中金系列楊樹的組培技術(shù)研究

裘曉梅

(山西省楊樹豐產(chǎn)林實驗局林業(yè)科技服務(wù)中心，山西 大同 037000)

中金系列楊樹新品種是楊柳科楊屬白楊派植物，在生態(tài)條件極差的雁北地區(qū)，與群眾楊、合作楊相比，材積生長量、木材密度、造林成活率等均有所提高，抗風(fēng)折、抗天牛能力也有所增強。白楊派楊樹采用扦插繁殖，生根率不高，有性繁殖又不能保持優(yōu)良單株或無性系的優(yōu)良性狀。因此，組培繁殖是能夠保證在短時間內(nèi)大量繁殖出性狀一致的良種的最佳途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

根據(jù)不同的培養(yǎng)目的，選擇中金楊系列的腋芽(或頂芽)、嫩莖段、嫩葉片等不同的外植體作為試驗材料。

1.2 試驗設(shè)計與方法

1.2.1 愈傷組織誘導(dǎo)試驗

1)以自然狀態(tài)下植株腋芽或頂芽為外植體。采集生長旺盛的植株側(cè)芽或頂芽，用鑷子剝?nèi)?層～4層苞片，在飽和洗衣粉溶液中浸泡10 min，再用自來水反復(fù)沖洗干凈。之后置于70%的酒精中浸泡30 s～40 s，再用0.1%的升汞溶液消毒5 min～10 min，無菌水沖洗4次～5次后進行接種。基本培養(yǎng)基是改良的MS培養(yǎng)基，減少NH4NO3和KNO3的含量，增加ZnSO4·7H2O的含量，去掉有機成分中的甘氨酸，同時調(diào)整維生素B1和維生素B2的含量，蔗糖為30 g/L，瓊脂為5.5 g/L，pH值6.0，培養(yǎng)室溫度(25±3)℃，相對濕度60%～70%，光強1 500 lx～2 000 lx，光照時間10 h～12 h(下同).

2)以自然狀態(tài)下植株嫩葉片為外植體。采集生長旺盛的植株嫩葉片，用飽和洗衣粉溶液浸泡5 min～8 min，自來水沖洗干凈后，再用70%的酒精浸泡30 s～40 s，然后在0.1%的升汞溶液中消毒8 min～10 min，無菌水沖洗4次～5次后，用刀片劃破進行接種。普通培養(yǎng)室:溫度(25±3)℃，濕度60% ～70%，光強1 500 lx～2 000 lx，培養(yǎng) 10 h～12 h.人工氣候箱:溫度 25℃，濕度 70%，光強4 450 lx，培養(yǎng) 10 h.

3)以無菌苗植株葉片為外植體。把無菌葉片切割成0.5 cm×0.5 cm的小塊，進行接種。

1.2.2 不定芽分化試驗

1)以愈傷組織為材料，把愈傷組織切割成0.5 cm×0.5 cm的小塊，進行接種，培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法同愈傷組織誘導(dǎo)試驗。

2)以無菌植株葉片為材料，把葉片切割成0.5 cm×0.5 cm的小塊，進行接種，培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法同愈傷組織誘導(dǎo)試驗。

3)以自然狀態(tài)下植株嫩莖為材料，取帶1個芽或2個芽，長度為1.0 cm～1.5 cm的嫩莖段，進行接種，培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法同愈傷組織誘導(dǎo)試驗。

1.2.3 生根試驗

分別以 1/2MS+NAA0.2，1/2MS+IAA0.2，1/2MS+IBA0.2為生根培養(yǎng)基，每瓶接種長2 cm～3 cm，生長健壯的無菌嫩芽1株，每種處理轉(zhuǎn)接10瓶，培養(yǎng)方法同不定芽分化試驗。

1.2.4 移栽基質(zhì)配比試驗

以“腐殖質(zhì)+珍珠巖+蛭石”為移栽基質(zhì)，分別按體積比 3∶1∶1(1 號)，2∶1∶1(2 號)，1∶1∶1(3 號)進行配比，共3種配方，每種配方移栽60株。

1.3 調(diào)查項目與方法

依據(jù)不同的培養(yǎng)試驗及不同的試驗?zāi)康模謩e調(diào)查與測定污染率、愈傷組織生長情況、愈傷組織誘導(dǎo)率、形成不定芽率等指標。試管苗移栽35 d后調(diào)查成活率，記載株高、葉片數(shù)、葉色等生長狀況。

2 結(jié)果與分析

2.1 愈傷組織誘導(dǎo)試驗

2.1.1 腋芽或頂芽誘導(dǎo)愈傷組織

自然狀態(tài)下植株腋芽或頂芽誘導(dǎo)愈傷組織的狀況，見表1.

