組織工程中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的控制釋放

崔新愛(ài) 王 玲 孔德領(lǐng) 顧漢卿

1(南開(kāi)大學(xué)藥學(xué)院和天津市分子藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，生物活性材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300071)

2(天津市泌尿外科研究所，天津 300211)

引言

缺血性血管疾病包括冠心病和外周血管閉塞性疾病已成為世界上發(fā)病率和死亡率均占主導(dǎo)地位的疾病之一[1]。組織需要周?chē)拿?xì)血管提供氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，供應(yīng)不足就會(huì)導(dǎo)致缺氧，引起細(xì)胞凋亡。傳統(tǒng)的血運(yùn)重建治療包括冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)(CABG)和經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)，對(duì)多數(shù)患者可以增加冠狀動(dòng)脈灌注，基本實(shí)現(xiàn)治療目的，但對(duì)冠狀動(dòng)脈纖細(xì)和病變彌散的患者這些治療手段則難以奏效。以改善缺血為目的，治療性血管新生通過(guò)導(dǎo)入促血管生長(zhǎng)因子，刺激新血管的形成和成熟，從而增加缺血部位的血液灌注已成為當(dāng)前缺血性血管疾病治療的研究熱點(diǎn)。其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)中研究最多的一種促血管生長(zhǎng)因子。該生長(zhǎng)因子是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多肽類(lèi)因子[2]。盡管在缺血狀態(tài)下，機(jī)體組織細(xì)胞中VEGF的表達(dá)會(huì)迅速增加，但是這種內(nèi)生性VEGF的表達(dá)增加，常常不足以盡快建立側(cè)支循環(huán)或恢復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞的完整性。當(dāng)給予外源性VEGF后，新生血管則會(huì)明顯增加，側(cè)支血流供應(yīng)改善，內(nèi)皮依賴性功能和結(jié)構(gòu)恢復(fù)[3]。

VEGF具有多種生物學(xué)活性，如促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管新生、促進(jìn)多種血管活性物質(zhì)合成、促進(jìn)血管舒張、抑制血栓形成、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、參與卵泡的發(fā)育和成熟等[4-5]，其中促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用具有高度特異性。而且VEGF作為一種局部?jī)?nèi)生性調(diào)節(jié)劑，還起著維持血管的正常形態(tài)和完整性的作用[6]。

然而，與其它生長(zhǎng)因子相似，VEGF由于半衰期短而導(dǎo)致體內(nèi)降解速度過(guò)快，從而限制了它的臨床應(yīng)用。VEGF大劑量全身給藥雖然可以促進(jìn)局部血管生成，但也可以導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，常見(jiàn)的風(fēng)險(xiǎn)是VEGF可能促進(jìn)腫瘤的血管新生，并且可能促進(jìn)隱匿存在的惡性腫瘤的生長(zhǎng)，還可能使增殖性或出血性視網(wǎng)膜病加重，以及反復(fù)性發(fā)作低血壓、非靶向組織血管生成、動(dòng)脈粥樣硬化等，因此需要采取局部緩釋的給藥方式[7]。研究表明，VEGF緩釋給藥效果明顯優(yōu)于直接給藥[8]。因此，越來(lái)越多的研究者利用各種控制釋放載體，使VEGF在體內(nèi)以一個(gè)恒定的速率釋放，以保證其在治療過(guò)程中在局部缺血組織中的含量，從而增加新生血管的形成。下面將逐一介紹幾種VEGF控制釋放體系在組織工程中的最新進(jìn)展。

1 VEGF控釋體系

1.1 VEGF-微球體系

生長(zhǎng)因子緩釋微球是指將生長(zhǎng)因子溶解或分散在高分子材料基質(zhì)中形成的粒徑為1～250 μm的骨架型微小球狀實(shí)體。緩釋微球載體具有制備工藝簡(jiǎn)便、緩釋藥物、靶向輸送，和在保證藥物治療作用的前提下減少給藥劑量，降低藥物毒性等優(yōu)點(diǎn)[9]。

