日本血吸蟲毛蚴對不同密度和距離湖北釘螺易感性的初步實驗觀察

汪 偉,李洪軍,李幼子,邢云天,曲國立,魏劍英,戴建榮,梁幼生

(1.江蘇省血吸蟲病防治研究所,江蘇 無錫 214064; 2.衛(wèi)生部寄生蟲病預(yù)防與控制技術(shù)重點(diǎn)實驗室,江蘇無錫 214064)

釘螺(Oncomelania)是日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)的唯一中間宿主,是構(gòu)成血吸蟲病傳播的必要環(huán)節(jié),凡有血吸蟲病流行的地方必有釘螺孳生[1-2]。消滅釘螺作為阻斷血吸蟲病傳播的一項重要措施,在我國的血吸蟲病防治策略中一直占有重要地位[3-5]。經(jīng)過多年的積極防治,我國目前主要的有螺區(qū)被壓縮在長江中下游地區(qū)的外灘。但是自然因素使得這些地區(qū)的釘螺難以消滅[6-8]。闡明釘螺密度與釘螺感染概率間的關(guān)系,有助于認(rèn)識日本血吸蟲病傳播規(guī)律。既往我們已在模擬現(xiàn)場條件下進(jìn)行了初步研究[9],本實驗采用定量毛蚴投放感染不同距離、不同密度釘螺,以了解不同密度釘螺與感染概率的關(guān)系,為制定滅螺規(guī)劃提供依據(jù),同時為進(jìn)一步研究血吸蟲病傳播動力學(xué)打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗釘螺

實驗用釘螺采自江蘇省鎮(zhèn)江市丹徒區(qū)江灘,室內(nèi)飼養(yǎng)2個月,采用群體逸蚴法經(jīng)5次逸蚴,確定為無血吸蟲感染的成螺為實驗用釘螺。

1.1.2 毛蚴

日本血吸蟲毛蚴取自人工重感染的日本血吸蟲病兔肝臟(每兔感染 1500尾蚴,感染后 45 d解剖),經(jīng)組織粉碎機(jī)搗碎后,通過 120孔/25.4 mm和 260孔/25.4 mm兩層尼龍絹篩過濾,取260孔/25.4 mm尼龍絹篩上的殘留物置于三角燒瓶,加脫氯水后室溫(25℃)下孵化毛蚴。收集2 h內(nèi)三角燒瓶頸部含毛蚴的孵化水,用吸管取 1 mL加碘液,殺死毛蚴,在顯微鏡下進(jìn)行定量計數(shù),確定水中毛蚴的密度。

1.1.3 實驗用螺袋

用普通窗紗制成10 cm×15 cm的螺袋,袋內(nèi)按不同密度(5、10、50、100只/袋)放置實驗釘螺備用。

1.2 現(xiàn)場選擇

在江蘇省鎮(zhèn)江市丹徒選擇一水體無污染性的內(nèi)陸魚塘作為實驗現(xiàn)場,大小為20 m×25 m,水深1.5 m。

1.3 方法

在水溫為 25 ℃的條件下,以魚塘中心為基點(diǎn),在其東、西、南、北4個方向的1、2、3、5 m處分別放置裝有5、10、50、100只/袋4個不同密度釘螺的螺袋,數(shù)量分別為20、10、8、4袋(圖1),然后在基點(diǎn)處一次性投放20 000條新孵化出的毛蚴; 4 h后,取出螺袋,將相同距離相同密度的釘螺從螺袋內(nèi)撿出,分盤置室溫下(25～28 ℃)常規(guī)飼養(yǎng),并于8周后解剖觀察釘螺感染情況。實驗分5、10、50、100只/袋共4個釘螺密度組進(jìn)行。

圖1 現(xiàn)場實驗示意圖Fig.1 Schematic diagram of the field experiment

1.4 統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2003建立數(shù)據(jù)庫,分別計算各組釘螺感染率,并采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。釘螺密度、距離與釘螺受感染概率之間的關(guān)系采用Logistic回歸模型進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

