淋巴細(xì)胞微粒的形成及其活性

邱 倩, 趙 玲， 熊 瑋△

(1第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院呼吸內(nèi)科, 重慶 400038；2解放軍第十二醫(yī)院婦產(chǎn)科, 新疆 喀什 830000)

淋巴細(xì)胞微粒的形成及其活性

邱 倩1, 趙 玲2， 熊 瑋1△

(1第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院呼吸內(nèi)科, 重慶 400038；2解放軍第十二醫(yī)院婦產(chǎn)科, 新疆 喀什 830000)

淋巴細(xì)胞微粒； 免疫反應(yīng)； 血管生成

淋巴細(xì)胞的主要生理功能是參與機(jī)體特異性的免疫應(yīng)答及調(diào)節(jié)，可進(jìn)一步分為T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞，分別執(zhí)行細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能?；罨牧馨图?xì)胞能夠表達(dá)和釋放多種細(xì)胞因子和蛋白等，同時(shí)，當(dāng)淋巴細(xì)胞受刺激活化或凋亡時(shí)從漿膜上脫落成直徑為0.05-1.00 μm的小囊泡顆粒，形成淋巴細(xì)胞微粒(lymphocyte-derived microparticles, LMPs)。LMPs含有多種特異性膜糖蛋白和生物學(xué)活性的受體，可通過與靶細(xì)胞的相互作用啟動(dòng)靶細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。這些細(xì)小的微粒可通過調(diào)節(jié)一氧化氮(nitric oxide,NO)通路引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。因此，在多種疾病中都可觀測(cè)LMPs數(shù)目的改變，如動(dòng)脈粥樣硬化[1]、心肌缺血、糖尿病、先兆子癇[2]等。

1 細(xì)胞微粒的形成

目前對(duì)細(xì)胞微粒形成的認(rèn)識(shí)主要限于體外分離或培養(yǎng)細(xì)胞的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，體內(nèi)參與微粒形成的機(jī)制尚未明確。

生理狀況下，淋巴細(xì)胞可囊泡化產(chǎn)生少量的LMPs。但在疾病狀態(tài)下，LMPs數(shù)量的明顯增加，主要是淋巴細(xì)胞受激活劑活化或凋亡的結(jié)果。細(xì)胞膜骨架由肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白、肌鈣蛋白、紐蛋白和踝蛋白等組成，是保證細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的主要物質(zhì)。細(xì)胞膜骨架分解是微粒形成的前提，細(xì)胞膜出芽和膜骨架重構(gòu)最終形成微粒，但細(xì)胞膜和膜骨架的相互作用機(jī)制仍在探討中 。

正常情況下，真核細(xì)胞的膜磷脂雙分子層分布不對(duì)稱。細(xì)胞膜外層主要由膽堿磷脂(鞘磷脂和卵磷脂)組成，而內(nèi)層主要由氨基磷脂[磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine,PS)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)和磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)]組成。細(xì)胞通過消耗能量維持磷脂的不對(duì)稱分布，這一過程由細(xì)胞膜上3種特殊的能量依賴酶共同調(diào)節(jié)：氨基磷脂特異性移位酶(flippase)、非特異性脂質(zhì)翻轉(zhuǎn)酶(floppase)和非特異性脂質(zhì)爬行酶(scramblase)。前2種酶均為ATP依賴，后1種酶是Ca2+依賴。Flippase能迅速將PS和PE從細(xì)胞膜外層轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜內(nèi)層；而floppase能緩慢將膜脂質(zhì)從細(xì)胞膜內(nèi)層轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜外層，scramblase允許膜脂質(zhì)在膜磷脂雙層之間任意移動(dòng)。在生理性Ca2+濃度下,活性的flippase和floppase共同維持膜脂不對(duì)稱分布的動(dòng)態(tài)平衡,而scramblase處于失活狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受刺激活化或凋亡時(shí)，胞外Ca2+內(nèi)流或胞內(nèi)Ca2+儲(chǔ)存庫的釋放，使細(xì)胞溶質(zhì)中的Ca2+濃度持續(xù)上升, floppase和scramblase被激活,而flippase活性則受到抑制，帶負(fù)電的PS翻轉(zhuǎn)暴露于細(xì)胞膜外層上，胞膜脂質(zhì)雙分子層的不對(duì)稱分布被破壞。

