肝纖維化大鼠血清MMP-2和PDGF-BB含量的變化

項 榮,白馬肅,史嵩海,張紅燕

（1.西藏民族學院附屬醫(yī)院 內一科,陜西 咸陽 712082;2.陜西中醫(yī)學院,陜西 咸陽 712083）

肝纖維化為諸多慢性肝病發(fā)展至肝硬化過程中所共有的病理組織學變化,肝纖維化的發(fā)生是由于ECM合成增多,降解減少而在肝內過度沉積所致[1]。活化的肝星狀細胞（hepatic stellate cell,HSC）是ECM的主要來源[2],HSC的激活是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)。

1 對象與方法

1.1 本實驗研究采用四氯化碳（CC14） 肝纖維化大鼠模型為研究對象,探討肝纖維化大鼠血MMP-2和PDGF-BB表達的影響,從分子水平探討其機理。CC14是誘導實驗動物產生肝纖維化和肝硬化最廣泛使用的化學性肝毒物[3]。

1.2 實驗動物及試劑 ①實驗動物:清潔級大鼠22只,雄性,體重200 g±20 g,由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心購進。動物合格證號:醫(yī)動字第007-009號。②MMP-2和PDGF-BB抗體及免疫組化試劑盒:美國ADL公司生產。③100%CCL4分析純,西安化學試劑廠生產,批號:0501240

1.3 肝纖維化模型制備及分組 將實驗大鼠在實驗室喂養(yǎng)1周后開始實驗,隨機抽取10只作為A組正常對照組,其余大鼠實驗第一天每只動物皮下注射40%四氯化碳植物油溶液（100%CCL4用植物油稀釋為40%）0.5m l/100 g,以后每隔3天皮下注射40%四氯化碳植物油溶液0.3ml/100 g,至第8周末從造模動物中隨機處死2只大鼠作肝纖維化病理學檢查,如有2期以上纖維化形成,即確定肝纖維化模型復制成功。

1.4 肝纖維化血清指標檢測 MMP-2和PDGF-BB;檢測方法:酶聯免疫法。

2 結果

見表1。

表1 大鼠血清MMP-2、PDGF-BB檢測結果（±s±s）組別 N MMP-2（ng/ml） PDGF-BB（pg/ml）空白組 10 0.472±0.308* 293.63±2.15*模型組 8 3.910±0.287 458.76±1.72注:與模型組比較,*P＜0.01

3 討論

在肝纖維化的早期,MMP-2活化即增多,降解正常肝臟基質內的Ⅳ型膠原,導致細胞一基質間的聯系破壞,進一步促進HSC的活化和增殖并向肌成纖維細胞（myofibrob last,M F）轉化,而MF已被證實在肝纖維化形成中起主要作用。較多研究認為MMP-2在肝纖維化進展階段升高,而在肝硬化和肝纖維化恢復期則逐漸降低,本實驗通過測定肝組織MMP-2含量,發(fā)現模型組與空白組作比較,MMP-2含量有較顯著的升高（P＜0.O1）;PDGF-BB在肝纖維化中的主要作用是使H SC增殖,促進膠原合成和抑制膠原降解,在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮十分重要的作用,PDGF-BB是目前已知的體外HSC最強的絲裂原[5],PDGF-BB在肝組織的表達與肝纖維化程度、炎癥活動度及病理組織學分度呈正相關。PDGF-BB可促進ECM沉積在肝臟,形成肝纖維化,研究中發(fā)現,模型組與空白組作比較,PDGF-BB含量有較顯著的升高（P＜0.01）。

[1]Vizzutti F,A rena U,R an anelliRC,et al.L iver stiffnessm easu rement predicts severe ortal hypertension in patients withHCV-related cirrhosis[J].Hepatologx,2007,45（5）:1290.

[2]賈繼東,王惠吉.肝纖維化.見漆德芳主編肝硬化[M].第1版.北京:科學技術出版社,2000.85-112.

[3]Okazaki I,Watanabe T,Hozawa S,et al.Reversibility of hepatic fibrosis:from the first report of collagenase in the liver to the possibilityof gene therapy for recovery[J].Keio JMed,2001,50（2）:58.

[4]展玉清,李定國.肝星狀細胞活化的功能改變[J].國外醫(yī)學消化系統(tǒng)疾病分冊,1999,19（1）:27.