不同距離、不同密度釘螺在感染情況解剖結(jié)果見表1。結(jié)果顯示,在距離毛蚴投放處1、2、3、5 m,分別放置密度為5、10、50、100只/袋的4個組釘螺,感染 4 h后帶回室內(nèi)飼養(yǎng)(90±1) d,經(jīng)解剖后發(fā)現(xiàn),其感染率分別為 7.06%、4.35%、2.47%和 1.23%,4.55%、4.44%、4.11%和2.27%,2.62%、1.58%、1.29%和1.1%,2.36%、4.04%、2.73%和1.5%。以釘螺感染率(P)為因變量,距離(d)為自變量,釘螺密度(D)為啞變量(表 2),構(gòu)建的 Logistic回歸模型為: ln(P/1－P)=-2.627+0.176×D1-0.713×D2-0.230×D3-0.322×d。公式中D1、D2、D3分別為密度 1,密度 2,密度3。即在控制密度條件下,距離每增加1 m,釘螺感染可能性降低77.7%; 在控制距離條件下,50、100只/袋密度組釘螺感染陽性率和 10只/袋組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果提示,釘螺感染概率與距毛蚴投放的距離成反比。

3 討論

經(jīng)過多年積極防治,我國的血吸蟲病防治工作取得了舉世矚目的成績,主要表現(xiàn)為血吸蟲病人數(shù)大幅度減少,釘螺尤其是感染性釘螺面積顯著壓縮[10-15]。血吸蟲是血吸蟲病的病原,血吸蟲病人或病畜排出蟲卵,蟲卵入水孵化出毛蚴,毛蚴進(jìn)入中間宿主螺體內(nèi)發(fā)育成尾蚴,當(dāng)人或畜接觸含有尾蚴的疫水時感染,尾蚴在宿主體內(nèi)發(fā)育成童蟲,童蟲在宿主體內(nèi)移行并發(fā)育為成蟲,雌雄成蟲合抱產(chǎn)卵,從而構(gòu)成了整個血吸蟲的生活史。而這其中,毛蚴感染螺宿主是構(gòu)成血吸蟲病流行中的不可缺失的重要環(huán)節(jié)。在自然條件下,水溫、水質(zhì)、水的 pH值和流速、風(fēng)力及風(fēng)向、陽光和紫外線照射、毛蚴數(shù)量、螺群密度等因素,均可影響血吸蟲毛蚴感染螺宿主[16]。

控制與消滅釘螺作為我國血吸蟲病防治策略的重要組成部分,在我國控制與消除血吸蟲病防治工作進(jìn)程中發(fā)揮了巨大作用[4,17-19]。經(jīng)過半個多世紀(jì)以來的積極防治,目前我國的主要有螺區(qū)被壓縮在長江中下游沿岸的江湖洲灘地區(qū)。由于自然因素使得這些地區(qū)的釘螺難以消滅,再加上目前我國傳染源控制尚缺乏行之有效的措施,使得這些地區(qū)成為血吸蟲病易感地帶和危害人類健康的疫源地[20-22]。研究在傳染源難以控制的條件下,釘螺密度與釘螺受感染概率的關(guān)系,對于日本血吸蟲病傳播規(guī)律的認(rèn)識,以及在有限的衛(wèi)生資源前提下,分清輕重緩急,制定切實可行的滅螺規(guī)律,使得有限的衛(wèi)生資源得到合理配置具有重要指導(dǎo)意義。

研究表明,不論在室內(nèi)、水溝或河道,對一定量的釘螺,毛蚴數(shù)量愈多,釘螺的感染率愈高,兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系。同時,釘螺感染率與毛蚴投放處的距離和水體大小成反比[24-25]。根據(jù)一次牛糞質(zhì)量,以中度感染克糞蟲卵數(shù)(EPG)和蟲卵孵化率推算,其約可孵化出 20 000條毛蚴,因此,本研究選擇一湖區(qū)現(xiàn)場,采取定量毛蚴(20 000條)感染不同距離、不同密度釘螺,以調(diào)查釘螺感染率與釘螺密度和距離間的關(guān)系,探討污染源的危害范圍。結(jié)果顯示,在釘螺密度一定的情況下,釘螺受感染概率與毛蚴投放處的距離成反比; 但是,未得出釘螺感染率與釘螺密度之間的線性關(guān)系,可能與密度設(shè)置有關(guān)。同時,本次實驗未獲得釘螺感染率為 0的數(shù)據(jù),這將有待于進(jìn)一步研究。

表1 現(xiàn)場不同密度、不同距離釘螺對毛蚴的感染性Tab.1 Infectivity of S.japonicum miracidium to O.hupensis snails with different densities at different distances in the field

表2 SPSS軟件中啞變量設(shè)置Tab.2 Dummy variable in SPSS

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