而細(xì)胞膜磷脂不對(duì)稱分布消失常伴隨細(xì)胞膜出芽和脫落，形成分泌囊泡，出現(xiàn)微粒。這一過程被認(rèn)為與PS外轉(zhuǎn)引起膜內(nèi)外張力變化有關(guān)。實(shí)驗(yàn)證明許多激活劑會(huì)破壞細(xì)胞膜磷脂質(zhì)雙分子層的非對(duì)稱分布，導(dǎo)致微粒形成，如鈣離子載體C5b-9、鈣離子載體A23187、膠原和凝血酶。

此外，細(xì)胞活化或凋亡后，細(xì)胞溶質(zhì)中Ca2+的濃度升高，并且呈現(xiàn)時(shí)間依賴。胞質(zhì)中增加的Ca2+抑制磷酸酶，而激活鈣蛋白酶和蛋白激酶使踝蛋白降解，最終導(dǎo)致支撐細(xì)胞膜的正常細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)遭到破壞，失去細(xì)胞骨架支撐的這部分細(xì)胞膜形成小泡狀結(jié)構(gòu)而向外突出伸出偽足，變形脫落形成微粒。細(xì)胞外的Ca2+被乙二醇四乙酸(ethylene glycol tetraacetic acid,EGTA)鰲合后阻斷胞質(zhì)中Ca2+的增加和細(xì)胞骨架蛋白的降解，可阻止細(xì)胞釋放微粒。因此，胞質(zhì)中Ca2+增加和細(xì)胞膜骨架降解是活化淋巴細(xì)胞釋放LMPs的主要機(jī)制。

但是研究發(fā)現(xiàn)，并不是所有的微粒都包含有PS，這說明微粒的形成機(jī)制非常復(fù)雜，可能有多條胞內(nèi)通路[3,4]。Sebbagh等[5]發(fā)現(xiàn)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和Rho(Ras homologous member)相關(guān)的卷曲蛋白激酶Ⅰ(Rho-associated coil ed-coilprotein kinaseⅠ，ROCKⅠ)參與了微粒的形成。生理狀態(tài)下，Rho GTP酶類是細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白的信號(hào)分子，當(dāng)其結(jié)合GTP后可向下游效應(yīng)蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)。絲氨酸-蘇氨酸激酶的2種亞型(Rho相關(guān)的卷曲蛋白激酶Ⅰ、Ⅱ,ROCK Ⅰ、ROCK Ⅱ)被認(rèn)為是Rho蛋白的效應(yīng)器。ROCK蛋白被與GTP結(jié)合的Rho蛋白激活，促進(jìn)肌球蛋白輕鏈的磷酸化，肌球蛋白ATP酶激活使肌球蛋白-肌動(dòng)蛋白絲與細(xì)胞質(zhì)膜連接，收縮力增加，細(xì)胞收縮[6]。而細(xì)胞凋亡時(shí)囊泡的形成與Rho蛋白無關(guān)，取決于ROCK。ROCK Ⅰ被caspase-3激活發(fā)揮細(xì)胞收縮效應(yīng)，導(dǎo)致了細(xì)胞膜骨架結(jié)構(gòu)紊亂[7]。因此，凋亡時(shí)微粒形成中ROCK Ⅰ和caspase-3共同參與介導(dǎo)了細(xì)胞膜骨架結(jié)構(gòu)的重塑。

而細(xì)胞活化和凋亡釋放的微粒，不但形成機(jī)制上不同，在大小、膜磷脂與蛋白質(zhì)的組成以及生理功能上也有明顯差異[8]；體內(nèi)微粒的釋放水平具有性別特異性，受月經(jīng)周期[9]和晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)[10]。而體內(nèi)和體外產(chǎn)生的微粒表型有差異，細(xì)節(jié)未明。

