高效液相色譜法測(cè)定前列舒丸中馬錢苷含量

(吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 吉林 132001)

前列舒丸由熟地黃、薏苡仁、冬瓜子、山茱萸、山藥、牡丹皮、蒼術(shù)、桃仁、澤瀉、茯苓、桂枝、附子、韭菜子、淫羊藿、甘草15味中藥組方，具有扶正固本、益腎利尿的功效，臨床用于腎虛所致的淋證，癥見尿頻、尿急、排尿滴瀝不盡，以及慢性前列腺炎及前列腺增生癥見上述癥狀者[1]。方中山茱萸為主藥，馬錢苷為其主要有效成分之一，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無山茱萸的含量測(cè)定方法。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定了前列舒丸中馬錢苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀，Class－VP色譜工作站。馬錢苷對(duì)照品(批號(hào)為111640－200503，中國藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用);前列舒丸(威海人生藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)為20080612，20081024，20090415);乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:四氫呋喃－乙腈 －甲醇－0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87);檢測(cè)波長:236 nm;流速:0.8 mL/min;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:10 μL;理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)應(yīng)不低于4 000。

2.2 溶液制備

取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h以上的馬錢苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成0.5 g/L的對(duì)照品貯備液;再精密量取對(duì)照品貯備液適量，加50%甲醇制成20 μg/mL的對(duì)照品溶液。取重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約2 g，精密稱定，加適量硅藻土研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)15 min使溶散，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻?yàn)V過;精密量取續(xù)濾液 10 mL，置中性氧化鋁柱(100～200目，4 g，內(nèi)徑 1 cm，干法裝柱)上，用40%甲醇50 mL洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液[2]。取除山茱萸以外的處方中其余藥材，依法制成丸，再按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)?？梢?，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間(馬錢苷17.691 min)的色譜峰，陰性試驗(yàn)無干擾，證明方法可行。

線性關(guān)系考察:精密吸取馬錢苷對(duì)照品貯備液(質(zhì)量濃度為0.5 g/L)適量，置50 mL量瓶中，加甲醇定容，配成質(zhì)量濃度分別為 5，10，20，40，80 μg/mL 的溶液 5 份，搖勻，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾。精密吸取續(xù)濾液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=－487.96+44 926.66 C，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，馬錢苷質(zhì)量濃度在5～80 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):精密吸取馬錢苷對(duì)照品溶液(20 μg/mL)10 μL，在擬訂的色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.9%(n=5)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，在 0，6，12，18，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.7%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為20090415)5份，按供試品溶液制備方法制備溶液并進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果含量的 RSD為1.2%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為20090415，馬錢苷含量 0.28 mg/g，平均丸重 9.012 5 g)適量，共6份，分別精密加入低、中、高3種不同質(zhì)量濃度的馬錢苷對(duì)照品適量，照供試品溶液制備方法操作，得回收率試驗(yàn)溶液，依法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 馬錢苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定3批樣品中馬錢苷峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20080612，20081024，20090415的樣品中馬錢苷平均含量分別為 2.51，2.50，2.52 mg/丸(n=5)。

3 討論

根據(jù)3批樣品含量測(cè)定結(jié)果，最高含量為2.52 mg/丸，最低含量為2.50 mg/丸。綜合考慮，建議該制劑中山茱萸的含量以馬錢苷計(jì)應(yīng)不低于2.00 mg/丸。

對(duì)供試品、對(duì)照品溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果兩者在236 nm波長處有較強(qiáng)吸收，而陰性無干擾，故選擇檢測(cè)波長為236 nm。

所建立的方法結(jié)果準(zhǔn)確、方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性及回收率均理想，故可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:545，401－402.