高效液相色譜法測定赤芍合劑中芍藥苷含量

(湖北省恩施土家族苗族自治州藥品檢驗所，湖北 恩施 445000)

赤芍合劑是以赤芍為主藥制成的醫(yī)院制劑，由湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院根據(jù)經(jīng)驗處方研發(fā)而成，具有清熱涼血、散瘀止痛功效，臨床上廣泛用于缺血性腦血管疾病和各種高黏血癥，療效確切。為有效控制藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測定方中主藥赤芍有效成分芍藥苷的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Hitachi L－7100型高效液相色譜儀(日本日立)，包括Hitachi L－7420型紫外檢測器，7725i型定量進樣閥，T2000色譜數(shù)據(jù)處理軟件。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110736－200630);赤芍合劑(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，批號分別為070801，071001，080401);乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸水溶液－ 異丙醇(17 ∶83 ∶0.5);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:230 nm。在此色譜條件下，芍藥苷和其他組分可達(dá)基線分離，Rf＞1.5。

2.2 溶液制備

精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)20 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得對照品溶液。取不含赤芍的赤芍合劑模擬復(fù)方，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果陰性對照品溶液在與對照品溶液相應(yīng)保留時間內(nèi)幾無色譜吸收峰，證明其他原料和輔料對芍藥苷的測定無干擾(圖1)。

線性關(guān)系考察:精密稱取60℃下干燥至恒重的芍藥苷對照品24.5 mg，置 25 mL 棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 1，2，3，5，7 mL，置5個10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μL，注入色譜儀，測定峰面積。以芍藥苷的峰面積(Y)和對照品質(zhì)量濃度(X)作圖，得回歸方程 Y=24 957.5+7 993 736 X，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，芍藥苷質(zhì)量濃度在 0.098 ～0.686 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:在芍藥苷質(zhì)量濃度線性范圍內(nèi)，取高、中、低3種質(zhì)量濃度的芍藥苷對照品溶液，于同一天內(nèi)連續(xù)進樣6次，每次10 μL。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD 為 0.90% ～1.30%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗:取同一份供試品溶液，室溫(20～25℃)下放置，分別于 0，2，4，6，8，10，12，16，20，24 h 時進樣 10 μL 測定。結(jié)果含量的 RSD為1.10%(n=10)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批(批號為070801)樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份溶液，分別精密吸取10 μL，重復(fù)測定6次。結(jié)果芍藥苷的含量分別為 9.63，9.44，9.64，9.20，9.25，9.46 g/L，平均 9.44 g/L，RSD=2.0%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的赤芍合劑樣品6份，每份1 mL，分別按高、中、低3個量級加入定量的芍藥苷對照品，各份均按樣品測定項下方法制成待測溶液，依法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，按供試品溶液制備項下方法制備溶液，并按上述色譜條件測定和計算含量。結(jié)果批號為070801，071001，080401的3 批赤芍合劑中，芍藥苷含量分別為 9.1，9.4，9.2 g/L(n=3)。

3 討論

赤芍合劑是醫(yī)院制劑，臨床試驗證明該制劑安全、有效。方中平肝藥赤芍為君藥，為了保證藥品質(zhì)量，筆者以赤芍中芍藥苷為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定制劑中芍藥苷含量。取芍藥苷對照品溶液(100 μg/mL)，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在280 nm和320 nm波長處有最大吸收，280 nm波長處雜質(zhì)峰較多，峰形較差，故選擇320 nm為測定波長;比較了加熱回流和超聲提取兩種方法，效果均好，但超聲提取簡便快速，故采用超聲提取法;比較了乙醇、甲醇兩種提取溶劑，甲醇較好;比較了提取時間(15，20，30 min)，結(jié)果超聲提取20 min即可提取完全;分別試驗了乙腈－0.1%磷酸水溶液－ 異丙醇(17 ∶83 ∶0.5)[1]、乙腈－0.1%磷酸水溶液(14∶86)[2]、乙腈－水(60∶40)[3]3種流動相，結(jié)果乙腈－0.1%磷酸水溶液－異丙醇(17∶83∶0.5)可改善芍藥苷峰形，減少峰拖尾，分離效果最佳，保留時間適當(dāng)，理論板數(shù)符合規(guī)定。本試驗結(jié)果表明，高效液相色譜法用于赤芍合劑的質(zhì)量控制，方法簡便、快速、穩(wěn)定、實用，結(jié)果準(zhǔn)確。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:428.

[2]張 耕，張 紅.高效液相色譜法測定腦缺血合劑中芍藥苷的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(9):777.