2 LMPs的組成及表面標(biāo)記

LMPs反映來源細(xì)胞的狀態(tài)(至少在體外)，帶有淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)容物和其表面標(biāo)記。從血液中分離的微粒(包括LMPs)由60%的磷酸卵磷脂、20%的鞘磷脂、9%的PE和其余一些磷脂組成。但不是所有的微粒表面都含有PE和PS[11]。使用不同方法得到的LMPs，其成分和表面標(biāo)記可有差異。雖然Miguet等[12]使用1-D聯(lián)合LC-MS/MS的方法首次分析了T細(xì)胞來源的LMPs的蛋白組成，結(jié)果鑒定出390種蛋白，其中34%定位在質(zhì)膜上，含有17種不同分化的造血集群。但是LMPs的化學(xué)組成仍然缺乏描述。同時(shí)，LMPs的蛋白組成也取決于親代淋巴細(xì)胞活化的方式。通過T細(xì)胞受體激活的T細(xì)胞富含CD3ε和CD3ξ鏈，其釋放的微粒也含有此表面標(biāo)記，而伊屋諾霉素和鹽酸甲氧激活產(chǎn)生的LMPs則沒有[13]。一般來說，LMPs表面表達(dá)淋巴細(xì)胞膜表面抗原，主要是糖蛋白，如CD3、CD4、CD8和CD20[14]。但并不是LMPs能表達(dá)所有來源的細(xì)胞蛋白。例如：T細(xì)胞來源的LMPs并不表達(dá)CD28和CD45。

3 LMPs的生物學(xué)活性

LMPs作為細(xì)胞間傳遞生物信息的重要介質(zhì)，有多種生物學(xué)活性，可作為細(xì)胞介質(zhì)和促進(jìn)細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和效能。

3.1調(diào)節(jié)免疫反應(yīng) LMPs可對(duì)巨噬細(xì)胞起作用，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。深入研究發(fā)現(xiàn)，來源于Jurket T細(xì)胞株能釋放LMPs，LMPs被RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬，進(jìn)而誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞凋亡，凋亡過程釋放微粒，導(dǎo)致微粒數(shù)目進(jìn)一步增加。這一過程是通過磷脂-花生四烯酸脂質(zhì)途徑實(shí)現(xiàn)的[15,16]。體外和體內(nèi)研究已證實(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)死亡和瀕臨死亡細(xì)胞的吞噬具有高效性。不同于壞死細(xì)胞被攝取后出現(xiàn)的病理過程，大量凋亡細(xì)胞被吞噬可抑制炎癥反應(yīng)引發(fā)抗炎效應(yīng)[17]。而巨噬細(xì)胞可通過攝取繼發(fā)壞死的細(xì)胞自身得到活化，從而分泌炎癥介質(zhì)，因此，如果大量凋亡的細(xì)胞不被及時(shí)清除出現(xiàn)繼發(fā)性壞死時(shí)，將啟動(dòng)機(jī)體炎癥應(yīng)答引起炎癥反應(yīng)。

事實(shí)上，在一些自身免疫性病和慢性炎癥疾病中就存在著對(duì)凋亡細(xì)胞吞噬的缺陷，而巨噬細(xì)胞的大量凋亡將進(jìn)一步促進(jìn)炎癥的發(fā)生。最終，釋放的LMPs導(dǎo)致了免疫抑制和微粒的自我擴(kuò)增，引起機(jī)體的炎癥狀態(tài)反應(yīng)。這說明微?？勺鳛橐环N新的炎癥介質(zhì)，微粒的釋放和生物學(xué)活性為研究免疫調(diào)節(jié)提供了一種新思路。

促/抗炎因子的不平衡狀態(tài)在慢性炎癥疾病如多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病理發(fā)展中起重要作用。T細(xì)胞通過與人類單核巨噬細(xì)胞直接接觸產(chǎn)生病理效應(yīng)，包括介導(dǎo)促炎因子白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)的上調(diào)，誘發(fā)慢性炎癥;正常情況下，這種病理過程可被HDL相關(guān)的載脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)特異性抑制。除了促炎因子外，通過直接接觸激活的單核細(xì)胞也介導(dǎo)細(xì)胞因子抑制物的產(chǎn)生，如分泌型白細(xì)胞介素1受體抑制物(secretory interleukin 1 receptor antagonist protein，SIL-IRα)。同時(shí)，LMPs也可促進(jìn)多種炎性介質(zhì)釋放與黏附分子表達(dá)，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)。Scanu等[18]體外刺激T細(xì)胞產(chǎn)生LMPs，LMPs同樣也可誘導(dǎo)人類單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β、TNF和SIL-IRα，HDL可抑制IL-1β和TNF的產(chǎn)生，但對(duì)SIL-IRα無此作用，說明了HDL在LMPs非壞死性活化單核細(xì)胞上具有抗炎作用。T細(xì)胞激活后釋放LMPs轉(zhuǎn)移來源細(xì)胞表面分子，以細(xì)胞接觸的方式參與單核細(xì)胞的活化，從而影響單核細(xì)胞的活性，這種活性不是通過在炎癥位點(diǎn)與T細(xì)胞直接接觸的形式獲得的。

