幾種中草藥對海水養(yǎng)殖中常見病原菌的抗菌作用

李華,李強,付雷

(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部海洋水產(chǎn)增養(yǎng)殖學(xué)重點實驗室,遼寧大連116023)

幾種中草藥對海水養(yǎng)殖中常見病原菌的抗菌作用

李華,李強,付雷

(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部海洋水產(chǎn)增養(yǎng)殖學(xué)重點實驗室,遼寧大連116023)

采用水煎煮法、微波乙醇提取法和微波水提取法對補骨脂、肉桂、黃連、五倍子、石榴皮、大黃、黃芩、苦參、烏梅、白頭翁10種中草藥進行提取,并用其提取液對海水養(yǎng)殖中7種常見致病菌(燦爛弧菌Vibrio splendidus、黃海希瓦氏菌Shewanella marisflavi、哈維氏弧菌Vibrio harveryi、副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、遲鈍愛德華氏菌Edwardsiellosis tarda、海豚鏈球菌Streptococcus iniae、殺鮭氣單胞菌Aeromonas salmonicida)的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)進行了測定,同時進行聯(lián)合藥敏試驗,研究了幾種中草藥對海水養(yǎng)殖中常見病原菌的抗菌作用。結(jié)果表明:五倍子和石榴皮的抑菌殺菌效果最好,五倍子的MIC分別為0.78～1.56 mg/mL(水煎煮法、微波水提取法)、0.39～1.56 mg/mL(微波乙醇提取法),石榴皮的MIC分別為1.56～3.13 mg/mL(水煎煮法)、0.78～1.56 mg/mL(微波乙醇提取法)、0.78～3.13 mg/mL(微波水提取法);五倍子的MBC分別為3.13～6.25 mg/mL(水煎煮法)、1.56～3.13 mg/mL(微波乙醇提取法、微波水提取法),石榴皮的MBC分別為6.25～25 mg/mL(水煎煮法)、3.13～6.25 mg/mL (微波乙醇提取法、微波水提取法)。其次是黃連、黃芩和烏梅,而大黃、補骨脂、肉桂、苦參、白頭翁的抑菌、殺菌效果一般或者較弱。用3種方法提取的中草藥對7種病原菌的抗菌作用依次為:微波乙醇提取法提取液≥微波水提取法提取液≥水煎煮法提取液。聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果表明,復(fù)方五倍子與烏梅、五倍子與甘草對燦爛弧菌,黃芩與甘草對遲鈍愛德華氏菌,石榴皮與烏梅對海豚鏈球菌,五倍子與石榴皮、五倍子與黃芩對黃海希瓦氏菌的抑制分別有協(xié)同作用,該結(jié)果可為水產(chǎn)養(yǎng)殖臨床用藥提供參考資料。

中草藥;抑菌;殺菌;聯(lián)合藥敏

近年來,隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大、養(yǎng)殖種類的增加以及環(huán)境的日益惡化,各類水產(chǎn)養(yǎng)殖病害呈頻發(fā)的態(tài)勢,其中細菌性疾病仍是最常見、危害最大的一類疾病。針對水產(chǎn)動物的細菌性疾病,養(yǎng)殖中主要采取藥物、免疫和生態(tài)防治等方法,其中藥物防治仍是目前應(yīng)用最多,也是最簡單、最直接的方法[1]。中草藥因具有天然、廉價、副作用小等優(yōu)點而備受青睞,尤其使用中草藥可避免耐藥性和藥物殘留超標等問題,符合生產(chǎn)綠色水產(chǎn)品的疾病防治原則[2]。目前國外使用中草藥防治疾病的報道不多,中草藥主要作為免疫增強劑使用,如泰國、韓國學(xué)者進行了艾蒿、五倍子等的抗菌作用研究[3-4]。中國在水產(chǎn)動物疾病防治中使用中草藥的歷史較長,但多數(shù)使用在淡水養(yǎng)殖生產(chǎn)中,且對中草藥的研究多集中于對其藥效的觀察和比較方面,并進行了氣單胞菌[5-7]、假單胞菌[8]、愛德華氏菌[9-10]、弧菌[11]等水產(chǎn)病原菌對部分中草藥的敏感性試驗。而對大多數(shù)中草藥的用藥量則根據(jù)經(jīng)驗或沿用人醫(yī)、獸醫(yī)的用量參照給藥,尤其對海水病原菌抗菌活性的系統(tǒng)研究缺乏資料,配伍也缺少科學(xué)依據(jù)。為此,本研究中作者采用不同方法分別提取10種中草藥,用其提取液對海水養(yǎng)殖中7種常見的病原菌進行了體外抑菌、殺菌試驗和聯(lián)合藥敏系列試驗,以便為進一步臨床應(yīng)用提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用中草藥為補骨脂、肉桂、黃連、五倍子(去蟲尸)、石榴皮、大黃、黃芩、苦參、烏梅和白頭翁,均購于大連奇運生藥店。

