維生素E對免疫抑制產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的調(diào)控效應(yīng)

彭炳勇 高玉鵬 鄭海祖 王春江 紀(jì)建新 皇甫一凡

由應(yīng)激和疾病等因素造成的免疫抑制是目前家禽生產(chǎn)中的一大常見問題，常被人們忽略的疫苗接種失敗或者一些造成亞臨床癥狀的病毒往往會造成免疫抑制，如：傳染性法氏囊病、雞傳染性貧血、馬立克氏病、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病、雞白血病等(Shini,2010;Sharma,2000;Markowski,2003;Islam,2002)。免疫抑制增加了雞群的發(fā)病率和死亡率，已給家禽業(yè)造成了較大的經(jīng)濟損失。篩選和開發(fā)效果良好、毒副作用小、無殘留、經(jīng)濟實用的，能改善和防止免疫抑制發(fā)生的免疫調(diào)控劑尤為重要，如鯊烯、L-硫辛酸、多不飽和脂肪酸和望江南提取物（Subramanian,2006;Selvakumar,2006;He,2007;Bilal,2001）等。

自1922年發(fā)現(xiàn)維生素E是老鼠繁殖性能必不可少的營養(yǎng)因子以來 (Evans等，1922)，大量試驗表明，維生素E能調(diào)節(jié)免疫功能，防止氧化損傷，以抗氧化或非抗氧化的方式調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)（Zingg,2007）。在基礎(chǔ)日糧中添加維生素E能提高熱應(yīng)激條件下肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和免疫機能，蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)（Niu,2009;Kirunda,2001）；能提高肉雞抗體滴度（Leshchinsky,2001）；能通過減輕地塞米松誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激而顯著的提高肉仔雞的生產(chǎn)性能，改善肉品質(zhì)（Gao,2010）；母源性高水平維生素E日糧（120～160 mg/kg）能提高孵化幼雛肝組織CAT和腦組織SOD活性，降低血漿中MDA濃度和肝、腦組織中ROS水平，增強幼雛的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激（Lin,2005）。并且，日糧維生素E對家禽的生長和體液免疫的影響存在家系依賴性（Boa-Amponsem,2006）。但是，維生素E對免疫抑制蛋雞的影響尚未見報道。本試驗通過在基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的維生素E，探討維生素E對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫抑制的產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的調(diào)控效果。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與試驗動物

試驗選取健康的產(chǎn)蛋率約90%的393日齡尼克褐產(chǎn)蛋雞270只，隨機等分為5組，每組3重復(fù)，每重復(fù)18只，組間和重復(fù)間體重、產(chǎn)蛋量差異不顯著。試驗為期6周，其中預(yù)試期1周。第Ⅰ組為對照組，第Ⅱ～Ⅴ組為免疫抑制組，在試驗第5、6、7 d對第Ⅱ～Ⅴ組雞連續(xù)進(jìn)行腿部肌肉注射環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX），每只雞注射 80 mg/kgBW，0.5 ml生理鹽水稀釋，對照組注射等量生理鹽水。Ⅰ、Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧（維生素E含量44.59 mg/kg，實測值），Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組在基礎(chǔ)日糧中分別添加 50、100、200 mg/kg維生素 E（dl-α-生育酚醋酸酯）。

1.2 試驗日糧與飼養(yǎng)管理

玉米豆粕型基礎(chǔ)日糧按照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn) (NY/T 33—2004)》產(chǎn)蛋雞營養(yǎng)需要配制（見表1），每次配4 d的喂料量。試驗雞采用3層階梯式籠養(yǎng)，3只/籠，粉料飼喂，日喂 3 次（7：30、11：30、17：30），自由采食和飲水，光照16 h/d。試驗第1 d腿肌注射禽流感H5-H9二價滅活疫苗，第3 d進(jìn)行新城疫疫苗（Lasota系）接種，5倍劑量，飲水，早晨斷水2 h后進(jìn)行。按蛋雞常規(guī)飼養(yǎng)管理，每日分別在7：30和14:30記錄雞舍溫度，并記錄氣候變化。

1.3 指標(biāo)測定

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

基礎(chǔ)日糧中維生素E含量的測定，采用高效液相色譜法（陳桂銀，2008）。

常規(guī)方法測定基礎(chǔ)日糧養(yǎng)分，其中粗蛋白采用凱氏定氮法、粗脂肪采用魯氏殘留法，鈣采用EDTA絡(luò)合滴定法、總磷含量采用釩鉬比色法。

準(zhǔn)確記錄每日每重復(fù)的產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、破蛋數(shù)、死亡雞只，每周耗料量，計算每周產(chǎn)蛋率、破蛋率、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比。

分別在試驗第8、15、29 d每重復(fù)隨機取10枚雞蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)測定，包括蛋重（W）、長徑、短徑、蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋黃顏色、蛋白高度（H），計算蛋形指數(shù)和哈氏單位（HU）。蛋形指數(shù)=長徑：短徑；哈氏單位（HU）=100 Log(H-1.7W0.37+7.6)。

