宮頸鱗癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中PINCH、nm23-H1蛋白的表達(dá)及臨床意義

孟亞麗 張霞 王立芹 李學(xué)慧 朱振龍 張紅真

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，病因尚未完全明了，可能與多種致病因素作用有關(guān)，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是與宮頸癌密切相關(guān)的一組癌前病變［1］。PINCH蛋白是LIM(Lin-11、IsI-1和Mec-3蛋白)家族的成員之一，后來(lái)被證明該蛋白在多種腫瘤相關(guān)間質(zhì)中表達(dá)顯著［2，3］，與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移與侵襲有關(guān)。nm23-H1是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。本文對(duì)宮頸鱗癌及CIN組織中PINCH和nm23-H1的表達(dá)情況進(jìn)行研究，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院2008至2010年各項(xiàng)臨床資料完整的宮頸鱗癌及CIN蠟塊90例(試驗(yàn)組)，其中CIN 30例(CIN組)，(CINⅠ10例、CINⅡ8例、CINⅢ12例)，宮頸鱗癌60例。宮頸鱗癌患者病理組織分級(jí)，G1級(jí)20例，G2級(jí)17例，G3級(jí)23例;根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000年)臨床分期，Ⅰ期26例，Ⅱ期23例;Ⅲ期11例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。取因子宮肌瘤而行子宮全切術(shù)，術(shù)后經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常宮頸上皮者20例(對(duì)照組)。

1.2 試劑與方法 石蠟包埋組織做5μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色和免疫組化SP法染色。所用兔抗人PINCH蛋白多克隆抗體由Prof.AnnRearden(Department of Pathology，University of California，U.S.A.)惠贈(zèng)，二抗、三抗購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，用已知陽(yáng)性的乳腺癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。鼠抗人nm23-H1抗體及SP試劑盒(即用型)購(gòu)自北京中杉金橋公司，以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。嚴(yán)格按SP試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，DAB顯色。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) PINCH以組織間質(zhì)中纖維母細(xì)胞及肌纖維母細(xì)胞的胞膜及胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞;nm23-H1蛋白陽(yáng)性染色為腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色細(xì)顆粒。每例隨機(jī)選出10個(gè)不重復(fù)、不重疊的高倍鏡視野(10×40)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及所有細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率=∑陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/∑細(xì)胞數(shù)×100%。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞率進(jìn)行分級(jí)，PINCH和nm23-H1陽(yáng)性細(xì)胞率≤10%為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞率＞10%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)、校正χ2檢驗(yàn)及線性趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同宮頸組織中PINCH和nm23-H1的表達(dá) 正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中，PINCH蛋白的表達(dá)呈逐漸增高的趨勢(shì)，nm23-H1蛋白的表達(dá)呈逐漸降低的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 不同宮頸組織中PINCH和nm23-H1的表達(dá) 例(%)

2.2 PINCH和nm23-H1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 PINCH蛋白和nm23-H1蛋白的表達(dá)均與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及FIGO分期有關(guān)(P＜0.01)，與患者年齡、腫瘤的組織病理分級(jí)及腫瘤大小無(wú)關(guān)(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 PINCH和nm23-H1表達(dá)的相關(guān)性 在CIN組中，PINCH和 nm23-H1的表達(dá)有關(guān)聯(lián)(C=0.697，P＜0.01)。在宮頸癌組中，PINCH和 nm23-H1的表達(dá)有關(guān)聯(lián)(C=0.531，P＜0.01)。見(jiàn)表 3、4。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多基因參與的過(guò)程，既往對(duì)腫瘤的研究多集中于腫瘤細(xì)胞本身的變化，對(duì)腫瘤的間質(zhì)研究較少，PINCH主要表達(dá)在多種腫瘤相關(guān)間質(zhì)中。PINCH蛋白最早是在20世紀(jì)90年代由Rearden從人衰老紅細(xì)胞膜中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)［4］，是LIM(Lin-11、IsI-1和 Mec-3蛋白)家族的成員之一，含有5個(gè)LIM結(jié)構(gòu)域(雙鋅指結(jié)構(gòu))，通過(guò)它特殊的結(jié)構(gòu)域參與連接整合素和生長(zhǎng)因子的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，在整合素和生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)通路中PINCH蛋白處于一個(gè)關(guān)鍵的“十字”交匯點(diǎn)處，相當(dāng)于一個(gè)“三通管”的作用，所以在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能起著十分重要的作用［3］。本研究發(fā)現(xiàn)，正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中，PINCH在組織間質(zhì)中表達(dá)呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，表明PINCH蛋白主要存在于正在增殖或具有增殖能力的細(xì)胞中，與宮頸癌的惡性程度密切相關(guān)，可能是宮頸癌的早期事件，與Zhang等［5］研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，PINCH陽(yáng)性表達(dá)與宮頸鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和FIGO分期有關(guān)，提示PINCH表達(dá)強(qiáng)的宮頸組織有較強(qiáng)的侵襲能力，預(yù)示預(yù)后不良。

表2 宮頸鱗癌組織PINCH和nm23-H1表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

表3 CIN組中PINCH和nm23-H1表達(dá)的關(guān)系 例

表4 宮頸鱗癌組中PINCH和nm23-H1表達(dá)的關(guān)系 例

nm23-H1是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。nm23-H1編碼核苷二磷酸激酶NDPK，其基因的蛋白產(chǎn)物酶參與體內(nèi)三磷酸核苷的生成，在細(xì)胞分化中參與微管的集合以及 G蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳遞過(guò)程，使肌球蛋白輕鏈磷酸化而抑制細(xì)胞遷移，誘導(dǎo)凋亡，抑制分化，影響細(xì)胞的活動(dòng)、粘連和附著，從而抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［6］。nm23-H1等位基因的突變、缺失、低表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的潛能密切相關(guān)［7］。目前普遍認(rèn)為nm23-H1與腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［8］。本研究結(jié)果顯示，正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中，nm23-H1表達(dá)呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說(shuō)明nm23-H1與宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)臨床分期越晚，nm23-H1表達(dá)越低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。提示nm23-H1蛋白的表達(dá)缺失可能在宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展為宮頸癌及宮頸癌繼續(xù)進(jìn)展轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，表達(dá)降低預(yù)示預(yù)后不良。

本研究結(jié)果顯示，在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌組織中，PINCH和nm23-H1的表達(dá)相關(guān)(P＜0.05)。提示在宮頸癌發(fā)生和進(jìn)展、侵襲轉(zhuǎn)移的生物學(xué)行為中，PINCH和nm23-H1可能起到協(xié)同作用，若明確其作用，從而阻斷宮頸上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌發(fā)展，為宮頸癌的早期治療和及早阻止宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供新途徑。

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