不同處理方式對(duì)銀杏葉活性成分的影響

秦俊哲， 高存秀

(陜西科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 西安 710021)

0 引 言

銀杏樹是現(xiàn)存種子植物中最古老的孑遺植物，集食用、藥用、材用為一體，具有較高的綜合利用價(jià)值.銀杏葉中含有170多種生理活性物質(zhì)，具有改善血管循環(huán)、控制周圍血管失調(diào)、拮抗血小板活化因子等作用，銀杏葉系列產(chǎn)品已被廣泛開發(fā)應(yīng)用[1].然而銀杏葉中含有毒副成分—銀杏酸，具有致過敏、致突變等不良反應(yīng)，其安全性已引起高度重視，國際EGB質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定銀杏酸含量必須小于5 μg/g[2,3].

目前國內(nèi)外針對(duì)銀杏酸的脫除均在銀杏葉提取物的基礎(chǔ)上采用化學(xué)提純方法[4]，未見直接采用銀杏葉脫除銀杏酸的報(bào)道.為此本實(shí)驗(yàn)探索了萎凋與干燥方式對(duì)銀杏葉活性成分的影響，以期降低銀杏酸含量，提高銀杏葉產(chǎn)品的食用安全性.

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

材料：新鮮銀杏葉，2010年6月采摘于陜西科技大學(xué)銀杏園林銀杏樹枝干的中下部；大孔吸附樹脂(D101-1,DA201,DM301,DS401)，安徽三星樹脂有限公司.

試劑：對(duì)照品銀杏酸(C15∶0,C17∶1,C13∶0,C15∶1,C17∶2)，蘆?。褐袊幤飞镏破窓z定所.正己烷，乙醇，無水甲醇等均為分析純.

儀器與設(shè)備：索氏提取儀，北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司；高速萬能粉碎機(jī)FW100型，天津市泰斯特儀器有限公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱CS101-2A型，中國重慶銀河試驗(yàn)儀器有限公司；紫外可見分光光度計(jì)SP-752(PC)型，上海光譜儀器有限公司；層析柱(20 mm×400 mm)，江蘇省高郵市亞泰科教儀器廠.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[5]

準(zhǔn)確稱取一定量銀杏酸用甲醇溶解定容至25 mL，分別吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL用無水甲醇定容至5 mL容量瓶，搖勻，在波長(zhǎng)307 nm處測(cè)定吸光度.以銀杏酸濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=8.715C+0.040 7，R2=0.999 4,線性范圍為：0.009～0.093 mg/mL.

準(zhǔn)確稱取一定標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁，用70%的乙醇定容至50 mL容量瓶溶解，移取0、1、2、3、4、5、6、7、8 mL加到10 mL容量瓶?jī)?nèi)，加1 mL 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻放置6 min,加入10%的硝酸鋁溶液1 mL搖勻放置6 min,加入4%的氫氧化鈉溶液4 mL,然后用70%的乙醇溶液稀釋到刻度搖勻,靜置15 min.在510 nm處測(cè)定吸光度，用最小二乘法將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液濃度與所得吸光度值做一元線性回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=11.54C-0.001 2,R2=0.999 7.

1.2.2 不同處理方式對(duì)銀杏葉的預(yù)處理

采摘成熟度相同的新鮮銀杏葉，流水洗凈，稱取等量銀杏葉，鋪成面積同等，在不同條件下萎凋一定時(shí)間，然后放置烘箱一定溫度下熱風(fēng)烘干，粉碎過60目篩制成銀杏粉，密封保存?zhèn)溆?

1.2.3 粗提取液的制備

準(zhǔn)確稱取1.00 g銀杏粉，加入150 mL正己烷，85 ℃下索氏提取3 h，過濾，濃縮，定容，即得銀杏酸粗提取液.

準(zhǔn)確稱取1.00 g銀杏粉，加入80%乙醇，70 ℃下冷凝回流提取，過濾，冷卻定容，得銀杏黃酮提取液.