常用于VEGF控釋的微球主要由乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)制備而成，這是因?yàn)镻LGA降解速率適中，而且PLGA含有帶負(fù)電的羧基能與帶正電的VEGF相互作用。最近，F(xiàn)abio等構(gòu)建了直徑約為5 μm 的 PLGA 微球來(lái)負(fù)載 VEGF[10]。該微球可持續(xù)釋放活性 VEGF，每毫克微球載 VEGF為 0.58 μg，包封率約83.8%，可明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的增殖和分化，優(yōu)于單用同等劑量VEGF的效果。分別用載 VEGF微球(2 mg微球)組、單純VEGF注射組(100 ng)和空載微球組來(lái)治療大鼠急性心肌梗死，在梗死邊緣四個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行注射，四周后取材觀察，結(jié)果顯示載VEGF微球治療組不僅促進(jìn)了小口徑血管的明顯生長(zhǎng)，對(duì)動(dòng)脈血管的再生也有較大的促進(jìn)作用，血管生成數(shù)幾乎為單純注射VEGF組和空載微球組的一倍。組織中的血管再生促進(jìn)了整個(gè)組織的重塑，載VEGF微球治療組與對(duì)照組相比大鼠左心室壁有明顯的增厚，表明了該微球緩釋系統(tǒng)在VEGF治療缺血性疾病方面有潛在優(yōu)勢(shì)。

Lee等構(gòu)建了PLGA微球和海藻酸鈣水凝膠復(fù)合體系，將包裹人重組血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(rhVEGF)的復(fù)合體系注射到小鼠皮下，觀察新血管的形成[11-12]。3周內(nèi)，rhVEGF從微球中緩慢持續(xù)釋放，并保持活性。復(fù)合體系促內(nèi)皮細(xì)胞增殖效果明顯，且皮下注射后，小鼠心血管肉芽組織形成明顯多于單劑量注射 VEGF。他們對(duì)構(gòu)建的下肢缺血裸鼠，分別注射單純 rhVEGF，載 rhVEGF水凝膠和載VEGF 微球-水凝膠復(fù)合體系(1 μg VEGF/mouse)，4周后復(fù)合體系的療效最明顯，裸鼠的后肢再生基本完整。充分表明該體系在治療缺血性疾病方面的優(yōu)勢(shì)。Cristina等以Ⅰ型膠原為支架負(fù)載包裹VEGF的PLGA微球[13]，發(fā)現(xiàn)該復(fù)合體系可以長(zhǎng)達(dá)10周持續(xù)釋放有活性的VEGF;體內(nèi)雞胚絨毛尿囊膜模型實(shí)驗(yàn)觀察到該體系顯著提高了血管肉芽組織的形成，與直接加入VEGF的膠原支架相比，其新生血管數(shù)提高了2.5倍，且未出現(xiàn)異常性血管增生，表明支架中VEGF的控制釋放對(duì)于治療性血管新生的重要性。

微球載體是目前研究相對(duì)廣泛也比較理想的藥物載體，其制備方法簡(jiǎn)便，且通過(guò)化學(xué)或物理修飾與VEGF結(jié)合，載藥量高，體外釋放也均達(dá)到20 d以上。微球載體在體內(nèi)治療下肢缺血和心肌梗死方面有較好的療效，使用載1 μg劑量的VEGF的載體進(jìn)行治療，一個(gè)月左右缺血部位即有顯著的血管新生和組織再生;但由于其存在體內(nèi)流動(dòng)性且容易被巨噬細(xì)胞所吞噬等缺點(diǎn)，越來(lái)越多的研究者趨向于將緩釋微球和其他材料(如膠體)復(fù)合，結(jié)合兩者的優(yōu)點(diǎn)達(dá)到更佳的緩釋效果。

1.2 VEGF-納米顆粒體系

生長(zhǎng)因子緩釋納米粒是一類(lèi)以天然或合成的高分子材料為載體的粒徑為10～100 nm的固態(tài)載藥膠體微粒，生長(zhǎng)因子溶解在液態(tài)核中或吸附在其表面。與微球相比，納米顆粒的制備技術(shù)相對(duì)要求較高，但其具有物理穩(wěn)定性好、生物利用度高、有肝脾和骨髓靶向性、不易阻塞血管等優(yōu)點(diǎn)。