試驗用燦爛弧菌Vibrio splendidus(AP722)、黃海希瓦氏菌Shewanella marisflavi(AP629)均由農(nóng)業(yè)部海洋水產(chǎn)增養(yǎng)殖學(xué)重點實驗室分離自患病仿刺參;哈維氏弧菌Vibrio harveryi(ATCC14126)、副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus(KCTC2471)、遲鈍愛德華氏菌Edwardsiellosis tarda(SU100)、海豚鏈球菌Streptococcus iniae(KCTC3657)、殺鮭氣單胞菌Aeromonas salmonicida(MT004)均由韓國釜慶大學(xué)魚病預(yù)防實驗室贈送。

1.2 方法

1.2.1 中草藥有效成分的提取 1)水煎煮法每種中草藥分別取20 g,加水200 mL,浸泡0.5 h煎煮沸騰后文火煮0.5 h,過濾煎液,將藥物殘渣繼續(xù)煎煮,共煎煮3次,合并濾液,濃縮至1 g/mL含藥量,于4℃下保存(48 h內(nèi)使用)。

2)微波乙醇提取法 每種中草藥分別取20 g,經(jīng)粉碎機粉碎后,加入體積分數(shù)為70%的乙醇溶液200 mL,浸泡0.5 h后,置于微波爐(NJL07-3型試驗專用微波爐,南京杰全微波設(shè)備有限公司生產(chǎn))內(nèi),通過調(diào)節(jié)脈沖時間間接控制溫度,使之保持在沸點以下,提取10 min,將藥液過濾,濃縮藥液至20 mL,使其含藥量達到1 g/mL,于4℃下保存(48 h內(nèi)使用)。

3)微波水提取法 每種中草藥分別取20 g,經(jīng)粉碎機粉碎后,加入蒸餾水200 mL,浸泡0.5 h后,置于微波爐內(nèi),通過調(diào)節(jié)脈沖時間間接控制溫度,使之保持在沸點以下,提取12 min(水比乙醇水溶液的沸點高),將藥液過濾,濃縮藥液至20 mL,使其含藥量達到1 g/mL,于4℃下保存(48 h內(nèi)使用)。

1.2.2 中草藥的體外抗菌作用 1)單味中草藥的抗菌活性 將7種病原菌分別接種于胰蛋白胨大豆肉湯(TSB,添加15 g/L NaCl)培養(yǎng)基中,置于26℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。離心(8 000 r/min,20 min)去除培養(yǎng)基,用生理鹽水重懸離心洗滌2次,用生理鹽水稀釋至病原菌終濃度為2 ×106個/mL。

每種中草藥提取液設(shè)置10個濃度梯度(2倍倍比稀釋),每個梯度設(shè)置3個平行組,每種中草藥設(shè)置1個空白對照組,進行7種病原菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)的抗菌試驗。具體操作如下:

1#試管中預(yù)先加入1.8 mL MH肉湯(MHB,添加15 g/L NaCl),2#～10#試管中分別加入1 mL MH肉湯,之后將0.2 mL藥液加入1#試管中,混勻。再從1#試管取出1 mL加入到2#試管,依次類推至10#試管,最后10#試管棄去1 mL,每個梯度試管中均加入50 μL的菌懸液,對照管中加入1 mL MH肉湯及50 μL的生理鹽水。26℃下培養(yǎng), 24 h后肉眼觀察細菌的生長情況,無菌生長的最高稀釋梯度為藥物的最低抑菌濃度(MIC)。將無菌生長的最高稀釋梯度細菌懸液涂布于相應(yīng)的平板上,于26℃下培養(yǎng)24 h,無菌落生長且含藥量最少的濃度值即為最低殺菌濃度(MBC)。

