植物油提取新工藝得到的五味子提取物對小鼠睡眠影響的實驗研究

徐仲航,金向群

（1.東北師范大學(xué)附屬中學(xué),吉林 長春130021;2.吉林大學(xué)藥學(xué)院,吉林 長春 130021）

研究表明,五味子中鎮(zhèn)靜、催眠作用主要活性成分為木脂素類化合物[1]。本研究前期采用植物油提取新工藝方法得到了木脂素含量和提取率均較高的五味子提取物,該方法具有提取工藝簡便、無污染、條件溫和等優(yōu)點。為進(jìn)一步驗證采用新工藝得到的五味子提取物是否具有改善睡眠活性,采用小鼠直接睡眠實驗、延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗[2]對其改善睡眠作用進(jìn)行評價。

1 材料與方法

1.1 主要材料

昆明種小白鼠,雄性,體重18-21 g,吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供,生產(chǎn)許可證號:SCXK-（吉）2007-0003;

五味子提取物,淡黃色油狀液滴（本實驗前期制備）。每克提取物中含五味子生藥量0.4 g,含五味子甲素0.3mg,含五味子乙素0.4mg。

1.2 動物分組及給藥方法

小鼠隨機分為對照組及五味子提取物低、中、高劑量組,每組12只。對照組給予橄欖油20m l/kg/d灌胃,五味子提取物低、中、高劑量組分別給予五味子提取物150、300、600mg/kg/d,連續(xù)灌胃15 d。

1.3 實驗方法及觀察指標(biāo)

1.3.1 五味子提取物對直接睡眠的影響 動物末次給予橄欖油及不同劑量五味子提取物1 h后,觀察各組小鼠是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象,記錄入睡動物數(shù)及睡眠時間。

1.3.2 五味子提取物對閾劑量戊巴比妥鈉睡眠時間的影響 實驗前確定使動物100%入睡,又不使睡眠時間過長的戊巴比妥鈉劑量（45mg/kg）。動物末次給予橄欖油及不同劑量五味子提取物1 h后,給各組動物腹腔注射戊巴比妥鈉10 ml/kg,以翻正反射消失為指標(biāo),觀察五味子提取物能否延長閾劑量戊巴比妥鈉的睡眠時間。

1.3.3 五味子提取物對閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠發(fā)生率的影響 實驗前確定戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量（26mg/kg）,即85%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。動物末次給予橄欖油及不同劑量五味子提取物1 h后,各組動物腹腔注射戊巴比妥鈉10m l/kg,記錄30min內(nèi)入睡動物數(shù)（翻正反射達(dá)1min以上者）,計算入睡動物發(fā)生率。

1.3.4 五味子提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響 實驗前確定動物100%入睡,但又不使睡眠時間過長的巴比妥鈉劑量（260 mg/kg）。動物末次給予橄欖油及不同劑量五味子提取物1 h后,給各組動物腹腔注射巴比妥鈉10 ml/kg,以翻正反射消失為指標(biāo),觀察五味子提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中單因素方差分析進(jìn)行均值比較,方差齊時,各組間兩兩比較采用Tamhane's法,小鼠入睡發(fā)生率應(yīng)用卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 五味子提取物對小鼠直接睡眠的影響 小鼠連續(xù)灌15 d后,對入睡動物數(shù)、睡眠時間進(jìn)行方差分析。結(jié)果表明,五味子提取物150、300、600mg/kg組與對照組比較,入睡動物數(shù)及睡眠時間均無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 五味子提取物對閾劑量戊巴比妥鈉睡眠時間的影響 小鼠連續(xù)灌胃15 d后,各組動物腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉,對睡眠時間進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果表明,睡眠時間組間有差異,F值為5.998（P＜0.05）,與對照組相比,五味子提取物300、600 mg/kg組小鼠睡眠時間明顯延長（P＜0.05）,150 mg/kg組小鼠睡眠時間與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）,見表1。

表1 五味子提取物對閾劑量戊巴比妥鈉睡眠時間的影響（n=12）

2.3 五味子提取物對閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠發(fā)生率的影響 小鼠連續(xù)灌胃15 d后,各組動物腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量,對入睡動物發(fā)生率進(jìn)行卡方檢驗,結(jié)果表明,睡眠發(fā)生率有組間差異,χ2值為5.971（P ＜0.05）,與對照組相比,五味子提取物600 mg/kg組睡眠發(fā)生率明顯提高（P＜0.05）,150、300 mg/kg組小鼠的睡眠發(fā)生率與對照組比較均無顯著差異（P＞0.05）,見表2。