Golub等構(gòu)建了一種載 VEGF的可注射PLGA納米顆粒體系(VEGF-NPs)，建立小鼠股動(dòng)脈缺血模型測(cè)定其對(duì)小鼠后肢血運(yùn)重建的作用，小鼠麻醉后將其股動(dòng)脈和靜脈結(jié)扎并將該區(qū)域切除，分別注射 VEGF-NPs、VEGF 和生理鹽水[14]。4 d 后用三維斷層掃描血管造影觀察血管的生長(zhǎng)和形態(tài)，結(jié)果顯示VEGF-NPs處理組的小鼠與其它組相比總血管量和血管連接有明顯增加，其血管形成總量超過(guò)VEGF組一個(gè)數(shù)量級(jí)，表明PLGA負(fù)載VEGF緩釋納米粒的促血管生成作用在組織工程和心血管藥物的應(yīng)用方面有著廣闊的應(yīng)用前景。

因?yàn)閂EGF分子結(jié)構(gòu)中含有能與肝素結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，因此Chung等開(kāi)發(fā)了肝素修飾的 PLGA納米粒子用于運(yùn)載 VEGF[15]。他們研究了肝素功能化納米顆粒/纖維蛋白膠復(fù)合物負(fù)載VEGF，對(duì)于血管生成的生物學(xué)活性以及治療效應(yīng)[16]，根據(jù)小鼠皮下埋植模型中毛細(xì)血管密度觀察，肝素功能化組有顯著增加的生物學(xué)活性;并且，在小鼠后肢缺血模型中，功能化納米顆粒復(fù)合物明顯提高了治療性血管生成因子的作用，小鼠后肢血壓明顯恢復(fù)，血管生成量和脈絡(luò)密度有明顯增加。

Tan Q等通過(guò)物理自組裝法制備了一種肝素/殼聚糖納米顆粒，直徑為 67～132 nm。將該載VEGF納米粒子固定到牛頸靜脈脫細(xì)胞支架上，觀察其對(duì)支架的血管化作用[17]。分別用低濃度VEGF組(50 ng/mL)和高濃度 VEGF組(250 ng/mL)評(píng)價(jià)了支架體內(nèi)和體外的血管化。該固定了載VEGF肝素/殼聚糖納米顆粒的支架在體外可持續(xù)幾周高效緩釋 VEGF，30 d內(nèi)低濃度組 VEGF釋放率約為37.12%，高濃度組釋放約42.17%，并且明顯地刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖;將這種支架埋植到小鼠皮下，分別于4周和8周取材，組織學(xué)分析顯示該載VEGF納米顆粒顯著增加了成纖維細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞外基質(zhì)的形成，并且在小鼠皮下埋植模型中加速了血管化。這項(xiàng)研究提供了一種新的加速組織工程支架再生的方法，很有應(yīng)用前景。

采用納米顆粒載體技術(shù)，可以提高VEGF的負(fù)載量，顆粒的溶解速率也將隨著顆粒尺度的縮小而顯著提高。此外，顆粒能將VEGF轉(zhuǎn)運(yùn)到特定靶位，在病灶處合理釋放，提高了VEGF利用率的同時(shí)，避免了藥物對(duì)其他部位的不良刺激，可設(shè)計(jì)靶向性載VEGF納米顆粒來(lái)治療特定部位的缺血性疾病。但是單獨(dú)使用納米顆粒作為載體，其對(duì)VEGF的釋放速率較快，幾天后就基本完全釋放，因此將其與支架或凝膠相結(jié)合，也是提高其釋放及原位固定效果并使其在組織工程領(lǐng)域有著更為廣闊的應(yīng)用前景。

