高效液相色譜法測定鼻竇炎口服液中梔子苷含量

(湖南省張家界市藥品檢驗所，湖南 張家界 427000)

鼻竇炎口服液由辛夷、薄荷、白芷、黃芩、蒼耳子、梔子、川芎、茯苓、龍膽草等14味藥組方，具有疏散風熱、清熱利濕、宣通鼻竅的功效，主要用于風熱犯肺、濕熱內(nèi)蘊所致的鼻塞不通、流黃稠涕，急慢性鼻炎、鼻竇炎見上述證候者[1]，臨床應用較多，療效較好。2010年版《中國藥典(一部)》中，建立了該藥的黃芩苷含量測定方法。為更好地控制藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對鼻竇炎口服液中梔子所含梔子苷進行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－20AT型高效液相色譜儀(日本島津)，包括島津PDAM20A型二極管陣列檢測器，SIL－20A型自動進樣器，CBM－20A型系統(tǒng)控制器，CTO－10ASVP型柱溫箱，LCsolution色譜工作站;AUW220D型電子分析天平(島津);KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器公司)。梔子苷對照品(批號為110749－200714，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);鼻竇炎口服液(太極集團重慶桐君閣藥廠有限公司，批號為 10010002，09100089，09030024，本地市售品);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:島津 Shimpack VP－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.2% 磷酸(12 ∶88);檢測波長:238 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;進樣量:10 μL。理論板數(shù)按梔子苷計應不低于5 000。

2.2 溶液制備

精密吸取樣品1 mL，置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取在五氧化二磷干燥器中減壓干燥24 h后的梔子苷對照品11.78 mg，置 100 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.117 8 mg的溶液，作為對照品溶液。另按處方組成[2]制成缺梔子的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，依法測定。結果陰性對照品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜梔子苷峰相應保留時間附近無干擾峰檢出，見圖1。

線性關系考察:精密吸取梔子苷對照品溶液(0.117 8 g/L)2，4，6，8，10，15 μL 進樣，按上述色譜條件測定。以梔子苷進樣量(μg)為橫坐標(X)、測得的峰面積為縱坐標(Y)繪制標準曲線，回歸方程為Y=1 546 989.9 X+7 479.7，r=0.999 9(n=6)。結果表明梔子苷進樣量在0.235～1.767μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，按上述色譜條件，重復進樣6次，測定峰面積。結果的 RSD為0.58%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，分別在 0，2，4，8，12，24 h 時進樣，測定峰面積。結果的 RSD 為1.06%(n=6)，表明供試品溶液至少在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品(批號為10010002)6份，分別精密吸取1 mL，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結果平均含量為 12.61 mg/支(10 mL)，RSD=0.76%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品 (質(zhì)量濃度為1.261 g/L)6 份，分別精密加入對照品溶液(0.117 8 g/L)10.0，20.0，30.0 mL，照供試品溶液制備方法制備待測液，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3個不同批號的樣品，依法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 uL，注入高效液相色譜儀，測定梔子苷的峰面積，以外標法計算含量。結果批號為10010002，09100089，09030024 的樣品中梔子苷含量分別為 12.61，10.33，8.82 mg/支(10 mL)。

3 討論

關于以高效液相色譜法測定中藥復方制劑中梔子苷的含量，文獻報道的方法較多[3]。為使樣品中梔子苷峰與相鄰色譜峰分離完全，選用乙腈－水系統(tǒng)為流動相，并加入少量的磷酸作為穩(wěn)定劑。經(jīng)多次試驗，選擇乙腈－0.2%磷酸溶液(12∶88)為流動相時，峰形好，保留時間適中，能使樣品中梔子苷峰與相鄰色譜峰達到基線分離，且陰性對照無干擾。利用二極管陣列檢測器，對梔子苷峰及供試品溶液色譜中與梔子苷相同保留時間峰分別進行掃描，結果均在238 nm波長處有最大吸收，且經(jīng)峰純度檢測為單一純色譜峰，故確定檢測波長為238 nm。

中藥復方制劑質(zhì)量標準中收載兩種以上主成分的含量測定方法，對于提高和控制中成藥的質(zhì)量具有極積的作用。筆者在鼻竇炎口服液質(zhì)量標準已有黃芩苷含量測定方法的基礎上，建立了梔子苷含量測定方法，結果準確、操作簡單、重復性、穩(wěn)定性較好，可用于該產(chǎn)品質(zhì)量標準的提高。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1 212.

[2]WS3－B－2637－97，衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十三冊)[S].

[3]余瀟苓，方翠芬，祝 明.高效液相色譜法測定珍寶丸中梔子苷含量 [J].中國藥業(yè)，2009，18(5):18.