3.2調(diào)節(jié)血管張力 血管壁不是一個(gè)靜止的器官，在生理或病理刺激下發(fā)生動(dòng)態(tài)變化。血管壁主要由平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)組成。許多全身及局部因子調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的功能，影響這些細(xì)胞的反應(yīng)性，進(jìn)而調(diào)節(jié)血管反應(yīng)性。收縮因子包括血管活性肽、血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)、內(nèi)皮素-1，刺激血管增生及收縮，提升血壓；舒張血管因子：NO、前列環(huán)素(prostacyclin,PGI)、C型利鈉肽和內(nèi)皮源性超極化因子(endothelium-derived hyperpolarizing factor,EDHF)使血管擴(kuò)張，從而降低血壓 。而在微粒作用下血管的擴(kuò)張程度將下降。LMPs可改變NO和活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)產(chǎn)生與釋放之間的平衡導(dǎo)致血管壁氧化應(yīng)激增加，影響內(nèi)皮細(xì)胞功能，誘導(dǎo)內(nèi)皮功能失調(diào)[19]。Martin等[20]實(shí)驗(yàn)證明LMPs可減弱乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管舒張，減少小鼠主動(dòng)脈環(huán)NO的釋放，增加其過氧化物的產(chǎn)生，這些效應(yīng)具有時(shí)間依賴性；同時(shí)證明LMPs也可下調(diào)剪切力介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性小鼠腸系膜小動(dòng)脈的舒張功能。其作用都是通過LMPs下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和上調(diào)小窩蛋白(caveolin-1)的表達(dá)而抑制內(nèi)皮細(xì)胞NO與PGI的合成,從而上調(diào)了血管張力[20]。

除此之外，LMPs還可直接作用于平滑肌細(xì)胞而影響血管收縮功能。此微粒通過Fas配體(Fas ligand,FasL)與平滑肌細(xì)胞上的Fas相結(jié)合，激活平滑肌細(xì)胞NF-κB，活化eNOS及環(huán)氧合酶-2(COX-2)，促進(jìn)NO和PGI的生成，進(jìn)而誘導(dǎo)鼠主動(dòng)脈弓對(duì)血管擴(kuò)張劑的低反應(yīng)性和內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂。

3.3調(diào)節(jié)血管生成 最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)微粒通過在細(xì)胞間傳遞生物信息來調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的功能。由于產(chǎn)生LMPs的方式不同，LMPs在調(diào)節(jié)血管生成方面有抑制和促進(jìn)雙重效應(yīng)。

① 抑制血管生成 Yang等[21]發(fā)現(xiàn)體外經(jīng)放線菌D處理后產(chǎn)生的LMPs能強(qiáng)烈地抑制主動(dòng)脈環(huán)毛細(xì)血管的萌芽，阻礙毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)的形成，使血管增殖、遷移和修復(fù)受損。該作用與下調(diào)2型血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體和提高ROS產(chǎn)物有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，LMPs使NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)亞基gp91phox、p22phox和p47phox的表達(dá)增加，結(jié)果導(dǎo)致ROS和NOX衍生的超氧化物(O2-)生成增多，而ROS參與了損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能；同時(shí)，LMPs使受體CD36的抗血管生成蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，并下調(diào)了2型血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白質(zhì)(磷酸化ERK1/2)的水平，從而抑制了血管生成。Mostefai等[19]研究表明,LMPs通過PI3K途徑降低NO的產(chǎn)生。培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞受這種微粒的處理后,NO產(chǎn)生減少,該效應(yīng)與eNOS的抑制位點(diǎn)磷酸化增強(qiáng)和caveolin-1的過表達(dá)有關(guān)。NO在血管生成過程中發(fā)揮著重要的作用,其調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的血管生成。LMPs使內(nèi)皮細(xì)胞NO產(chǎn)生減少,最終導(dǎo)致血管生成受損。

因此，體外經(jīng)放線菌素D處理后產(chǎn)生的LMPs通過PI3K激酶、黃質(zhì)氧化酶和NADPH氧化酶途徑激活內(nèi)皮細(xì)胞通路與ROS和NO有關(guān)，ROS和NO共同參與了LMPs抑制血管生成方面的作用。