1.3 VEGF-水凝膠體系

由于水凝膠與很多組織細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，可以在相對(duì)溫和的條件下制備處理，釋放傳遞過(guò)程中可減小感染概率，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用作為藥物和各類(lèi)細(xì)胞生長(zhǎng)因子釋放的載體材料。如前所述，它們也常作為基質(zhì)負(fù)載微球來(lái)更好地實(shí)現(xiàn)VEGF的原位控釋，以避免載藥微球和納米粒被巨噬細(xì)胞所吞噬。常用的有天然高分子水凝膠包括海藻酸鹽、殼聚糖、瓊脂糖、膠原、明膠和透明質(zhì)酸等形成的水凝膠，以及合成高分子水凝膠：聚氧乙烯、聚乙烯醇和聚丙烯酸膠等[7]。

Silva等制備了一種可注射海藻酸鹽水凝膠體系[18]。他們通過(guò)部分氧化聚合物鏈和改變聚合物的相對(duì)分子質(zhì)量分布，可以控制海藻酸凝膠的降解速率，從而控制生長(zhǎng)因子的釋放速率。將該體系注射到缺血部位，可持續(xù)釋放相對(duì)低量的有活性VEGF達(dá)15 d，而單純注射的VEGF在72 h之后全部被清除。小鼠后肢缺血部位的新生血管明顯增加;缺血再灌注影像顯示注射該水凝膠體系28 d之后，組織的血流灌注已接近正常水平，而單純注射VEGF組卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到正常水平。表明該可注射降解可控的水凝膠體系能夠顯著促進(jìn)治療性血管新生。

Tabata等研究了膠原凝膠中VEGF的體內(nèi)釋放，用I125標(biāo)記VEGF包裹于膠原凝膠中，埋植于小鼠背部皮下，膠原凝膠用不同劑量的戊二醛交聯(lián)不同的時(shí)間，隨著交聯(lián)濃度和時(shí)間的增加，膠原凝膠的降解速率越慢，VEGF的釋放時(shí)間也越長(zhǎng);與 VEGF溶液和空膠原凝膠對(duì)照組相比，埋植載VEGF的膠原凝膠組周?chē)懈@著的血管新生[19]。

與微球和納米粒子相比，水凝膠主要通過(guò)物理吸附和包裹負(fù)載 VEGF，因此通常載藥量較低，VEGF易失活，需負(fù)載高于微球和納米粒子的劑量(1～3 μg)，兩周左右基本釋放，且釋放速率較快，一般為兩周左右，但是由于其材料的溫和性，在體內(nèi)常用于缺血部位的原位注射以及美容整形的皮下注射。

1.4 VEGF-組織工程支架體系

尋找適宜的方法將生長(zhǎng)因子負(fù)載于支架材料中，達(dá)到緩慢控制釋放，防止生長(zhǎng)因子從釋放部位迅速擴(kuò)散，達(dá)到有效刺激細(xì)胞的增殖、分化、生長(zhǎng)與組織再生同步的目的，已成為組織工程學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容。

采用聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物PLGA等制備的多孔支架，由于其制作過(guò)程復(fù)雜，大都要用到有機(jī)溶劑并需要水溶液后處理。從保持生長(zhǎng)因子活性和載藥量考慮，很難將生長(zhǎng)因子直接加入到聚合物單體原料中共處理?？梢詫⑸L(zhǎng)因子包埋于疏水性可降解聚合物的微粒中，在多孔支架的制備過(guò)程中加入到基質(zhì)材料中。但這種方法有操作復(fù)雜、載藥量低、生長(zhǎng)因子釋放速率不易調(diào)控等問(wèn)題。而利用生物學(xué)方法對(duì)已成型的多孔支架進(jìn)行表面處理，將生長(zhǎng)因子負(fù)載在支架上，不但操作簡(jiǎn)單，且可以保持生長(zhǎng)因子的活性，有一定緩釋效果，是目前一種較好的方法。徐曉峰等通過(guò)物理吸附的方法將VEGF負(fù)載于納米羥磷灰石膠原(nano Hydroxyapatite/collagen，nHAC)上，制備成VEGF+肝素/纖維連接蛋白(HP/FN)+nHAC緩釋支架。經(jīng)Elisa方法檢測(cè)，證明了該緩釋支架能夠延緩VEGF的釋放，具有一定的緩釋效果[20]。實(shí)驗(yàn)中人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(h MSCs)經(jīng)誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞后種植于該緩釋支架，通過(guò)計(jì)算細(xì)胞黏附率、支架內(nèi)的細(xì)胞數(shù)及掃描電鏡觀察，證實(shí)了 VEGF+HP/FN+nHAC緩釋支架無(wú)細(xì)胞毒性，且更有利于細(xì)胞的黏附生長(zhǎng)和分化，能使成骨誘導(dǎo)的種子細(xì)胞表達(dá)更強(qiáng)的成骨能力，表現(xiàn)出優(yōu)良的生物相容性。

