鹽酸左西替利嗪搽劑的止癢抗過(guò)敏作用與局部皮膚組織分布特點(diǎn)研究

馮 芹，商慶節(jié)，孫敬俠，張 峰，羅漣榮，姚景春

(魯南制藥集團(tuán)新藥藥理中心，山東臨沂 273400)

組胺是最常見(jiàn)的瘙癢介質(zhì)，主要存在于肥大細(xì)胞內(nèi)的異染性顆粒中，皮膚的角質(zhì)形成細(xì)胞中也有組胺存在［1］。鹽酸左旋西替利嗪是西替利嗪的左旋體，是較新的第二代H1受體拮抗劑。體外實(shí)驗(yàn)研究表明它可抑制嗜酸粒細(xì)胞游走［2］，可與人H1受體選擇性的高親和力結(jié)合［3］，有較好的組胺拮抗作用，還可以抑制變態(tài)反應(yīng)相關(guān)的多種炎癥介質(zhì)的釋放，同時(shí)具有較廣泛的抗炎作用。有研究證實(shí)西替利嗪可能通過(guò)阻斷真皮成纖維細(xì)胞上的H1受體抑制中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的趨化而發(fā)揮抗皮膚過(guò)敏炎癥作用［4］。目前鹽酸左旋西替利嗪均為口服制劑，尚無(wú)外用制劑，我們將其制成外用搽劑，在動(dòng)物模型上研究了止癢、抗過(guò)敏作用，研究體內(nèi)吸收及分布情況，并與口服給藥進(jìn)行對(duì)比。

1 材料

1.1動(dòng)物Hartley豚鼠，體質(zhì)量250～300 g，購(gòu)自無(wú)錫市惠山江南實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)，合格證號(hào):2018933。SD大鼠，體質(zhì)量150～200 g;ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，均由山東新時(shí)代藥業(yè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):0008036。

1.2試劑鹽酸左西替利嗪搽劑(由魯南貝特制藥有限公司制劑實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào):090401)，磷酸組胺(阿拉丁試劑有限公司批號(hào):29194)，伊文思藍(lán)(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):20091209)。

1.3儀器UV-2000型紫外分光光度計(jì)(上海尤尼科儀器有限公司)，LC-10ATVP高效液相色譜儀(日本島津公司)。

2 方法

2.1對(duì)磷酸組胺所致的豚鼠瘙癢模型的影響白色Hartley豚鼠(♀♂各半)，按性別、體質(zhì)量隨機(jī)分為4組:基質(zhì)組、鹽酸左旋西替利嗪搽劑3個(gè)濃度組(0.625、2.5、10 g·L－1)(n=8)，各搽劑組在致癢前30 min涂抹鹽酸左西替利嗪搽劑，基質(zhì)對(duì)照組抹基質(zhì)，涂藥面積約1 cm2，劑量約為0.3 ml·cm－2，口服給藥組灌胃給予鹽酸左西替利嗪水溶液(10 mg·kg－1)。具體實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)［5］。

2.2對(duì)大鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)(PCA)模型的影響SD大鼠，分組同“2.1”(n=10)，致敏范圍約4 cm2，各組于攻擊前30 min在致敏部位涂抹相應(yīng)搽劑，給藥量約為0.05 ml·cm－2。具體實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)［6］。

2.3對(duì)組胺致小鼠皮膚血管擴(kuò)張作用的影響ICR小鼠，分組同“2.1”(n=10)，各組小鼠腹部皮膚剪毛，范圍約4 cm2，涂抹相應(yīng)搽劑，給藥量約為0.01 ml·cm－2，口服給藥組灌胃給予鹽酸左西替利嗪水溶液(20 mg·kg－1)，具體實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)［6］。

2.4兩種給藥途徑在大鼠體內(nèi)的血藥濃度SD大鼠，按性別、體質(zhì)量隨機(jī)分為兩組:鹽酸左西替利嗪搽劑組和口服鹽酸左西替利嗪溶液組(n=6)。搽劑組背部皮膚剪毛，范圍約4 cm2，涂抹 10 g·L－1的搽劑，給藥量約為 0.05 ml·cm－2，口服給藥劑量為 20 mg·kg－1，于給藥后 0.2、0.4、0.6、0.9、1.2、1.5、2、3、4、6 h 分別于大鼠眼靜脈叢采血 0.4 ml，HPLC測(cè)定血漿中左西替利嗪濃度。

2.5兩種給藥途徑大鼠皮膚的組織分布SD大鼠，按性別、體質(zhì)量隨機(jī)分為兩組為:鹽酸左西替利嗪搽劑和口服給藥組(n=20)，給藥方式、劑量同“2.4”，兩組大鼠給藥后0.2、0.6、2、4 h分別隨機(jī)脫頸椎處死5只大鼠，HPLC法測(cè)定皮膚組織勻漿中左西替利嗪含量。