2)聯(lián)合藥敏試驗 藥敏紙片制備的方法如下:將新華1號定性濾紙用打孔器打成直徑為6 mm的紙片,于121℃下滅菌20 min,100℃下烘干;將滅菌后的紙片放于水煎煮法提取的藥液中(每110張吸藥1 mL,每張紙片飽和含藥量為9 μL)浸泡并翻動0.5 h;在無菌干燥培養(yǎng)皿中攤開,吹干,再置于無菌加塞小瓶中,最后置于干燥器中或者冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

按照每一種致病菌分別對應(yīng)10種中草藥的藥敏紙片,每兩種藥敏紙片達到兩兩相距2 cm的原則,進行藥物的聯(lián)合抑菌試驗。每組設(shè)1個平行。操作方法如下:將0.5 mL菌懸液(8×105個/mL)涂布于MH瓊脂(添加15 g/L NaCl)平板上,表面稍干后貼上預(yù)先制備好的藥敏紙片,26℃下恒溫培養(yǎng)24 h,測量抑菌圈直徑并拍照。根據(jù)抑菌圈之間的細菌生長狀況(藥物之間相鄰一側(cè)和藥物相背的單獨一側(cè)的抑菌圈的大小相比較),藥物的關(guān)系劃分為協(xié)同、拮抗和相互間無作用。

2 結(jié)果

2.1 用不同方法提取的中草藥的抗菌活性

2.1.1 水煎煮法 用水煎煮法提取的中草藥對7種病原菌的體外抑菌、殺菌結(jié)果表明:五倍子、石榴皮的抑菌殺菌效果最好,MIC分別為0.78 mg/mL(2株)、1.56 mg/mL(5株)和1.56 mg/mL (4株)、3.13 mg/mL(3株),MBC分別為3.13 mg/mL(5株)、6.25 mg/mL(2株)和6.25 mg/mL (5株)、12.5 mg/mL(1株)、25 mg/mL(1株);其次是黃連、黃芩和烏梅,而大黃、補骨脂、肉桂、苦參、白頭翁的抑菌效果一般或較弱(表1)。

2.1.2 微波乙醇提取法 用微波乙醇法提取的中草藥有效成分對7種病原菌的體外抗菌試驗結(jié)果趨勢與水煎煮法的結(jié)果較為一致,但是整體抑菌、殺菌效果要比水煎煮法好(表2)。如五倍子和石榴皮的MIC分別為0.39 mg/mL(1株)、0.78

mg/mL(5株)、1.56 mg/mL(1株)和0.78 mg/mL(2株)、1.56 mg/mL(5株),MBC分別為1.56 mg/mL(3株)、3.13 mg/mL(4株)和3.13 mg/mL(3株)、6.25 mg/mL(4株)。

表1 用水煎煮法提取的中草藥有效成分對致病菌的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度Tab.1 The bacteriostatic and bactericidal effect of Chinese herb medicines by boiled water extractionmg/mL

表2 用微波乙醇法提取的中草藥有效成分對致病菌的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度Tab.2 The bacteriostatic and bactericidal effect of Chinese herb medicine by ethanol microwave extractionmg/mL

2.1.3 微波水提取法 用微波水提取法提取的中草藥的有效成分對病原菌的體外抗菌試驗結(jié)果基本上與其它兩種方法的效果一致,但抑菌效果更接近于微波乙醇提取法,只是整體效果稍低于后者(表3)。如五倍子和石榴皮的MIC分別為0.78 mg/mL(4株)、1.56 mg/mL(3株)和0.78 mg/mL (1株)、1.56 mg/mL(5株)、3.13 mg/mL(1株), MBC分別為1.56 mg/mL(1株)、3.13 mg/mL(6株)和3.13 mg/mL(2株)、6.25 mg/mL(5株)。微波水提取法與水煎煮法相比,對多數(shù)菌株的MIC和MBC降低一個濃度級;而與微波乙醇提取法相比,對部分菌的MIC和MBC數(shù)值高一些。

表3 用微波水提取法提取的中草藥有效成分對致病菌的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度Tab.3 The bacteriostatic and bactericidal effect of Chinese herb medicine by bioled water microwave extractionmg/mL