戴建武和Radisic小組則分別用不同的化學(xué)方法將VEGF共價(jià)固定到多孔的膠原支架上，并都證實(shí)了這種共價(jià)結(jié)合了VEGF的膠原支架能很好的促進(jìn)血管生成和組織再生[21-23]。例如，Radisic小組將VEGF和血管生成素1(Ang1)共價(jià)結(jié)合到三維多孔膠原支架上，體外種植內(nèi)皮細(xì)胞，3 d后，VEGF/Ang1修飾支架組的內(nèi)皮細(xì)胞與未修飾支架和游離生長(zhǎng)因子對(duì)照組相比有明顯的增殖，有較高的乳酸生成率和葡萄糖消耗率;7 d后，修飾了生長(zhǎng)因子的支架上由內(nèi)皮細(xì)胞生成的管狀組織增加，并且內(nèi)皮細(xì)胞的滲透性增強(qiáng)[22]。

孫勇等采用兔橈骨完全性骨缺損模型，將復(fù)合有VEGF或骨形態(tài)發(fā)生蛋白的納米陶瓷人工骨植入動(dòng)物骨缺損處，比較其修復(fù)骨缺損能力，分析其促進(jìn)骨生成機(jī)制[24]。復(fù)合人工骨中含 VEGF約300 ng/cm3，能有效緩釋約10 d。在術(shù)后8周前，成骨體積、血管數(shù)均是復(fù)合血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子組＞復(fù)合骨形成蛋白組，組織學(xué)切片發(fā)現(xiàn)在血管長(zhǎng)入、骨生成、骨塑型等方面復(fù)合VEGF組均略早于復(fù)合骨形成蛋白組。證明復(fù)合VEGF的納米陶瓷人工骨修復(fù)材料能滿足骨組織替代的要求，修復(fù)骨缺損的效果確切，其特點(diǎn)是能促進(jìn)人工骨早期血管化和成骨。

支架材料在固定生長(zhǎng)因子方面與微球和納米粒子類(lèi)似，載藥量相對(duì)較高，釋放速率也可達(dá)到移植部位組織修復(fù)的要求，由于支架的穩(wěn)定性和可加工成型特性，雖然其有效緩釋時(shí)間不到兩周，但其在早期的促血管化作用影響了之后長(zhǎng)達(dá)數(shù)周的血管新生和組織再生，在血管移植尤其是骨組織修復(fù)方面有著不可替代的作用。

1.5 VEGF基因載體

為克服單純蛋白質(zhì)治療的缺點(diǎn)，人們考慮應(yīng)用VEGF基因治療，即將外源VEGF基因?qū)肽康募?xì)胞并有效表達(dá)，從而達(dá)到治療目的。

基因治療需要合適的載體，目前被研究應(yīng)用最多的是腺病毒載體[25]。腺病毒載體能有效感染多種細(xì)胞，不整合入宿主細(xì)胞基因組，在增殖緩慢或靜止型的細(xì)胞中仍可轉(zhuǎn)錄，因而得到廣泛應(yīng)用[26]。ZHANG等構(gòu)建了攜帶VEGF和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)的重組腺病毒(adeno-associated virus，AAV)載體，并轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，7 d后綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的表達(dá)明顯增加，28 d后仍可檢測(cè)到;在大鼠后肢缺血模型中，GFP的表達(dá)從注射后第四周開(kāi)始增加，在第八周仍可檢測(cè)到?；蜣D(zhuǎn)然后8周，AAV-VEGF/BMP組的平均血流量明顯增加[27]。該研究表明：腺病毒載體介導(dǎo)的VEGF和BMP基因轉(zhuǎn)染可刺激血管生成和骨再生，可能為股骨頭缺血性壞死的治療提供新的策略。

