MT1、MT 2和3-MMP在60例喉癌中的檢測(cè)及臨床意義

張旭

浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是惡性腫瘤的重要標(biāo)志性特征之一，其對(duì)預(yù)后具有十分重要的影響。細(xì)胞外基質(zhì)同基底膜的降解是惡性腫瘤開(kāi)始浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移邁出的第一步?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)包括幾個(gè)具有重要功能的亞家族成員，其中膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(MT-MMP)具有能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)同基底膜的多種成分的功能，因此MT-MMP在多種腫瘤形成與發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用［1］。本組采用免疫組化的SABC法，檢測(cè)了MTl、2和3-MMP在喉癌相關(guān)組織中的表達(dá)，目的是分析其在喉癌浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮的作用及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選擇于2002年12月至2009年12月期間60例喉癌手術(shù)切除標(biāo)本，均為原發(fā)性喉癌患者，所有患者術(shù)前均未做過(guò)放化療。其中男性33例，女性27例，年齡在35～82之間，平均58.2±8.5歲。根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行劃分，其中32例為頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，28例無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。根據(jù)組織學(xué)劃分，其中高分化鱗癌10例，中分化鱗癌35例，低分化鱗癌15例。按照原發(fā)部位劃分，其中20例為聲門(mén)上型，31例為聲門(mén)型，9例為聲門(mén)下型。

1.2免疫組化染色 免疫組化檢測(cè)的60例喉癌手術(shù)切除標(biāo)本均通過(guò)福爾馬林固定，取材均在24 h內(nèi)完成，通過(guò)石蠟包埋后連續(xù)切片。采用SABC方法進(jìn)行染色，檢測(cè)用SABC免疫組織化學(xué)所需的各種試劑盒與兔抗人MTl、2和3-MMP的多克隆抗體均購(gòu)自福建邁新生物工程有限公司，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，陽(yáng)性對(duì)照使用我院的乳腺癌陽(yáng)性切片，陰性對(duì)照為PBS，在試驗(yàn)中用于替代第一抗體。MT1、2和3-MMP分子的免疫組化陽(yáng)性染色表現(xiàn)為細(xì)胞漿中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒沉著。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 率的比較采用卡方檢驗(yàn)方法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

癌旁非癌組織與腫瘤組織的MTl、2和3-MMP陽(yáng)性率見(jiàn)表1，3個(gè)分子在腫瘤組織的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于癌旁非癌組織(P＜0.01)。

表1 MTl、2和3-MMP在癌組織與癌旁非癌組織的陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果(例，%)

3 討論

浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多因素決定的過(guò)程，是惡性腫瘤的重要標(biāo)志性特征之一。這個(gè)過(guò)程涉及到細(xì)胞外基質(zhì)與基底膜降解、細(xì)胞黏附能力變化、腫瘤細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)以及新生血管形成等影響因素。細(xì)胞外基質(zhì)與基底膜的主要是由膠原蛋白、纖維連接蛋白、層連蛋白、氨基聚糖和蛋白聚糖等生物大分子、巨分子構(gòu)成。目前觀點(diǎn)認(rèn)為細(xì)胞外基質(zhì)與基底膜的降解為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)提供入口，從而有助于轉(zhuǎn)移發(fā)生。基質(zhì)金屬蛋白酶是一類鋅離子依賴性的蛋白酶，具有有效降解細(xì)胞外基質(zhì)與基底膜各種成分的功能，其中MMP-2是能夠降基底膜的主要成分膠原IV，進(jìn)而參與多種腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移過(guò)程。膜型基質(zhì)金屬蛋白酶是基質(zhì)金屬蛋白酶眾多亞家族成員之一，它們都具有激活MMP-2酶原的功能，使其變?yōu)橛谢钚缘腗MP-2。MT1、MT2和MT3-MMP分子結(jié)構(gòu)類似，在羧基末端均為一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，研究表明這種跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)τ诩せ罴?xì)胞膜表面MMP-2酶原是必不可少的結(jié)構(gòu)。最近研究證實(shí)MTl、MT2和MT3-MMP除了能夠?qū)MP-2酶原發(fā)揮激活作用外，還可以有效地降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，例如，MT1-MMP除具有降解明膠的功能外，還具有消化多種類型的膠原的功能［1］。MT2-MMP可以降解細(xì)胞外基質(zhì)的各種大分子，例如纖維連接蛋白與層連蛋白等，MT3-MMP對(duì)III型膠原降解具有重要作用。盡管MTl、MT2和MT3-MMP之間的氨基酸序列具有50%以上的同源性，但三者在不同類型的腫瘤組織中具有不同的表達(dá)模式，例如，在乳腺癌組織中MT1-MMP的表達(dá)量非常高，而MT2-MMP的表達(dá)稍弱些，MT3-MMP則未檢測(cè)到表達(dá);在腎癌組織中，這三種MT-MMP都具有較高的表達(dá)量［2］。本組結(jié)果顯示:MTl、MT2和 MT3-MMP蛋白在癌旁正常組織中的表達(dá)顯著低于喉癌組織，其中MT1-MMP的表達(dá)陽(yáng)性率最高，為85.0%，MT2與MT3-MMP的陽(yáng)性率分別為56.6%與51.7%，但癌旁正常組織無(wú)基底膜重建過(guò)程發(fā)生，因此其表達(dá)量較低或檢測(cè)不到表達(dá)。不同腫瘤的原發(fā)部位與不同分化程度的癌細(xì)胞，其分泌膜型基質(zhì)金屬蛋白酶MTl、MT2和MT3-MMP的量差別不大。通常認(rèn)為喉癌組織或細(xì)胞中MT1、2和3-MMP基因轉(zhuǎn)錄與翻譯水平增強(qiáng)，可能是造成喉癌侵襲與轉(zhuǎn)移的主要原因。總之，膜型基質(zhì)金屬蛋白酶MT1、2和3-MMP在喉癌發(fā)生與轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，MTl-MMP是判斷喉癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的重要指標(biāo)。早期阻斷MT1、2和3-MMP的表達(dá)，能夠抑制喉癌的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移，MT1、2和3-MMP有望成為新抗癌藥物與基因治療的重要靶點(diǎn)。

［1］ 王迎春，李玉蘭．基質(zhì)金屬蛋白酶-2及其組織型抑制因子在肝細(xì)胞癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用．中國(guó)醫(yī)師雜志，2006，(9):1274-1275．

［2］ Nakamura H，Ueno H，Yamashlta K，eta1．Enhanced Production and Activation of Pmgelatinase A Mediated by Membrane-Type 1 Marx Metalloproteinasc in Human Papillary Thyroid Carcinomas．Cancer Research，1999，59:467-473．