2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用one-way ANOVA檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1對(duì)磷酸組胺所致的豚鼠瘙癢模型的影響鹽酸左西替利嗪搽劑低、中、高3個(gè)濃度組致癢閾為(354.38±192.03)、(690.00±207.02)、(827.50±229.52)μg與基質(zhì)組(27.50±19.64)μg相比均提高(P＜0.01)，高濃度鹽酸左旋西替利嗪搽劑組致癢閾高于口服鹽酸左西替利嗪組(490.00±151.18)μg(P＜0.01)。

3.2對(duì)大鼠同種被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)(PCA)模型的影響鹽酸左西替利嗪搽劑低、中、高3個(gè)濃度組吸光度為(0.081±0.041)、(0.052±0.025)、(0.036±0.015)，低于基質(zhì)組(0.120±0.101)，抑制率分別為32.5%、53.4%和70.3%，中、高濃度與基質(zhì)組相比差異具有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。

3.3對(duì)組胺致小鼠皮膚血管擴(kuò)張作用的影響鹽酸左西替利嗪搽劑低、中、高3個(gè)濃度組藍(lán)染面積為(29.04±6.22)、(12.95±3.41)、(7.85±5.57)mm2，與基質(zhì)組(125.21±17.40)mm2相比減少(P＜0.01)，抑制率分別為76.80%、89.66%和93.73%，高濃度組與口服組(23.12±7.68)mm2比藍(lán)染面積減少(P＜0.01);低、中、高3個(gè)濃度組吸光度分別為(0.127±0.031)、(0.089±0.027)、(0.079±0.025)，與基質(zhì)組(0.457±0.127)相比降低(P＜0.01)，抑制率為72.16%、80.54%、82.73%，高濃度組與口服組(0.131±0.018)相比，吸光度降低(P＜0.01)。

3.4兩種給藥途徑在大鼠體內(nèi)的血藥濃度用DAS2.1.1藥代數(shù)據(jù)處理軟件，計(jì)算大鼠口服鹽酸左西替利嗪和大鼠皮膚涂抹鹽酸左西替利嗪搽劑后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，采用非房室模型計(jì)算獲得的各只大鼠的藥代參數(shù)。給予鹽酸左西替利嗪搽劑時(shí)其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:Tmax=(0.9±0.19)h;Cmax=(1.307±0.161)mg·L－1=(1.749±0.287)h;AUC0-t=(2.505±0.189)mg·h·L－1;AUC0-∞=(2.776 ±0.151)mg·h·L－1;MRT0-∞=(2.598 ±0.290)h?？诜o予鹽酸左西替利嗪溶液時(shí)其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:Tmax=(0.667±0.197)h;Cmax=(12.915±2.128)mg·L－1;=(1.231±0.337)h;AUC0-t=(26.172 ±5.075)mg·h·L－1;AUC0-∞=(27.474 ±6.037)mg·h·L－1;MRT0-∞=(2.126 ±0.336)h。

3.5兩種給藥途徑在大鼠皮膚的組織分布大鼠皮膚涂抹鹽酸左西替利嗪搽劑后0.2、0.6、2、4h其組織分布分別為(19.796±3.508)、(24.512±4.442)、(32.497±3.747)、(28.503±3.139)μg·g－1。大鼠口服鹽酸左西替利嗪后其0.2、0.6、2、4 h其組織分布分別為(1.107 ±0.272)、(1.797±0.303)、(0.709 ±0.036)、(0.393 ±0.078)μg·g－1。

4 討論

研究結(jié)果顯示鹽酸左西替利嗪搽劑可以明顯提高磷酸組胺致豚鼠瘙癢閾值，對(duì)磷酸組胺所致的豚鼠瘙癢模型有明顯的抑制作用，對(duì)卵白蛋白聯(lián)合百日咳所致的大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)有明顯的抑制作用，對(duì)組胺致小鼠皮膚血管擴(kuò)張具有明顯的抑制作用，而且外用搽劑效果優(yōu)于口服給藥。

對(duì)口服和外用搽劑大鼠血藥濃度和皮膚組織分布進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，外用鹽酸左西替利嗪搽劑的血藥濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于口服給藥，而皮膚組織濃度則遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于口服給藥后的皮膚組織濃度，外用搽劑較低的血藥濃度能減少不良反應(yīng)，而在皮膚組織的高濃度的分布能增加左西替利嗪在皮膚中的作用強(qiáng)度，提高對(duì)局部過(guò)敏性皮膚病的治療效果。

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