現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥制劑多指標(biāo)成分質(zhì)量控制中的應(yīng)用

雷利利，張熙潔，侯林中，劉曉紅（河北唐山市工人醫(yī)院藥學(xué)部，唐山市063000）

中藥制劑是以中藥材為原料，以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，按照一定的處方和制備工藝加工而成的制劑，因其在疑難雜癥方面療效獨(dú)特、毒副作用少，越來(lái)越受到醫(yī)藥界的廣泛關(guān)注。由于中藥制劑成分復(fù)雜，藥效學(xué)研究滯后，《中國(guó)藥典》（一部）收載的中藥含量測(cè)定的成分，一種是活性有效成分；一種是指標(biāo)成分，即可能是活性成分，也可能是非活性成分。為了落實(shí)科技部和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局對(duì)藥品“安全、有效和質(zhì)量可控”的發(fā)展戰(zhàn)略，全國(guó)的藥學(xué)工作者經(jīng)過(guò)幾十年不斷努力，使現(xiàn)代色譜技術(shù)成為中藥質(zhì)量控制的主要分析手段。從1985年版《中國(guó)藥典》開(kāi)始引入色譜技術(shù)到2010年版《中國(guó)藥典》，在短短的25年時(shí)間內(nèi)，現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥質(zhì)量控制方面得到突飛猛進(jìn)的發(fā)展。2005年版《中國(guó)藥典》（一部）中收載564種中藥制劑，其含量測(cè)定項(xiàng)中有32種采用薄層色譜（TLC）法，338種采用HPLC法，23種采用氣相色譜（GC）法。而2010年版《中國(guó)藥典》（一部）收載中藥制劑有1 063種，其含量測(cè)定項(xiàng)中709種采用HPLC法，24種采用GC法，12種采用薄層掃描色譜（TLC-CS）法?？梢?jiàn)，2010年版與2005年版《中國(guó)藥典》相比，定量分析項(xiàng)中色譜技術(shù)的應(yīng)用明顯增加。因此，本文就目前色譜技術(shù)在中藥制劑多指標(biāo)成分定量分析方面的應(yīng)用綜述如下。

1 HPLC在中藥制劑多指標(biāo)成分控制中的應(yīng)用

HPLC法具有分離效能高、分析速度快、重現(xiàn)性好、流動(dòng)相選擇性廣、色譜柱可反復(fù)使用等特點(diǎn)，因此在中藥制劑質(zhì)量控制中占有非常重要的地位。

在HPLC儀構(gòu)成組件中，檢測(cè)器作為核心部件主要包括紫外檢測(cè)器（UV）、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）、質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）以及熒光檢測(cè)器等。二極管陣列檢測(cè)器（DAD）也屬于紫外檢測(cè)器。在中藥制劑質(zhì)量分析中最為常用的檢測(cè)器是UV、DAD、ELSD及MS。徐金鐘等[1]以HPLC-UV檢測(cè)法測(cè)定清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量，結(jié)果在274 nm波長(zhǎng)處各成分線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確性高。紀(jì)曉影等[2]以HPLC-UV法測(cè)定抗感解毒顆粒中綠原酸、梔子苷和葛根素含量，結(jié)果在238 nm波長(zhǎng)處各成分的平均回收率分別為96.6%、97.9%、98.4%。安神補(bǔ)心丸[3]中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹參酮ⅡA的含量測(cè)定的反相（RP）-HPLC-UV檢測(cè)法的建立，也使該制劑質(zhì)量得到有效控制。此外，HPLC-UV法還可用于腸安康顆粒[4]、退熱解毒注射液[5]、通舒口爽膠囊[6]、銀黃顆粒[7]、桂枝茯芩膠囊[8]等制劑中多指標(biāo)成分的含量測(cè)定。DAD具有快速提供待測(cè)物的三維圖譜等特點(diǎn)，近幾年也逐漸用于中藥制劑中多指標(biāo)成分分析。魯艷柳等[9]采用HPLC-DAD法在276 nm波長(zhǎng)處分析了定清肝活血方中葛根素、黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素含量，結(jié)果各指標(biāo)成分平均回收率均在99.64%～100.83%之間?？垢心z囊中綠原酸、咖啡酸、芍藥苷、木犀草苷和蘆丁同時(shí)測(cè)定的HPLC-DAD法的建立，也為該制劑質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)提供了參考[10]。綜上所述，HPLC-UV或HPLC-DAD法為中藥制劑質(zhì)量的有效控制提供了可靠的依據(jù)和保證。

