗效檢用強(qiáng)毒，O型毒為OHM/02株，毒價(jià)為108.0ID50/0.2 ml，亞洲1型毒為Asia-1/GSZY/06株，毒價(jià)為106.5ID50/0.2 ml。

（四）口蹄疫液相阻斷ELISA試劑盒 購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所。

（五）免疫效力檢測(cè) 按照OIE推薦的PD50試驗(yàn)檢驗(yàn)疫苗的效力。

（六）免疫接種 每批疫苗分為1頭份、1/3頭份和1/9頭份3個(gè)免疫劑量組，每個(gè)劑量組分別于頸部肌肉注射10頭牛，攻毒時(shí)均分為O型和亞洲1型組（各5頭牛），另設(shè)O型和亞洲1型對(duì)照組各2頭牛。

（七）攻毒和結(jié)果判定 免疫21 d后，O型和亞洲1型組的免疫牛連同對(duì)照，舌上表面兩側(cè)分兩點(diǎn)皮內(nèi)分別注射牛口蹄疫病毒O型強(qiáng)毒和Asia-1型強(qiáng)毒，每點(diǎn)0.1 ml（共0.2 ml，含 10 000ID50）。連續(xù)觀察10 d，對(duì)照動(dòng)物3蹄或3蹄以上出現(xiàn)水泡，試驗(yàn)成立。免疫牛僅在舌面出現(xiàn)水泡或潰瘍，而其它部門無(wú)病變時(shí)判為保護(hù)，除舌面以外任一部位出典型口蹄疫水泡或潰瘍時(shí)判為不保護(hù)。

表1 O型抗體滴度與牛免疫保護(hù)率的相關(guān)性

表2 Asia-1型抗體滴度與牛免疫保護(hù)率的相關(guān)性

（八）血清抗體檢測(cè) 攻毒前采血分離血清，參照液相阻斷ELISA試劑盒的方法檢測(cè)和判定。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（一）數(shù)據(jù)處理和分析結(jié)果 將試驗(yàn)結(jié)果中的O型、Asia-1型抗體滴度 為1.2lg(1:16)至2.1lg(1:128)之間的數(shù)值對(duì)應(yīng)的免疫保護(hù)牛數(shù)、攻毒后發(fā)病牛數(shù)、保護(hù)百分率及應(yīng)用生物統(tǒng)計(jì)方法換算出的概率單位列于表1、表2。從表1中可以看出，口蹄疫O型和攻毒保護(hù)百分率(概率單位)之間呈正相關(guān)關(guān)系。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)證明，P<0.05，相關(guān)系數(shù)為0.829；從表2可以看出，口蹄疫Asia-1型和攻毒保護(hù)百分率(概率單位)之間呈正相關(guān)關(guān)系。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)證明，P<0.01，相關(guān)系數(shù)為0.95，說(shuō)明抗體滴度和攻毒保護(hù)百分率(概率單位)之間存在著顯著的正相關(guān)性

（二）回歸分析結(jié)果 根據(jù)所得到的概率單位數(shù)據(jù)與口蹄疫O型、Asia-1型抗體滴度對(duì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)回歸分析，并分別計(jì)算出回歸方程O(píng) 型 為 Y=0.990X+3.456，Asia-1型為Y=2.043X+1.746，結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。從圖1、圖2可以看出，抗體滴度對(duì)數(shù)和保護(hù)百分率(概率單位)兩者之間的關(guān)系是線性回歸，進(jìn)一步說(shuō)明液相阻斷ELISA抗體滴度和攻毒保護(hù)百分率(概率單位)之間存在著顯著的正相關(guān)性。

圖1 O型抗體滴度對(duì)數(shù)和保護(hù)百分率(概率單位)兩者之間的線性回歸關(guān)系

圖2 Asia-1型抗體滴度對(duì)數(shù)和保護(hù)百分率(概率單位)兩者之間的線性回歸關(guān)系

三、討論

從概率分析可以看出，O型抗體滴度在 1.35（1:22）～ 1.95（1:90)有50%牛免疫保護(hù)，Asia-1型抗體滴度在1.65(1:45)～1.80(1:64）有50%牛免疫保護(hù)，以上結(jié)果符合ELISA試劑盒介紹的，抗體效價(jià)在1:22～1:90時(shí)，可獲得50%的保護(hù)的結(jié)論。而O型抗體滴度在≤1.2 lg（1:16）有29%牛免疫保護(hù)， 在 ≥ 2.1 lg（1:128)有 78%牛免疫保護(hù)；Asia-1型抗體滴度在≤1.2 lg（1:16)有24%牛免疫保護(hù)，在≥2.10 lg（1:128)有85%牛免疫保護(hù)；與ELISA試劑盒介紹的，抗體效價(jià)≥1:128時(shí)，可獲得99%保護(hù)，抗體效價(jià)≤1:16時(shí)，不保護(hù)的結(jié)果相差較大。對(duì)于有的牛抗體水平較低，對(duì)攻毒仍有較好的保護(hù)，不引起發(fā)病，可能與其存在較高的細(xì)胞免疫有關(guān)等。造成這種差距的原因可能有許多，還需要進(jìn)一步研究。

McCullough等認(rèn)為，在用血清抗體效價(jià)來(lái)判定保護(hù)力時(shí)，二者間存在一個(gè)灰色區(qū)域（Grey Zone）,當(dāng)抗體效價(jià)落于這一區(qū)域時(shí)，總是無(wú)法判定動(dòng)物是否能被保護(hù)。對(duì)這些現(xiàn)象目前無(wú)法做出科學(xué)的解釋。可以肯定還有其他影響因素。中和抗體的數(shù)量（或滴度）只是反映動(dòng)物保護(hù)力的一項(xiàng)指標(biāo)，但不應(yīng)是惟一指標(biāo)，抗體的親和力和中和抗體對(duì)吞噬細(xì)胞的調(diào)理作用也是影響保護(hù)力的重要因素。

盡管存在一些數(shù)據(jù)的特例，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表面液相阻斷ELISA抗體滴度的對(duì)數(shù)和保護(hù)百分率(概率單位)兩者之間的關(guān)系呈線性回歸，存在著顯著的正相關(guān)性，用液相阻斷ELISA方法評(píng)判群體的免疫效果是完全可行的。

（略）