2.2 聯(lián)合藥敏試驗

根據(jù)抑菌圈的形狀、大小和擴散方向,從10種中草藥對7種病原菌的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果中共篩選出6組有協(xié)同作用的中草藥復(fù)方。黃芩與甘草(復(fù)方一,圖1-A)相鄰一側(cè)的抑菌圈比兩者相背一側(cè)的抑菌圈明顯擴大,表明復(fù)方黃芩與甘草對抑制愛德華氏菌有明顯的協(xié)同作用。五倍子與甘草(復(fù)方二)、五倍子與烏梅(復(fù)方三)(圖1-B)均是相鄰一側(cè)的抑菌圈比兩者相背一側(cè)的抑菌圈顯著擴大,尤其是甘草兩端相差極為明顯。由此判斷五倍子分別與烏梅、甘草對抑制燦爛弧菌具有明顯的協(xié)同作用。石榴皮與烏梅(復(fù)方四,圖1-C)相鄰一側(cè)的抑菌圈比兩者相背一側(cè)的抑菌圈明顯擴大,而補骨脂分別與石榴皮、烏梅相鄰一側(cè)和相背一側(cè)的抑菌圈沒有差別。由此判斷石榴皮與烏梅對抑制鏈球菌存在明顯的協(xié)同作用。五倍子與石榴皮(復(fù)方五)、五倍子與黃芩(復(fù)方六)(圖1-D),均是相鄰一側(cè)的抑菌圈比兩者相背一側(cè)的抑菌圈明顯擴大。由此判斷五倍子分別與黃芩、石榴皮存在協(xié)同作用,兩組復(fù)方藥對黃海希瓦氏菌的抑制效果明顯增強。

圖1 中草藥的聯(lián)合藥敏試驗Fig.1 Susceptibility test of pathogenic bacteria to the combination of Chinese herbal medicines

3 討論

3.1 不同中草藥抑菌、殺菌效果的比較

補骨脂、肉桂、黃連、五倍子、石榴皮、大黃、黃芩、苦參、烏梅、白頭翁10種中草藥的提取液對燦爛弧菌、黃海希瓦氏菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌、海豚鏈球菌、遲鈍愛德華氏菌、殺鮭氣單胞菌7種致病細菌的體外抑菌、殺菌試驗結(jié)果表明:五倍子、石榴皮、黃芩、黃連和烏梅的抑菌、殺菌效果較為明顯,其中五倍子和石榴皮的抑菌效果最好,其次為黃芩、黃連和烏梅。

前期研究已證實,五倍子對溫和氣單胞菌[12-13]、愛德華氏菌[13]、柱狀屈橈桿菌[13]、嗜水氣單胞菌[14]、弧菌[11]等均具有明顯的抑制或殺滅作用。本研究結(jié)果表明,五倍子較其它9種藥物對7種海水病原菌的抑制作用最廣泛且明顯,該結(jié)果與前人的研究結(jié)果一致。同時可以證明,五倍子提取液不僅對淡水病原菌效果好,對海水病原菌也同樣具有顯著抗菌活性。本研究中用于測定抗菌活性的病原菌中有3種可導(dǎo)致仿刺參患病,為此,根據(jù)本試驗結(jié)果,作者將五倍子用于仿刺參細菌病的預(yù)防和治療試驗,并取得了較好的效果(另文發(fā)表)。五倍子富含鞣酸,對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有較強的抑制和殺滅作用,具有抗菌解毒、收斂止血、斂肺降火、祛腐生新、澀腸止瀉等作用[15]。五倍子在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)及淡水養(yǎng)殖生產(chǎn)中被廣泛使用,關(guān)于對其殺菌機理的研究也較多。據(jù)黃為華[16]報道,鞣質(zhì)中的O-H鍵波長正好在許多細菌長度范圍之內(nèi),化學(xué)鍵的共振有殺菌的作用,并列舉了化學(xué)抗菌藥物的分子結(jié)構(gòu)加以驗證。石榴皮中含鞣質(zhì)、蠟、樹脂、甘露醇、糖、樹膠、菊粉、黏質(zhì)、沒食子酸、蘋果酸、果膠、草酸鈣、異槲皮甙和石榴皮堿等[15]。已有研究表明,石榴皮對哈維氏弧菌、河流弧菌和鰻弧菌均具有很好的抑制作用[17-18]。本研究結(jié)果表明,石榴皮不僅對弧菌具有很強的抑制作用,對海水來源的愛德華氏菌、鏈球菌、氣單胞菌等也具有很好的抑菌殺菌效果。