② 促進(jìn)血管生成 最近研究發(fā)現(xiàn)激活或凋亡的人淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的LMPs也能夠增加促血管生成因子的表達(dá)如:血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、IL-1β以及細(xì)胞黏附分子(ICAM-1),促進(jìn)血管生成[22]。Martinez等[23]證實(shí)了激活或凋亡的人淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的LMPs表面攜帶有(sonic hedgehog,Shh)基因。Shh基因在脊椎動(dòng)物胚胎組織形成中起著重要的作用，包括大腦、脊椎、中軸骨骼和四肢的形成[24]。Shh蛋白被證實(shí)是脊椎動(dòng)物發(fā)育過程中組織形成所必需的胞外信號(hào)[25]，并能誘導(dǎo)巨核細(xì)胞的分化[23]。攜帶Shh基因的LMPs直接作用于內(nèi)皮細(xì)胞，改善內(nèi)皮細(xì)胞的功能，并通過直接激活Shh和PI3K通路使內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO,介導(dǎo)局部缺血/再灌注來預(yù)防內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的發(fā)生。此過程與NO通路有關(guān)的酶磷酸化使其表達(dá)發(fā)生改變和降低了ROS有關(guān)[26]；另外，Shh蛋白通過上調(diào)促血管生成因子家族的兩大家族：VEGF和血管成形素間接促進(jìn)血管生成。Soleti等[22]在體外用LMPs(Shh+)處理血管生成模型中的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，微粒介導(dǎo)和增加了毛細(xì)血管樣組織的形成,并且這些微粒調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、黏附分子的表達(dá)和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。q-PCR結(jié)果顯示促血管生成因子：VEGF、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(hepatocyte growth factor receptor,HGF)和FLT-1的mRNA表達(dá)水平增加。通過連接后肢缺血小鼠的左股總動(dòng)脈，發(fā)現(xiàn)LMPs(Shh+)通過激活eNOS和其它下游的促血管生成因子增加了小鼠后肢的血流灌注。這說明微粒(Shh+)在刺激新生血管生成方面發(fā)揮著有效的作用。

總之，刺激生成的方式不同，LMPs在調(diào)節(jié)血管生成方面發(fā)揮著不同的作用。如：放射菌素D、植物凝集素(PHA)等刺激和凋亡產(chǎn)生的LMPs作用不一致。濃度也可影響LMPs調(diào)節(jié)血管生成的作用。低濃度的LMPs可能促進(jìn)血管生成，高濃度的LMPs可能起抑制作用。LMPs的促血管生成作用和其促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO有關(guān)，而抗血管生成作用和氧化應(yīng)激及降低了內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO有關(guān)。

4 LMPs和臨床疾病

4.1心血管疾病 LMPs在冠心病的發(fā)病機(jī)理中起著重要的作用，研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣斑塊中有LMPs的存在[1]。來源于心肌梗死體內(nèi)的微?？蓳p傷內(nèi)皮NO轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，說明微?？赡懿糠謪⑴c了這些患者存在的內(nèi)皮功能失調(diào)的過程[27]。心肌梗死的新治療方法就是通過降低缺血/再灌注損傷的負(fù)面影響，來防止壞死梗塞區(qū)的擴(kuò)大并促進(jìn)新生血管形成。動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)表明建立側(cè)支循環(huán)可達(dá)到這一目的。把生長(zhǎng)因子直接注入缺血區(qū)域或把帶有VEGF的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入動(dòng)脈可促進(jìn)側(cè)枝血管的形成[28]。實(shí)驗(yàn)表明靜脈注射激活或凋亡的人淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的LMPs(Shh+)可釋放NO，從而改善內(nèi)皮細(xì)胞功能。最近報(bào)道了Shh基因治療可作為一種有效的治療手段用來改善缺血或心梗模型的心肌功能，并能促進(jìn)糖尿病傷口愈合[29]。因此，攜帶Shh的LMPs可作為一種不同于基因治療的新的治療方法，通過改善內(nèi)皮細(xì)胞功能、促進(jìn)新生血管形成干預(yù)心血管病病程。

4.2類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA) Combes等[30]首次指出微?？赡茉赗A中的作用與血栓形成有關(guān)。但是微粒的數(shù)目和疾病活動(dòng)的關(guān)系尚不確定。盡管研究者使用相同的方法分離和鑒定微粒，但由于分組不同，患者存在著個(gè)體差異，不同的研究結(jié)果中患者體內(nèi)微粒的來源及數(shù)目有較大變化。

