高效液相色譜法測定金蚧片中馬錢苷含量

(廣東省云浮市藥品檢驗所，廣東 云浮 527300)

金蚧片由人金櫻子、蛤蚧、淫羊藿、韭菜子、山茱萸等5味中藥制成，具有補腎壯陽、固精的功效，用于腎陽虛引起的性欲減退、陽痿、遺精、早泄、夜尿、小便余瀝、白帶過多、腰膝酸軟[1]。由于原標(biāo)準(zhǔn)中無馬錢苷含量測定項，為有效控制制劑質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測定山茱萸中馬錢苷的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC－10ATVP型高效液相色譜儀。馬錢苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111604－200604);樣品1(吉林大峻藥業(yè)股份有限公司，批號為20091201);樣品2(吉林大峻藥業(yè)股份有限公司，批號為20100302);樣品3(山西天星制藥有限公司，批號為091208);乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－ 水(15 ∶85);檢測波長:236 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:40 ℃;進樣量:10 μL。理論板數(shù)按馬錢苷峰計達4 000以上。

2.2 溶液制備

精密稱取馬錢苷對照品適量，置量瓶中，用50%甲醇溶解并制成每1 mL含40 μg的溶液，即得對照品溶液。取樣品20片，除去糖衣，稱定總質(zhì)量，研細(xì)，混勻，精密稱取0.4 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇100 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過;精密量取續(xù)濾液 10 mL，加在中性氧化鋁柱(100～200 目，4 g，內(nèi)徑 1 cm)上，用40%甲醇50 mL洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干，殘渣加50%甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含山茱萸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜圖中，未出現(xiàn)與馬錢苷對照品保留時間相同的色譜峰，表明陰性樣品對測定無干擾(圖 1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取質(zhì)量濃度為40 μg/mL的對照品溶液 1，2，5，8，15，25 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、馬錢苷對照品進樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=75.307 X+0.123 2，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，馬錢苷進樣量在 0.04 ～1.00 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，計算峰面積。結(jié)果的 RSD=0.35%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一批供試品溶液，分別在0，1，2，4，8，18，24 h時測定。結(jié)果峰面積的 RSD為0.7%(n=7)，表明待測溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品6份，依法測定。結(jié)果的 RSD為0.56%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入馬錢苷對照品適量，依法測定其含量，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 馬錢苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算。結(jié)果批號為20091201，20100302，091208 的 3 批樣品中，馬錢苷的含量分別為 1.62，1.75，1.92 mg/片。

3 討論

筆者考察了甲醇、70%乙醇溶液、50%甲醇溶液3種提取溶劑和乙腈－水(15∶85)、乙腈－0.05%磷酸溶液(9∶91)兩種流動相，結(jié)果以50%甲醇溶液為提取溶劑，乙腈－水(15∶85)為流動相的效果較好，色譜分離、線性關(guān)系、重現(xiàn)性及回收率均符合要求，可用于金蚧片中馬錢苷的質(zhì)量控制。

[1]WS3－B－2724－97，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十四冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:20.