黃芩、黃連在臨床上屬常用中藥,其有效成分為黃酮類化合物和小檗堿。羅琳等[19]的研究表明,黃芩對魚害粘球菌具有很好的抑菌效果,最低抑菌濃度為1.56 mg/L。鐘全福等[20]的研究表明,黃芩、黃連對非01群霍亂弧菌、溫和氣單胞菌、魯氏不動桿菌、遲鈍愛德華氏菌和嗜水氣單胞菌均具有明顯的抑制作用。本試驗結(jié)果表明,黃芩、黃連對海水病原菌也同樣具有較強的抗菌活性。烏梅富含有機酸,具有一定的殺菌作用。邱慶連等[11]的研究表明,烏梅對擬態(tài)弧菌、梅氏弧菌和霍利斯弧菌均具有抗菌活性,最低抑菌濃度為0.461～0.922 mg/mL。本試驗結(jié)果顯示,烏梅對7種海水病原菌也具有抑制作用。

由此可見,五倍子、石榴皮、黃芩、黃連和烏梅可用于海水養(yǎng)殖中細菌性疾病的防治,具有進一步的開發(fā)價值。

3.2 中草藥不同提取方法的比較

本試驗結(jié)果表明:用微波乙醇提取法提取的中草藥,其抑菌、殺菌效果最好;采用微波水提取法與水煎煮法提取時,效果差別不大。中草藥中所含有效成分的提取純化即目標制劑所用原料的獲得是整個中草藥制劑中最重要、最關(guān)鍵的技術(shù)[21]。所有提取方法中大部分技術(shù)的基本原理是加熱提取。研究顯示,用傳統(tǒng)煎煮法提取時,中草藥的浸出效率僅為55.5%[22]。有關(guān)用微波萃取法提取中草藥的有效成分是近期國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點。如Jocelyn Pare等[23]創(chuàng)造性地提出了“細胞破壁理論”,認為細胞內(nèi)部含水對微波能吸收較多,而周圍非極性溶劑則吸收微波能較少,因而在細胞內(nèi)部產(chǎn)生熱應(yīng)力,導(dǎo)致細胞破裂,因而強化了提取過程。Hao等[24]應(yīng)用微波萃取技術(shù)從黃花蒿中提取青蒿素,結(jié)果既省時,提取率又高,經(jīng)12 min微波可達到92.1%的提取率。Yang等[25]采用密閉式微波裝置從人參中提取活性成分,證明微波輔助提取比索氏提取快60倍,比超聲波提取快20倍。大量試驗證明,微波技術(shù)在中草藥有效成分的提取中具有很強的優(yōu)勢。本試驗結(jié)果也證明,用微波提取法的效果比水煎煮法好,這為規(guī)?；a(chǎn)中草藥制劑并大面積用于養(yǎng)殖生產(chǎn)提供了很好的技術(shù)資料。

然而,在實際應(yīng)用時,采用水煎煮法的成本最低,加熱裝置較容易獲得;而采用微波提取時,民用微波爐成本較低,但容積小,不適合大劑量的提取,而用于工業(yè)生產(chǎn)的微波爐雖然容積很大,但成本高。因此,筆者認為,如果條件允許,大量的工業(yè)提取或者藥廠制藥可以采用微波提取的方法,而養(yǎng)殖戶自己制備藥物時可選用水煎煮法。

3.3 中草藥的聯(lián)合用藥

采用10種中草藥對7株菌進行聯(lián)合藥敏試驗,篩選出6組中草藥復(fù)方,本課題組使用這些復(fù)方中草藥對仿刺參“化皮病”進行室內(nèi)預(yù)防、治療以及對自然發(fā)病仿刺參的治療試驗,均顯示出很好的預(yù)防和治療效果(另文發(fā)表)。

另外,單味藥物抗菌試驗表明,五倍子、烏梅、石榴皮、黃芩、黃連對水產(chǎn)致病菌的抑制效果明顯,可以作為細菌性疾病的防治藥物,而甘草則適合作為五倍子、黃芩等的輔藥配伍使用。