1.4 主要材料和儀器

主要材料：環(huán)磷酰胺（山西普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)），H5-H9二價滅活疫苗（乾元浩生物股份有限公司生產(chǎn)），雞新城疫疫苗（Lasota株）(哈藥集團生物疫苗有限公司生產(chǎn))，維生素E粉劑（dl-α-生育酚醋酸酯）（浙江新維普添加劑有限公司生產(chǎn)），dl-α-生育酚純品油劑（Sigma公司生產(chǎn)）等。

主要儀器：高效液相色譜儀（LC-2010AHT，日本島津），半自動凱氏定氮儀（K-341，BUCHI），超聲波厚度計（ETG-1601A，日本 Robotmation），蛋殼強度測定儀（Model-Ⅲ，日本Robotmation），多功能蛋品分析儀（EMT-5200，日本 Robotmation）等。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)以重復(fù)為單位，采用SPSS17.0進(jìn)行處理，采用One-Way ANOVA分析，兩兩比較采用LSD法，以P＜0.05為顯著水平。結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（X±SEM）形式表示。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 生產(chǎn)性能（見表2）

由表2可知，與對照組Ⅰ相比，免疫抑制組Ⅱ產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均蛋重和平均日采食量顯著降低（P＜0.05），破蛋率顯著升高（P＜0.05），料蛋比差異不顯著（P＞0.05）。在免疫抑制蛋雞的基礎(chǔ)日糧中補加維生素E顯著提高產(chǎn)蛋率、平均蛋重和平均日采食量（P＜0.05），但仍低于對照組Ⅰ（P＜0.05），顯著降低破蛋率和料蛋比（P＜0.05），Ⅲ～Ⅴ組破蛋率與對照組Ⅰ無顯著差異（P＞0.05），Ⅲ、Ⅳ組的料蛋比顯著低于對照組Ⅰ（P＜0.05）。不同水平維生素E對免疫抑制產(chǎn)蛋雞平均蛋重和破蛋率的劑量效應(yīng)不顯著（P＞0.05），但200 mg/kg組產(chǎn)蛋率和平均日采食量低于100 mg/kg組（P＜0.05），料蛋比高于 50、100 mg/kg組（P＜0.05）。

表2 不同維生素E日糧水平對免疫抑制產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 蛋品質(zhì)（見表3）

表3 不同維生素E日糧水平對免疫抑制產(chǎn)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，免疫抑制Ⅱ組產(chǎn)蛋雞的平均蛋重、蛋殼厚度、蛋殼強度和哈氏單位顯著的低于對照組Ⅰ（P＜0.05），蛋形指數(shù)和蛋黃顏色有劣化的趨勢（P＞0.05）。在免疫抑制產(chǎn)蛋雞的基礎(chǔ)日糧中添加50 mg/kg維生素E顯著的提高平均蛋重、蛋殼厚度、蛋殼強度和哈氏單位（P＜0.05），與對照組Ⅰ差異不顯著（P＞0.05）。在免疫抑制Ⅲ～Ⅴ組中，基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的維生素E對平均蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼強度、蛋黃顏色和哈氏單位的劑量效應(yīng)不顯著（P＞0.05），但是蛋殼厚度隨著維生素E添加量的增加而降低（P＜0.05）。

3 討論

3.1 不同維生素E日糧水平對免疫抑制產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

免疫抑制往往導(dǎo)致家禽采食量、體增重和免疫功能下降（He,2007;El-Abasy,2004;Sharma,2000），但對蛋雞的影響鮮見報道。本試驗探討免疫抑制對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響，采用注射環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫抑制模型（He,2007;El-Abasy,2004;Hou,2007），評估不同日糧水平維生素E對免疫抑制蛋雞的調(diào)控效應(yīng)。廣譜抗腫瘤藥環(huán)磷酰胺常作為免疫抑制劑被廣泛采用，本研究綜合前人試驗（Arnon,2004;Motoyoshi,2006;Namasivayam,2006;He,2007），采用80 mg/kgBW劑量連續(xù)3 d腿肌注射的方法誘導(dǎo)模擬產(chǎn)蛋雞的免疫抑制。本研究中，環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)建立免疫抑制的產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均蛋重和平均日采食量顯著降低，破蛋率顯著升高，生產(chǎn)性能下降，這與He（2007）和El-Abasy（2004）等的報道相一致。