1.2.4 銀杏酸粗提取液的純化

大孔樹脂DA201經(jīng)預(yù)處理后，濕法裝柱，以1～2 mL/min上柱，然后用90%乙醇以2 mL/min速度洗脫，收集洗脫液，計(jì)算銀杏酸得率.

2 結(jié)果與討論

2.1 光線對(duì)銀杏葉活性成分的影響

由圖1可見，在30 ℃下萎凋5 h后，銀杏葉在陽光直射下銀杏酸含量大幅度下降，銀杏黃酮含量呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì)，可能原因是銀杏酸具有抗脅迫作用，長(zhǎng)時(shí)間高強(qiáng)度的陽光照射可使銀杏酸的結(jié)構(gòu)遭到破壞.

2.2 溫度對(duì)銀杏葉活性成分的影響

由圖2可見，4種萎凋方式中銀杏酸含量變化趨勢(shì)相似，均是先降后升，在30 ℃時(shí)銀杏酸含量達(dá)到最低 .由圖3可以看出，銀杏黃酮隨著溫度的增加，含量漸下降，在25～30 ℃中變化比較小，銀杏黃酮得率比較高，可能原因是此條件下有利于銀杏葉內(nèi)部發(fā)生一系列生物氧化等反應(yīng)，銀杏酸與銀杏黃酮分解或轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì),因此選擇在30 ℃陽光下萎凋.

2.3 干燥溫度對(duì)銀杏葉活性成分的影響

由圖4可見，新鮮銀杏葉在不同溫度下干燥時(shí)，銀杏酸與銀杏黃酮含量先上升后下降，銀杏黃酮在70 ℃時(shí)含量達(dá)到最高，銀杏酸含量很低.可能原因是溫度較低時(shí)，銀杏葉內(nèi)的酶類沒有立刻失活，仍然可進(jìn)行生物氧化反應(yīng)，降低銀杏酸與銀杏黃酮的含量；當(dāng)溫度逐漸升高時(shí)，酶逐漸失活，反應(yīng)停止，銀杏黃酮與銀杏酸含量較高；溫度過高時(shí)，銀杏黃酮對(duì)高溫具有一定抗性，含量變化不大，但是銀杏酸的熱穩(wěn)定性較差，開始急劇下降.因此選擇70 ℃干燥.

2.4 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

銀杏葉在30 ℃陽光下萎凋5 h后，置于烘箱中于70 ℃熱風(fēng)干燥20 h，銀杏酸得率為0.58%，銀杏黃酮得率為1.62%，對(duì)照性實(shí)驗(yàn)新鮮銀杏葉在60 ℃熱風(fēng)干燥，銀杏酸得率為1.85%，銀杏黃酮得率為1.78%，由此可見銀杏黃酮含量下降了9%，銀杏酸含量下降了69%.

3 結(jié) 論

新鮮銀杏葉分別采用黑暗下、紫外燈下、玻璃下、陽光下4種方式并且在不同溫度下萎凋5 h，然后在不同溫度下干燥20 h,結(jié)果表明在30 ℃陽光下萎凋5 h，于70 ℃干燥時(shí)，銀杏黃酮得率為1.62%，銀杏酸得率為0.58%，銀杏酸含量下降了69%，大大提高了銀杏葉產(chǎn)品的使安全性.

參考文獻(xiàn)

[1] 周建鐘,趙琦君.銀杏葉化學(xué)成分提取狀況及其開發(fā)利用[J].食品科學(xué),2009,(3)：35-37.

[2] 何靜仁.銀杏酸的變應(yīng)原性及致過敏機(jī)制研究[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2003.

[3] 袁云增.服用銀杏茶從小劑量開始[N].健康報(bào),2010-04-28.

[4] 劉 新,饒海麗.銀杏葉制劑中毒性物質(zhì)-銀杏酸[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2008,(3)：45，46.

[5] 仰榴青，吳向陽.銀杏酸的分光光度法測(cè)定[J].分析化學(xué),2004，5(32)：661-664.