表2 五味子提取物對閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠發(fā)生率的影響（n=12）

2.4 五味子提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

小鼠連續(xù)灌胃15 d后,各組動物腹腔注射巴比妥鈉,對睡眠潛伏期進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果表明睡眠潛伏期有組間差異,F值為3.410（P＜0.05）,與對照組相比,五味子提取物600mg/kg組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短（P＜0.05）,150、300 mg/kg組小鼠睡眠潛伏期與對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）,見表3。

表3 五味子提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（n=12）

3 討論

睡眠是人類的基本行為,也是生命過程中的一種重要生理現(xiàn)象,對人類的生活和健康有著重要的影響,作為生命所必須的過程,是機體復(fù)原、整合和鞏固記憶的重要環(huán)節(jié),是健康不可缺少的組成部分,良好的睡眠可以使人消除疲勞,更好地恢復(fù)精神和體力,保持良好的覺醒狀態(tài),可以提高工作和學(xué)習(xí)效率,因此,睡眠質(zhì)量問題受到越來越多的關(guān)注。

睡眠障礙是嚴(yán)重危害人類健康的常見疾病之一,在世界上仍是一個沒有得到充分重視和良好解決的公共衛(wèi)生問題。隨著現(xiàn)代社會人類生活節(jié)奏的加快,學(xué)習(xí)和工作壓力的提高,無論是成人還是青少年,很多人被睡眠障礙所困擾,長時間的睡眠障礙會帶來較大的身心損害,能夠安全、有效保證高質(zhì)量睡眠對各年齡人群高效率工作、學(xué)習(xí)具有重要意義。目前臨床上使用的具有鎮(zhèn)靜催眠作用的化學(xué)合成類藥物在延長睡眠時間的同時,都會出現(xiàn)不同程度的副作用如頭暈、乏力、困倦、注意力不集中,甚至?xí)簳r性健忘和宿醉現(xiàn)象,并可產(chǎn)生依賴性,在應(yīng)用方面受到一定的限制,因此,需要安全、有效、無依賴性的藥物及功能食品,而天然植物或藥物在此方面可能具有較大優(yōu)勢,開發(fā)藥效顯著、副作用小、安全且具有改善睡眠作用的產(chǎn)品尤為重要。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為五味子具有補腎益氣、鎮(zhèn)靜安神之功效,其用于神經(jīng)衰弱、心悸失眠等癥,并取得了良好的治療效果[3]。

中藥五味子的主要活性成分為木脂素類化合物。目前,國內(nèi)外對五味子木脂素的提取工藝及藥理學(xué)作用已有相關(guān)研究。一方面目前使用的水、有機溶媒、超臨界提取等方法,由于提取工藝方面均存在一定的弊端,限制了五味子資源的開發(fā)與利用,另一方面由于目前較復(fù)雜的提取工藝,在對提取物藥理學(xué)研究中,顯現(xiàn)出復(fù)雜的量效關(guān)系,難以為進(jìn)一步可批量生產(chǎn)藥品或保健食品提供劑量參考[4-7]。

本研究在植物油新工藝提取五味子木脂素基礎(chǔ)上,采用小鼠直接睡眠實驗、延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗對其改善睡眠作用進(jìn)行評價。結(jié)果顯示,五味子提取物劑量達(dá)到600mg/kg/d時,可明顯延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時間,明顯提高戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率,明顯縮短巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期,同時在實驗中觀察到對直接睡眠小鼠的入睡動物數(shù)、睡眠時間均無明顯影響。研究結(jié)果表明植物油新工藝方法得到的五味子提取物有明顯改善小鼠睡眠的作用,為后期產(chǎn)品開發(fā)提供了較為科學(xué)的理論依據(jù)和劑量參考。中藥五味子具有鎮(zhèn)靜、催眠、益智、抗衰老、提高人體免疫力等多種藥理作用,本研究進(jìn)一步驗證了其改善睡眠的作用。本研究發(fā)現(xiàn)的簡便、高效提取五味子木脂素的新方法及改善睡眠作用藥效學(xué)研究結(jié)果對五味子資源的開發(fā)具有廣泛的應(yīng)用前景,并可能獲得一定的經(jīng)濟效益和社會效益,尚需對其進(jìn)行進(jìn)一步的毒理學(xué)及改善睡眠作用機制研究,為五味子的開發(fā)利用提供深層次的科學(xué)依據(jù)。

致謝:感謝吉林大學(xué)藥學(xué)院提供的良好實驗條件,感謝于曉風(fēng)、曲紹春二位老師在藥理學(xué)實驗方法方面給予的悉心指導(dǎo)。

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