由于病毒載體具有潛在的致癌毒性和免疫原性，非病毒載體作為其替代物在基因治療方面有著較快的發(fā)展，非病毒轉(zhuǎn)基因載體能夠濃縮質(zhì)粒，被細(xì)胞內(nèi)吞并進(jìn)入細(xì)胞核，從而使質(zhì)粒表達(dá)它們，且制備簡(jiǎn)單，費(fèi)用低，易于大規(guī)模生產(chǎn)等，但有轉(zhuǎn)染效率低，一過(guò)性表達(dá)等缺點(diǎn)。Zhou等以pcDNA3質(zhì)粒為載體介導(dǎo)VEGF基因轉(zhuǎn)染大鼠MSCs，以縫扎左冠脈前降支起始部方式構(gòu)建大鼠心肌缺血模型，2周后以心肌內(nèi)注射方法移植轉(zhuǎn)染VEGF基因干細(xì)胞，并設(shè)對(duì)照組、基因組、干細(xì)胞組[28]。4周后以免疫組化染色及測(cè)定毛細(xì)血管密度檢測(cè)療效，結(jié)果顯示各治療組不同程度的心功能改善，以轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞組心功能改善最為顯著，心肌梗死范圍明顯小于其他組。既保證了血管的新生以促進(jìn)心功能的改善，又不至于引起血管再生的過(guò)度或畸形。轉(zhuǎn)染VEGF基因MSCs在抑制心室擴(kuò)張，限制心室重構(gòu)及促進(jìn)心肌細(xì)胞修復(fù)，緩解心功能進(jìn)行性下降等方面優(yōu)于單純的細(xì)胞治療或基因治療。

通過(guò)載體介導(dǎo)能表達(dá)VEGF蛋白的基因，并轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，可獲得局部持續(xù)、穩(wěn)定、高效表達(dá) VEGF蛋白的能力，并且有利于VEGF濃度的精準(zhǔn)維持和生理性負(fù)反饋調(diào)節(jié)，因此能更好地調(diào)控血管新生的程度，從而加強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞對(duì)缺血性疾病的療效。與傳統(tǒng)載體微球、納米粒子、支架和水凝膠相比，新型的基因載體從根源上解決了VEGF蛋白的來(lái)源，在治療心肌梗死和缺血性壞死方面有著顯著的療效，但其有無(wú)長(zhǎng)期的副作用還有待進(jìn)一步的考察。

2 問(wèn)題與展望

近年來(lái)，VEGF緩釋體系的研究在取得一定成績(jī)的同時(shí)也存在著諸多問(wèn)題。對(duì)于蛋白質(zhì)藥物的傳遞及緩控釋放，高分子微球、納米顆粒以及水凝膠體系給藥方便，且廣泛應(yīng)用。但對(duì)于組織修復(fù)用各種生長(zhǎng)因子，組織工程支架方法則可以達(dá)到很好的控釋和定位治療效果且在組織生長(zhǎng)方面有很大優(yōu)勢(shì)。但是因?yàn)樾枰中g(shù)植入而造成創(chuàng)口，為其美中不足。目前很多研究工作者致力于改進(jìn)載體制備方法，應(yīng)用不同材料制成混合材料或同時(shí)配合微球、水凝膠以及基因載體技術(shù)實(shí)現(xiàn)其注射方式給藥。尋求以復(fù)合載體作為解決問(wèn)題的突破口構(gòu)建緩釋體系，以靶向性高、釋藥平穩(wěn)有效、定量準(zhǔn)確、有利于組織再生為目的不斷改善生長(zhǎng)因子緩釋體系的制備方法，從而實(shí)現(xiàn)VEGF穩(wěn)定、有效地釋放。

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