UV作為專屬型檢測(cè)器，只針對(duì)有紫外吸收的成分進(jìn)行檢測(cè)，而對(duì)于紫外吸收弱的化合物成分，往往采用ELSD分析，不但避免了其他紫外吸收成分的干擾，且提高了靈敏度。段瑞等[11]用HPLC-ELSD法測(cè)定紅藥片中三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，與該制劑用RP-HPLC法分析比較，前者準(zhǔn)確、分離效果好、無(wú)干擾，且節(jié)省了分析時(shí)間。李春英等[12]建立了四君子丸中黨參炔苷、茯苓酸、甘草酸、蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量分析的HPLC-ELSD法，結(jié)果待測(cè)組分質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值與色譜峰面積的對(duì)數(shù)值有良好的線性關(guān)系。此外，Wei YJ等[13]采用HPLC-DAD-ELSD法測(cè)定復(fù)方丹參制劑中的酚酸、皂苷和二萜醌類成分的含量，方法新穎。2010年版《中國(guó)藥典》（一部）中采用HPLC-ELSD法測(cè)定品種已達(dá)到41種，可見(jiàn)HPLC-ELSD法將成為中藥制劑的主要分析手段。

HPLC-MS法則是將HPLC的高分離效能和MS的高靈敏度、高專屬性及較強(qiáng)的結(jié)構(gòu)解析能力相結(jié)合，成為中藥制劑復(fù)雜系統(tǒng)質(zhì)量研究的有力手段。許海棠等[14]采用HPLC-MS法，選擇電噴霧（ESI）為電離源，通過(guò)待測(cè)組分的保留時(shí)間和質(zhì)譜信息，對(duì)桂林西瓜霜噴劑中苦參堿、小檗堿、黃芩苷和靛玉紅等有效成分同時(shí)進(jìn)行了快速靈敏的定性定量分析。HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)是根據(jù)特征碎片離子（子離子）的峰面積進(jìn)行定量，專一性強(qiáng)，不要求各成分色譜峰完全分離，分析快速。張新峰等[15]采用HPLC-MS/MS法，在11 min內(nèi)完成了左金丸和香蓮?fù)柚兴幐鶋A、黃連堿、巴馬汀、小檗堿、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量測(cè)定，且6種成分的最低定量濃度為0.5 ng·mL-1。HPLC-MS（MS/MS）的聯(lián)用還可用于四物湯[16]中有機(jī)酸類和內(nèi)酯類成分等檢測(cè)。此外，MS與其他檢測(cè)器聯(lián)用（如HPLC-DAD-MS/MS[17]）還可用于分析制劑中糖類、萜類及苷類化合物。

多波長(zhǎng)HPLC法的出現(xiàn)，為中藥制劑多指標(biāo)成分定量分析提供了另一新途徑。多波長(zhǎng)的選擇一般是建立在指標(biāo)成分最大吸收波長(zhǎng)基礎(chǔ)上，不但增加方法的靈敏度和準(zhǔn)確度，而且降低了其他成分的干擾。曾俊芬等[18]在280、320 nm波長(zhǎng)處采用HPLC-DAD法實(shí)現(xiàn)了通脈口服液中咖啡酸、葛根素、阿魏酸、隱丹參酮、丹參酮ⅡA等成分的良好分離。柏冬等[19]采用多波長(zhǎng)HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定桂枝湯中芍藥苷、甘草酸、肉桂酸、桂皮醛及甘草苷的含量，結(jié)果在230、250、280 nm波長(zhǎng)處，60 min內(nèi)5種有效成分被完全分離。此外，多波長(zhǎng)HPLC法還可用于抗感寧合劑[20]、雙黃連口服液[21]、益宮膠囊[22]等制劑中多指標(biāo)成分分析。

2 GC在中藥制劑多指標(biāo)成分控制中的應(yīng)用

GC法分離效能高、靈敏度高、分析速度快，廣泛用于一些揮發(fā)性成分的測(cè)定，如暑濕感冒靈[23]中麝香草酚和香荊芥酚，傷濕止痛膏[24]中樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯，以及六味安消膠囊[25]中對(duì)甲氧基桂皮酸乙酯、土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯等含量分析。