自Evans等（1922）發(fā)現(xiàn)，維生素E是人和動物必需的一種脂溶性維生素以來，大量的試驗結(jié)果表明，維生素E可增強畜禽的抗氧化功能，改善機體免疫性能，進(jìn)而提高生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)量和繁殖性能（Lo Fiego,2004;Hatfield,2002;Gore,1997）。研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加維生素E能提高熱應(yīng)激條件下蛋雞的生產(chǎn)性能（Kirunda，2001），能提高熱應(yīng)激條件下肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率（Niu，2009），能通過減少地塞米松誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激而顯著的提高肉仔雞的生產(chǎn)性能，改善肉品質(zhì)（Gao，2010）。但是維生素E對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的蛋雞免疫抑制的調(diào)控效應(yīng)未見報道。本研究中，基礎(chǔ)日糧添加維生素E后顯著提高免疫抑制蛋雞產(chǎn)蛋率、平均蛋重和平均日采食量，顯著降低料蛋比和破蛋率，但是平均蛋重和破蛋率各維生素E劑量間無顯著差異，200 mg/kg組的產(chǎn)蛋率和平均日采食量低于100 mg/kg組，料蛋比卻高于50、100 mg/kg組，這與Lin(2004)的研究結(jié)果相符。Lin(2004)在產(chǎn)蛋期的臺灣土雞的基礎(chǔ)日糧中添加80 mg/kg維生素E時可獲得最佳的產(chǎn)蛋量、蛋重、飼料轉(zhuǎn)化率、受精率和孵化率，優(yōu)于40 mg/kg組和對照組，并且當(dāng)添加量為120、160 mg/kg時維生素E的有效性降低。Leshchinsky(2001)在肉仔雞基礎(chǔ)日糧（維生素E含量10.2 IU/kg）中添加中等水平的維生素E（25～50 IU/kg）時具有最大的免疫調(diào)控功能，并且優(yōu)于高水平添加量（100和200 IU/kg）。Chen(1998)認(rèn)為產(chǎn)蛋雞日糧中低水平的維生素E具有抗氧化活性，但是高濃度(120 mg/kg)時具有氧化強化劑活性。體內(nèi)低濃度的維生素E具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的抗氧化功能的作用，但是太高濃度時會干擾正常的細(xì)胞反應(yīng)（Zing,2007）。因此，我們推測高水平維生素E時免疫抑制產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能無進(jìn)一步改善效應(yīng)，甚至發(fā)生下降，可能是機體免疫機能和抗氧化性能下降的作用結(jié)果。

3.2 不同維生素E日糧水平對免疫抑制產(chǎn)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)是衡量蛋雞經(jīng)濟性狀和蛋品消費的重要指標(biāo)，是影響商品蛋生產(chǎn)效益的重要因素。本研究中，環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)產(chǎn)蛋雞免疫抑制后，平均蛋重、蛋殼厚度、蛋殼強度和哈氏單位顯著降低（P＜0.05），蛋形指數(shù)和蛋黃顏色出現(xiàn)劣化趨勢（P＞0.05），說明免疫抑制產(chǎn)蛋雞蛋品質(zhì)量下降，這可能與免疫抑制產(chǎn)蛋雞抗氧化性能和免疫功能下降有關(guān)（Zhang,2006;He,2007），也可能與免疫抑制產(chǎn)蛋雞生殖系統(tǒng)的損害有關(guān)（Namasivayam,2006;Guittin,1996）。

維生素E能通過興奮垂體前葉促性腺分泌細(xì)胞，促進(jìn)促性腺激素分泌，提高卵巢機能，增加卵泡黃體細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)家禽的繁殖能力，改善蛋品質(zhì)（Henning,1986;Lin,2004;Lin,2005;Boa-Amponsem,2006)。本研究結(jié)果顯示，在基礎(chǔ)日糧中添加50 mg/kg維生素E蛋品質(zhì)顯著改善，但是不隨著添加量的增加而提高，并且蛋殼強度隨著維生素E添加量的增高而降低。吳迪（2009）報道，在基礎(chǔ)日糧中添加天然維生素E能夠提高蛋殼強度和厚度，但是劑量間無差異。Kirunda(2001)給熱應(yīng)激產(chǎn)蛋母雞飼喂維生素E含量分別為20、60和120 mg/kg的日糧，其中60 mg/kg組顯著的改進(jìn)采食量、產(chǎn)蛋量、蛋黃膜強度、蛋黃和蛋白干物質(zhì)含量以及發(fā)泡性能，顯著的減輕熱應(yīng)激下蛋品質(zhì)的惡化，但120 mg/kg組與60 mg/mg相比無進(jìn)一步改善作用。Lin（2004）在基礎(chǔ)日糧中添加 0、40、80、120 mg/kg的維生素E時，蛋黃中維生素E濃度隨著基礎(chǔ)日糧中維生素E添加量的提高而線性增加，但是當(dāng)添加量為160 mg/kg時，蛋黃中濃度反而降低。這種高水平維生素E無進(jìn)一步改善，甚至惡化蛋品質(zhì)的作用可能是體內(nèi)高濃度維生素E降低了機體及其產(chǎn)品抗氧化性能的結(jié)果（Lin,2005;Chen,1998），但是其可能的氧化強化劑作用的機制有待進(jìn)一步研究證實。

4 結(jié)論

①80 mg/kgBW環(huán)磷酰胺連續(xù)3 d腿肌注射蛋雞誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫抑制后，處于免疫抑制狀態(tài)下的產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)顯著降低。

②在基礎(chǔ)日糧中添加維生素E能顯著的提高免疫抑制產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能，改善蛋品質(zhì)，且在50 mg/kg添加量時效果較好。

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