五倍子和烏梅兩種中草藥,在中醫(yī)理論中均有斂肺降火、澀腸止瀉、斂汗止血、收濕斂瘡等功效。兩種中草藥配伍時,可能由不同的成分達到同樣的抑菌作用,相互補充并產(chǎn)生協(xié)同作用。甘草性平,味甘,有解毒、祛痰、止痛、解痙以至抗癌等藥理作用,在中醫(yī)理論中甘草最重要的作用是調(diào)和諸藥,緩解藥物毒性、烈性。筆者認為,甘草分別與五倍子和黃芩配伍,增強了抑菌效果,其原因是在五倍子和黃芩本身抑菌效果較強的情況下,甘草對這兩種藥物的效果進行調(diào)和,起到協(xié)同的作用。黃芩的主要成分為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等,這些成分是五倍子中所沒有的,將黃芩與五倍子配伍,可使抑菌效果增強。石榴皮中含量最多的成分為鞣質(zhì),其與烏梅配伍的原理和五倍子與烏梅配伍的原理可能相同。另外,石榴皮中含有蠟、樹脂、甘露醇、糖、樹膠、菊粉、黏質(zhì)等五倍子所沒有的成分,這些微量成分可能也存在一定的抑菌效果,一定程度上彌補了五倍子成分單一的空缺,可使其抑菌作用增強。中草藥的配伍及其作用原理較復(fù)雜,對其抗菌成分以及各組分間相互作用的深入研究,將有助于弄清中草藥的作用機制,從而進一步開發(fā)利用中草藥。

[1] 黃艷平,楊先樂,湛嘉,等.水產(chǎn)動物疾病控制的研究和進展[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報,2004,13(1):60-66.

[2] 呂欣榮,肖克宇.中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J].內(nèi)陸水產(chǎn),2007(9):29-31.

[3] Jo M R,Kim J W,Kim D S.Antimicrobial effects of natural plant and mushroom,Dicyphora indusiata extracts on fish pathogenic bacteria[J].Journal of the Korean Fisheries Society,2002,35: 578-582.(in Korean)

[4] Kim Y G,Rho B J,Lee K K.Antimicrobial activity of Artemisia princeps var.orientalis essential oil against fish pathogenic bacteria [J].Journal of Fish Pathology,1994,7:105-112.(in Korean)

[5] 曹良,李英倫.斑點叉尾鮰“腹水癥”病原的體外中藥藥敏實驗[J].水生態(tài)學(xué)雜志,2009,2(1):95-97.

[6] 肖輝,蘇振霞,單娟娟,等.16種中草藥提取物對嗜水氣單胞菌的體外抑菌實驗[J].水生態(tài)學(xué)雜志,2009,2(3):53-56.

[7] 張海濱,楊桂芳.12種中草藥對嗜水氣單胞菌殺傷能力的研究[J].水產(chǎn)科學(xué),2006,25(1):16-18.

[8] 徐欣,陳軍昌.五種中草藥對河蟹腐敗假單胞菌的抑菌作用[J].水產(chǎn)科學(xué),2002,21(2):24-25.

[9] 李瑞,白東清,郭永軍,等.9種中草藥及17種組方對遲鈍愛德華氏菌的體外抑茵試驗[J].水利漁業(yè),2008,28(4):114-116.

[10] 朱壯春,史相國,張淑杰,等.中草藥對牙鲆病原遲鈍愛德華氏菌的體外抑制作用研究[J].水產(chǎn)科學(xué),2007,26(5):278-281.

[11] 邱慶連,潘清清,張友平,等.五倍子、烏梅等45種中草藥提取物對鋸緣青蟹致病弧菌的抑菌作用研究[J].浙江海洋學(xué)院

學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,29(1):34-38.

[12] 姜蕾,鄭曙明.五倍子對鯉魚細菌性敗血癥的藥效試驗初報[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2006,22(5):460-464.

[13] 姜蕾,鄭曙明.五倍子對3種致病菌的體外抑菌和急性毒性試驗[J].水利漁業(yè),2005,25(6):89-109.

[14] 吳惠仙,薛俊增.中華絨螯蟹與日本沼蝦對兩菌株的中草藥篩選[J].水利漁業(yè),2005,25(3):84-85.

[15] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000.

[16] 黃為華.化學(xué)鍵振動共振殺菌機理在含鞣質(zhì)類中草藥的抗菌性能上的驗證[J].天津商學(xué)院學(xué)報,2006,26(1):70-72.

[17] 金珊,王國良,趙青松,等.中草藥對海水養(yǎng)殖鱸魚病原菌的抑菌效果研究[J].海洋科學(xué),1999(5):8-10.