表1 自然狀態(tài)下植株腋芽或頂芽誘導(dǎo)愈傷組織狀況

由表1可以看出，以自然狀態(tài)下植株腋芽或頂芽為外植體，污染較為嚴重，污染率在40.0% ～60.0%，接種后1個月，仍有污染現(xiàn)象發(fā)生。在1號～7號培養(yǎng)基中培養(yǎng)，均可誘導(dǎo)出愈傷組織，從生長速度、顏色、質(zhì)地等指標性狀考慮，7號培養(yǎng)基最佳，愈傷組織致密、深綠色，分化成芽的能力相對較強;3號和6號次之;再其次是2號和5號，愈傷組織質(zhì)地較為致密，顏色為綠色;1號和4號培養(yǎng)基不太適合，其誘導(dǎo)的愈傷組織質(zhì)地疏松、顏色泛紅。

2.1.2 植株嫩葉片誘導(dǎo)愈傷組織

以自然狀態(tài)下植株嫩葉片為外植體接種于8號培養(yǎng)基中，分別在人工氣候箱與普通培養(yǎng)室中培養(yǎng)，均可產(chǎn)生致密、綠色的愈傷組織，見表2.

表2 自然狀態(tài)下不同培養(yǎng)條件植株嫩葉片生長狀況

2.1.3 無菌植株葉片誘導(dǎo)愈傷組織

無菌植株葉片誘導(dǎo)愈傷組織的狀況，見表3.

表3 無菌植株葉片誘導(dǎo)愈傷組織狀況

由表3可以看出，利用無菌苗植株葉片誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)率較高，可達53.3% ～80.0%，應(yīng)在中金楊系列組培實踐中推廣應(yīng)用。

2.2 不定芽分化試驗

2.2.1 愈傷組織分化不定芽

接種45 d后愈傷組織分化不定芽的情況見表4.

由表4可以發(fā)現(xiàn)，愈傷組織在1號，6號，7號3種不定芽分化培養(yǎng)基中，形成不定芽率較低，其中以6號培養(yǎng)基最低(13.3%)，7號培養(yǎng)基最高(26.7%)。

2.2.2 無菌植株葉片分化不定芽

取無菌苗植株葉片接種在培養(yǎng)基中，20 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有大量的不定芽產(chǎn)生，每片葉片可產(chǎn)生5個～6個不定芽。

表4 愈傷組織分化不定芽情況

2.2.3 植株莖段分化不定芽

自然狀態(tài)下把帶1個芽～2個芽，長度1.0 cm～1.5 cm的嫩莖段接種在MS+BA0.5+KT0.4+NAA0.2培養(yǎng)基(8號)中，分別置于普通培養(yǎng)室與人工氣候箱中培養(yǎng)，均可分化出苗。培養(yǎng)35 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn)，前者產(chǎn)生的芽體較小(0.5 cm～1.0 cm)，數(shù)量多，并由非腋芽處產(chǎn)生。而后者產(chǎn)生的芽體較壯，平均高達5.2 cm，且均為腋芽處著生。

2.3 生根試驗

無菌苗接種在生根培養(yǎng)基中15 d后生根情況見表5.從表5可以看出，設(shè)置的3種生根培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)生根，生根率均在70%以上，其中以1/2MS+NAA0.2培養(yǎng)基的生根率最高，1/2MS+IBA0.2的生根率最低。

表5 無菌苗生根情況

2.4 移栽基質(zhì)配比試驗

不同基質(zhì)配比試管苗移栽成活率與生長情況，見表6.

表6 不同基質(zhì)配比試管苗移栽成活率與生長情況

從移栽成活率、株高、葉片數(shù)、葉色等綜合來看，腐殖質(zhì)+珍珠巖+蛭石的移栽基質(zhì)中2號配比用于中金系列楊樹組培苗移栽最為適宜。

3 結(jié)論與討論

從遺傳性穩(wěn)定、培養(yǎng)速度快、出苗率高、培養(yǎng)成本低等綜合因素考慮，最適合中金系列楊樹組培的技術(shù)流程是:1)以中金系列楊樹植株嫩莖段為外植體，用0.1%的升汞溶液消毒8 min～10 min，再用無菌水沖洗5次～6次。2)將上述材料接種在MS+BA0.5+KT0.4+NAA0.2培養(yǎng)基中，放置于溫度(25±3)℃，濕度60%～70%，光照強度1 500 lx～2 000 lx，光照時間10 h～12 h的普通培養(yǎng)室培養(yǎng)?；蛑糜跍囟?5℃，濕度70%，光照強度4450 lx，光照時間10 h的人工氣候箱培養(yǎng)。3)用MS+BA0.5+KT0.4+NAA0.2培養(yǎng)基，在溫度(25±3)℃，濕度60% ～70%，光照強度1 500 lx～2 000 lx，光照時間10 h～12 h的普通培養(yǎng)室中進行繼代培養(yǎng)。4)在1/2MS+NAA0.2培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)15 d～20 d，再進行溫室煉苗7 d～10 d，然后移栽到腐殖質(zhì)+珍珠巖+蛭石(體積配比2∶1∶1)的混合基質(zhì)中。5)田間管理。

[1]武正偉.中金系列楊樹品種快速繁育技術(shù)[J］.山西林業(yè)，2009(5):16-17.

[2]王繼紅，李先萍.中金系列楊樹新品種特性及效益分析[J］.山西林業(yè)，2001(4):25-26.

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