微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病抗體篩查及效價測定中的應(yīng)用

李 鑫

（大同市同煤集團同煤總院輸血科，山西大同 037003）

微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病抗體篩查及效價測定中的應(yīng)用

李 鑫

（大同市同煤集團同煤總院輸血科，山西大同 037003）

微柱凝膠技術(shù)；新生兒溶血??；不規(guī)則抗體篩檢；檢測結(jié)果

胎兒與母親血型不相容時，由于胎兒紅細胞進入母體血液循環(huán)，母體產(chǎn)生免疫性IgG抗體，此抗體能通過胎盤作用于胎兒紅細胞，使之產(chǎn)生不同程度溶血，常常造成死胎或流產(chǎn)。如胎兒存活，出生后新生兒體內(nèi)來自母親的IgG抗體繼續(xù)作用造成新生兒紅細胞溶血、出現(xiàn)黃疸、嚴重者死亡。臨床上稱此類疾病為胎兒或新生兒免疫溶血性疾病。我院從2009年10月開展微柱凝膠法不規(guī)則抗體篩檢，到2010年10月共計1100例，檢測結(jié)果如下：

1 材料

1.1 對象 我院2009年10月-2010年10月孕產(chǎn)婦1100例，年齡19-45歲。

1.2 試劑 0.8% A1、B型標準紅細胞；0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細胞；ABO正反定型/Rh（D）血型定型微柱凝膠卡(共6個反應(yīng)孔，依次為A、B、D、ctl、Ac、Bc孔）；低離子/抗人球蛋白微柱凝膠卡(共6個反應(yīng)孔，可做兩人份，依次為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔）。

1.3 儀器 達亞美微柱凝膠卡專用離心機(轉(zhuǎn)速1000r/min，時間10min已設(shè)置好）；達亞美微柱凝膠卡專用保溫孵育器(37℃恒溫，15min已設(shè)置好）；可調(diào)加樣器(1μl -50μl）。

1.4 標本 采集被檢者靜脈血3ml，置37℃水浴30min，3000r/min離心10min，用吸管取血清備用后，把紅細胞配制成5%的紅細胞懸液。

2 方法

2.1 鑒定夫婦ABO血型及Rh(D）血型 將ABO正反定型/Rh(D）血型定型微柱凝膠卡置專用離心機中1000 r/min離心4min，撕去鋁鉑在Ac孔、Bc孔中加入相應(yīng)的0.8%A、B型標準紅細胞和被檢者血清各50μl；在A孔、B孔、D孔、ctl孔中各加被檢者5%的紅細胞懸液10μl；置達亞美微柱凝膠卡專用離心機中離心后，觀察并記錄血型結(jié)果。

2.2 篩查孕婦血液不規(guī)則抗體 將低離子/抗人球蛋白微柱凝膠卡置離心機中1000r/min離心4min根據(jù)檢測需要撕去鋁鉑，在Ⅰ孔、Ⅱ孔、Ⅲ孔中加入相應(yīng)的0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢細胞50μl和孕婦血清各25μl，置達亞美微柱凝膠卡專用保溫孵育器中孵育15min，然后放在專用離心機中離心10min，觀察并記錄抗篩結(jié)果。

2.3 測定抗篩陽性者抗體效價 孕婦血清200μl，加入濃度為0.2M的2-Me液200μl，充分混勻后置37℃孵育30min制成中和血清，取6只試管，第一管加350μl生理鹽水，其余5管各加200μl生理鹽水，取中和血清50μl加入第1管，混勻后取出200μl放于第2管，依次倍比稀釋至第6管，分別是1：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：512；將微柱凝膠低離子/抗人球蛋白卡的6孔封口打開，加入丈夫0.8%的紅細胞懸液50μl，然后分別加各種稀釋度的血清各25μl，將卡置于孵育器中，37℃孵浴15min，然后放在專用離心機中離心10min，發(fā)生凝集的最高稀釋度即為該孕婦血液不規(guī)則抗體的效價。

3 結(jié)果

3.1 新生兒溶血病常見夫婦、新生兒血型及分布 1100例孕產(chǎn)夫婦中易造成新生兒溶血疾病的有98例 ，見表1。

表1 易造成新生兒溶血病的常見夫婦、新生兒血型及分布

3.2 98例孕產(chǎn)婦抗體篩查 陽性者有12例抗體效價≥64，11例是易造成新生兒溶血病的常見夫婦血型，有1例在此之外。

3.3 不規(guī)則抗體篩查 陽性者的效價測定結(jié)果顯示，孕婦出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎及其胎兒新生兒出現(xiàn)溶血、黃疸與孕婦體內(nèi)抗體效價高低有直接關(guān)系。見表2：

表2 12例抗體效價測定結(jié)果與新生兒溶血病的關(guān)系

4 討論

微柱凝膠技術(shù)是利用抗原與相應(yīng)抗體的免疫特異反應(yīng)和微柱凝膠的分子篩作用，通過離心將發(fā)生凝集反應(yīng)的紅細胞阻滯于凝膠之上，未凝集的紅細胞通過凝膠間隙到達凝膠的底部，從而區(qū)分有無凝集，實驗結(jié)果清晰，不需要用顯微鏡觀察，操作簡單，省去了多次洗滌的繁瑣，并且具有血清用量少、反應(yīng)靈敏度高、結(jié)果可以反復(fù)觀察的優(yōu)點。尤其是抗體效價檢測結(jié)果，各梯度的凝集強度一目了然，與傳統(tǒng)的抗人球蛋白實驗比更能準確檢測孕婦血液中的免疫性IgG抗體和效價。統(tǒng)計顯示，1100例孕婦中易造成新生兒溶血病的常見夫婦血型有98例，占8.9%，在鑒定夫婦血型后，對易造成新生兒溶血病的常見夫婦血型的孕婦重點動態(tài)進行不規(guī)則抗體篩查和效價測定。早期發(fā)現(xiàn)、早期預(yù)防和早期針對性治療對避免造成嚴重后果具有重要意義。

（技術(shù)方法欄目編輯:蘇桂蘭）

R722.17

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1004-6879(2011）02-0178-02

2010-12-14）