[18] 金珊,王國良,趙青松,等.海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖鱸魚皮膚潰瘍病的防治藥物[J].臺灣海峽,2000,19(2):233-236.

[19] 羅琳,蔡雪峰,成中芹.5種常規(guī)中草藥聯(lián)用對魚害粘球菌的藥效研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(5):463-465.

[20] 鐘全福,樊海平.中草藥對歐洲鰻病原菌的抑制作用研究[J].水利漁業(yè),2002,22(4):44-46.

[21] 劉振武,李滿飛.中藥產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展與GAP[J].中草藥, 1999,30(11):4-7.

[22] 尹梅,尹全植.湯劑提取效率的研究[J].中成藥,1995,17 (6):45-46.

[23] Jocelyn Pare J R,Belanger J M R,Stafford S S.Microwave-assisted process(MAPTM):a new tool for the analytical laboratory [J].TrAC Trends in Analytical Chemistry,1994,13(4):176-184.

[24] Hao J Y,Han W,Huang S D,et al.Microwave-assisted extraction of artemisinin from Artemisia annua L.[J].Separation and Purification Technology,2002,28(3):191-196.

[25] Yang Y,Chen L,Zhang X X,et al.Microwave assisted extraction of major active ingredients in Panax quinquefolium L.[J].Journal of Liquid Chromatography&Related Technologies,2005,27 (20):3203-3211.

Antibacterial action of several Chinese herbal medicines to major marine pathogenic bacteria

LI Hua,LI Qiang,FU Lei
(Key Laboratory of Mariculture,Agriculture Ministry,PRC,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China)

The minimum inhibitory concentrations and minimum bactericidal concentrations of 10 kinds of Chinese herbal medicines including Fructus Psoraleae,Cortex Cinnamomi,Rhizoma Coptidis,Galla Chinensis,Pericarpium Granati,Radix et Rhizoma Rhei,Radix Scutellariae,Radix Sophorae Flavescentis,Fructus Mume and Radix Pulsatillae extracted by decoction by boiled water,microwave by ethanol and microwave by boiled water to 7 marine pathogenic bacteria strains were determined.Also,susceptibility of the pathogenic bacteria to the combination of Chinese herbal medicines was carried out to evaluate antibacterial action of several Chinese herbal medicines to marine major pathogenic bacteria.It was found that there were best bacteriostatic and bactericidal effect of Galla Chinensis and Pericarpium Granat,followed by Rhizoma Coptidis,Radix Scutellariae and Fructus Mume,and then Radix et Rhizoma Rhei,Fructus Psoraleae,Cortex Cinnamomi,Radix Sophorae Flavescentis and Radix Pulsatillae. The MIC was found to be 0.78-1.56 mg/mL(decoction or microwave by water)and 0.39-1.56 mg/mL(microwave by ethanol)for Galla Chinensis,1.56-3.13 mg/mL(decoction by water),0.78-1.56 mg/mL(microwave by ethanol)and 0.78-3.13 mg/mL(microwave by water)for Pericarpium Granati.MBC was 3.13-6.25 mg/mL (decoction by water)and 1.56-3.13 mg/mL(microwave by ethanol or water)for Galla Chinensis,6.25-25 mg/ mL(decoction by water),3.13-6.25 mg/mL(microwave by ethanol or water)for Pericarpium Granati.Chinese herbal medichines extracted with different methods showed differently antibacterial effect,being arranged as microwave by ethanol≥microwave by water≥decoction by water.There were synergistic inhibition of combination of Galla Chinensis and Fructus Mume,Galla Chinensis and Radix Glycytthizae for Vibrio splendidus,Radix Scutellariae and Radix Glycytthizae for Edwardsiellosis tarda,Pericarpium Granat and Fructus Mume for Streptococcus iniae, Galla Chinensis and Pericarpium Granati,Galla Chinensis and Radix Scutellariae for Shewanella marisflavi.

Chinese herbal medicine;bacteriostatic;bactericide;combined sensitivity test

2095-1388(2011)01-0006-06

S941.42

A

2010-03-17

大連市科技攻關(guān)項目(2004B1NC030,2006B11NC109);海洋公益性行業(yè)科研專項(200905020);遼寧省海洋與漁業(yè)廳項目(201005)

李華(1958-),女,教授。E-mail:lihua@dlou.edu.cn