GC-MS聯(lián)用技術(shù)可對(duì)復(fù)雜的中藥制劑揮發(fā)性成分進(jìn)行分離和定性、定量分析。魏立新等[26]采用超臨界CO2萃取法提取帕朱膠囊的可溶性成分，并用GC-MS法對(duì)提取部位進(jìn)行分析，結(jié)果共分離鑒定22種化合物，主要成分含量為胡椒堿44.2%、亞油酸21.1%、甲基-甲撐基奧-異丙烯內(nèi)酯10.5%、棕櫚酸4.8%和γ-羥基-欖香烯酸內(nèi)酯3.5%等。

3 指紋圖譜法在中藥制劑多指標(biāo)成分控制中的應(yīng)用

多指標(biāo)定量指紋圖譜具有數(shù)據(jù)全面、圖譜優(yōu)質(zhì)、與化學(xué)計(jì)量學(xué)緊密結(jié)合等優(yōu)點(diǎn)，能對(duì)中藥復(fù)雜體系進(jìn)行多變量整體評(píng)價(jià)，體現(xiàn)中藥制劑療效的綜合性，在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。夏華玲等[27]采用GC-MS法，建立了筋骨痛消丸中揮發(fā)性成分的指紋圖譜法，為其質(zhì)量控制提供了更全面的信息。馬曉紅等[28]研究了復(fù)方丹參片乙醇提取物ESI-MS和HPLC-MS特征圖譜。劉征輝等[29]采用TLC建立了六味地黃丸（膠囊）的指紋圖譜，收集不同廠家的27批產(chǎn)品，并使用聚類分析法和主成分分析法對(duì)其指紋圖譜進(jìn)行了模式識(shí)別研究。

4 TLC和TLCS在中藥制劑多指標(biāo)成分控制中的應(yīng)用

TLC和TLCS操作簡(jiǎn)便，具有分離和鑒別雙重功能，但定量分析誤差較大，因此多用于中藥制劑的定性鑒別。2010年版《中國(guó)藥典》（一部）與2005年版比較，含量測(cè)定項(xiàng)下采用該法的中藥制劑品種明顯下降，而且該法局限于紫外吸收較弱或無(wú)紫外吸收成分的分析，如皂苷類[30]。

5 毛細(xì)管電泳（CE）在中藥制劑多指標(biāo)成分控制中的應(yīng)用

CE法是以高電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)，毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的技術(shù)，適用于中藥制劑中帶電荷化合物的分離分析。生物堿類成分[31]如小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、延胡索乙素等在緩沖體系中帶有正電荷，可采用CE法分析。此外，該法還可用于有機(jī)酸類、皂苷類或苷類[32]及黃酮類[33]等成分分析。膠束掃集CE法應(yīng)用于雙黃連口服液[34]中綠原酸和咖啡酸的含量測(cè)定，結(jié)果二者的檢出限分別達(dá)到1.02和0.168 μg·mL-1。CE場(chǎng)放大富集技術(shù)用于中藥制劑中含量較少的毒性成分測(cè)定，可有效改善其檢測(cè)靈敏度，如骨筋丸膠囊中有效毒性成分士的寧和馬錢子堿的含量采用該法測(cè)定，其檢測(cè)靈敏度相對(duì)于毛細(xì)管區(qū)帶電泳分別提高了400倍和600倍[35]。CE與電化學(xué)檢測(cè)（ED）聯(lián)用，對(duì)電化學(xué)活性物質(zhì)具有更高的靈敏度和選擇性，如復(fù)方羅布麻片中兒茶素、蘆丁、金絲桃苷、綠原酸和槲皮素等成分分析[36]。

6 結(jié)論

隨著現(xiàn)代色譜技術(shù)的不斷發(fā)展，中藥制劑的質(zhì)量控制模式逐漸從單一成分的鑒別和評(píng)價(jià)向多指標(biāo)成分分析邁進(jìn)。多指標(biāo)分析不僅能全面反映中藥整體質(zhì)量的信息，且能確保臨床用藥的安全、有效。因此，建立多指標(biāo)分析方法對(duì)中藥制劑質(zhì)量控制意義重大。但是，伴隨中藥制劑品種的推陳出新，其質(zhì)量的全面控制還有待于加強(qiáng)。因此，在不斷實(shí)踐的基礎(chǔ)上，要求廣大研究者結(jié)合現(xiàn)代分析手段，提高中藥復(fù)雜成分的分析水平，并在中藥制劑安全、有效的前提下，確保其質(zhì)量可控，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)中藥的現(xiàn)代化。

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