瞬時(shí)受體電位通道C3/6與大電導(dǎo)鈣激活鉀通道在腎小球足細(xì)胞表面轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用

由Slo 1基因編碼的大電導(dǎo)鈣激活鉀通道（BKCa）與各種瞬時(shí)受體電位通道C（TRPCs）在許多細(xì)胞系上共表達(dá)，其中包括腎小球的足細(xì)胞（臟層上皮細(xì)胞）。在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)免疫共沉淀和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）pull-down方法證實(shí)在分化的足細(xì)胞系上的BKCa通道與內(nèi)源性的TRPC3/6通道相聯(lián)系。2種TRPC通道在足細(xì)胞上與Slo1共定位，并且在人胚腎(HEK)293T細(xì)胞上TRPC通道蛋白與Slo1瞬時(shí)共表達(dá)。在HEK293T細(xì)胞上，經(jīng)細(xì)胞表面生物素化方法以及共聚焦顯微鏡測(cè)定，TRPC6的表達(dá)可增加Slo1亞基的剪切變體(Slo1 VE?DEC)。經(jīng)膜片鉗全細(xì)胞以及膜內(nèi)面向外記錄顯示，BKCa通道電流會(huì)隨TRPC6的共表達(dá)而增大。相反，TRPC3無(wú)論對(duì)HEK293T細(xì)胞上BKCa的表達(dá)還是對(duì)電流峰值均無(wú)影響。在足細(xì)胞，經(jīng)小干擾RNA（siRNA）敲除內(nèi)源性TRPC6，使內(nèi)源性Slo1通道細(xì)胞表達(dá)下降，但是敲除TRPC3卻沒(méi)有影響。同時(shí)，敲除TRPC6也會(huì)降低足細(xì)胞BKCa通道的電壓激活外向電流，TRPC3則無(wú)此作用。這些資料表明TRPC3/6通道蛋白能與Slo1相結(jié)合，并且這種共定位可能成為BKCa通道激活的Ca2+庫(kù)。TRPC6通道在足細(xì)胞上BKCa通道亞基的表達(dá)調(diào)控中起重要作用。由Slo1基因編碼（也被稱為KCNMA1）的大電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道（BKCa）在大量可興奮或不可興奮組織上均有表達(dá)并調(diào)控許多生理進(jìn)程。鈣離子通過(guò)結(jié)合到BKCa通道C末端的復(fù)合位點(diǎn)，將其電壓激活的依賴性轉(zhuǎn)換為生理水平下的膜電位。BKCa通道通常表現(xiàn)出對(duì)鈣離子相對(duì)較低的親和力，并且只在鈣離子濃度高于胞漿鈣離子濃度時(shí)才會(huì)簇狀激活。胞質(zhì)鈣離子緩沖實(shí)驗(yàn)操作提示BKCa通道的激活至少需要質(zhì)膜上的鈣離子通道的部分共定位。與此相一致的是，在大腦中表達(dá)的BKCa通道顯示能結(jié)合在不同類(lèi)型電壓激活鈣通道的亞基上，從而形成通道復(fù)合體，這種排列提供了一種快速負(fù)反饋的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，因?yàn)锽KCa通道的鈣依賴激活會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元的復(fù)極化，電壓激活鈣離子通道的失活以及鈣離子內(nèi)流的終止。