反相高效液相色譜法測(cè)定磷酸川芎嗪片的含量

(浙江省麗水市人民醫(yī)院，浙江 麗水 323000)

川芎嗪是從傘形科植物川芎中提取的一種生物堿單體，具有抑制自由基產(chǎn)生、清除氧自由基、抑制血小板聚集等藥理活性，臨床用于高血壓、胰腺炎等的治療[1]。在2005年版《中華人民共和國(guó)藥典(二部)》中，磷酸川芎嗪片的含量測(cè)定方法為紫外分光光度法[2]，筆者采用反相高效液相色譜法，取得較好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;紫外檢測(cè)器。磷酸川芎嗪對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110817－200305);磷酸川芎嗪片(北京燕京制藥公司，批號(hào)分別為070401，070608，080104);甲醇、乙腈均為色譜純，水為二次重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:XDB－C18分析柱(150.0 mm×4.6 mm，6μm);流動(dòng)相:甲醇－1%醋酸溶液(35∶65);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):295 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下，磷酸川芎嗪的理論板數(shù)為2 600，保留時(shí)間為6.82 min，供試品溶液色譜中川芎嗪峰與其他各峰分離度大于1.5，分離度良好，符合規(guī)定。磷酸川芎嗪對(duì)照品溶液、空白對(duì)照品溶液和供試品溶液的色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取磷酸川芎嗪對(duì)照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.5 g/L的對(duì)照品貯備液;取對(duì)照品貯備液0.4 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取磷酸川芎嗪片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(相當(dāng)于磷酸川芎嗪片50 mg)，置100 mL容量瓶中，用甲醇適量超聲處理30 min使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，取0.4 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方組成量取除磷酸川芎嗪外的其余輔料，按工藝要求制備缺磷酸川芎嗪的空白對(duì)照樣品，并按供試品溶液制備方法制成空白對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液、空白對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液同一位置有相同的峰，空白對(duì)照品溶液在同一位置無(wú)峰出現(xiàn)，表明空白對(duì)照品對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣10 μL測(cè)定峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、對(duì)照品質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=0.046 C+0.051 4，r=0.999 8(n=6)。結(jié)果表明，磷酸川芎嗪質(zhì)量濃度在5～40 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)樣，重復(fù)5次。結(jié)果峰面積值的 RSD為1.12%(n=5)，表明方法精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):精密稱取同一批(批號(hào)為070401)樣品5份，按樣品測(cè)定方法操作。結(jié)果的 RSD為0.98%(n=5)，表明方法重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為070401)樣品按供試品溶液制備方法制備溶液，分別于0，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果的RSD為1.04%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取同一批(批號(hào)為070401)樣品(含磷酸川芎嗪約45 mg)6份，置100 mL容量瓶中，稀釋成20 μg/mL，取10 mL，分別加入 20 μg/mL 的磷酸川芎嗪對(duì)照品溶液 2.5，10，20 mL，測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)的磷酸川芎嗪片，按供試品溶液配制方法制備溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算磷酸川芎嗪片標(biāo)示量的百分含量，同時(shí)按2005年版《中國(guó)藥典(二部)》方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 磷酸川芎嗪加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

配制溶液時(shí)，加入適量甲醇并超聲處理30 min，可加速磷酸川芎嗪片溶解完全。在選定的色譜條件下，參照文獻(xiàn)[3－4]，考察了甲醇和1%醋酸溶液的比例，當(dāng)比例為35∶65時(shí)，磷酸川芎嗪片與溶劑雜質(zhì)峰分離好、柱壓低，對(duì)照品溶液與供試品溶液峰形好，理論板數(shù)超過(guò)所要求的1 500。用選定的波長(zhǎng)295 nm測(cè)定，磷酸川芎嗪回收率、精密度和線性關(guān)系都令人滿意，且無(wú)其他干擾峰。

藥典收載的紫外分光光度法操作具有簡(jiǎn)單、省時(shí)、快捷的優(yōu)點(diǎn)，而高效液相色譜法則可有效分離多組分、排除雜質(zhì)或輔料干擾。比較了兩種測(cè)定方法測(cè)定磷酸川芎嗪含量的準(zhǔn)確性，3批樣品的測(cè)定精密度相對(duì)偏差均小于1.1%，表明反相高效液相色譜法同樣可作為磷酸川芎嗪片的含量測(cè)定方法。

[1]張廷偉.鹽酸川芎嗪的藥理作用及其臨床應(yīng)用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25(11):1 179－1 180.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:869.

[3]張 偉，林 凱.HPLC測(cè)定舒胸膠囊中鹽酸川芎嗪的含量[J].中成藥，2006，28(6):920－921.

[4]李 雅，郭建生.高效液相色譜法測(cè)定川麻顆粒中川芎嗪的含量[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，10(1):51－52.