Berckmans等[31]發(fā)現(xiàn)和其它類型的關(guān)節(jié)炎患者和健康對(duì)照組相比，RA患者血液中LMPs、單核細(xì)胞微粒、粒細(xì)胞微粒和紅細(xì)胞微粒的水平均無顯著差異，而關(guān)節(jié)腔滑液中微粒增高。其中T細(xì)胞來源的微粒、B細(xì)胞來源的微粒分別占微?？倲?shù)的20%-25%和低于10%。在一些患者的關(guān)節(jié)腔滑液的微粒中檢測(cè)到組織因子，微粒通過因子Ⅶ依賴的機(jī)制誘導(dǎo)凝血酶形成，可能進(jìn)一步促進(jìn)了關(guān)節(jié)內(nèi)纖維素的沉積。另一方面，微粒在RA中的活性與微粒對(duì)成纖維細(xì)胞的作用有關(guān)。Distler等[32]發(fā)現(xiàn)來源于Jurkat細(xì)胞的LMPs可以劑量依賴的方式誘導(dǎo)滑液中成纖維細(xì)胞MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13 mRNA和蛋白的合成(高達(dá)80倍)，而MMP-2、MMP-14、組織蛋白酶、金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)-1、TIMP-2和TIMP-3則無改變，說明LMPs對(duì)成纖維細(xì)胞MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13的上調(diào)具有特異性。同時(shí)，LMPs也可刺激促炎因子IL-6、IL-8、MCP-1和MCP-2的合成釋放。這些細(xì)胞因子可吸引更多的炎癥細(xì)胞遷移到關(guān)節(jié)內(nèi)并激活微粒本身，導(dǎo)致更多的微粒釋放，進(jìn)一步反饋活化炎癥細(xì)胞使炎癥出現(xiàn)自我放大反應(yīng)，導(dǎo)致骨和軟骨的破壞。微粒激活成纖維細(xì)胞的具體機(jī)制未明，由于一些微粒包含核苷酸和其它核內(nèi)分子，可能TLR參與了激活過程。通過IκB轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞和電遷移率分析，證實(shí)微粒誘導(dǎo)MMP的生成依賴于NF-κB通路，但與TNF-α和IL-1無關(guān)，表明LMPs誘導(dǎo)MMP和細(xì)胞因子釋放可能與患者對(duì)生物靶向TNF-α和IL-1治療的抵抗有關(guān)。

4.3糖尿病 目前威脅糖尿病病人生命最嚴(yán)重的病理為心血管病變，累及各種大血管和微血管病變是造成Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病發(fā)病和致死的主要原因。微血管病變常伴有微循環(huán)異常，引起腎臟病變、眼底病變等，嚴(yán)重者可造成腎功能衰竭和失明，是決定患者預(yù)后的主要因素,常見于各型糖尿??；而大血管病變主要和動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、血脂障礙和肥胖等危險(xiǎn)因素有關(guān)，常引起心、腦、腎嚴(yán)重并發(fā)癥而致死，因此在2型糖尿病更常見?，F(xiàn)已檢測(cè)到糖尿病患者體內(nèi)總微粒數(shù)量(包括LMPs)有明顯增加[33]。和對(duì)照組相比,患者體內(nèi)總Annexin-V陽性的微粒(包括LMPs)數(shù)量顯著上升，且HbA1c相關(guān)微粒的凝血活性也顯著增強(qiáng)，HbA1c參與了1型糖尿病糖蛋白失衡的病程。而2型糖尿病僅見總Annexin-V陽性的微粒增加。除了血凝素受體外，微粒表面還可攜帶黏附分子以結(jié)合血細(xì)胞或血管內(nèi)皮，參與炎癥信息的傳遞。白細(xì)胞來源的微粒可與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用誘導(dǎo)組織因子的表達(dá)。這說明各型糖尿病病理過程中激活釋放微粒，反作用于血細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，加重細(xì)胞活化過程，惡化血管病變和疾病病程。

4.4其它 在其它各種生理和病理狀態(tài)都可有過量的微粒生成。如：細(xì)胞黏附、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、癌癥、感染和正?；虍惓Ｈ焉锏取Ｑ装Y狀態(tài)下，體內(nèi)微粒的釋放量增加[34]。同損傷的細(xì)胞類似，微粒也能通過激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)來啟動(dòng)炎癥過程。識(shí)別單位C1q可結(jié)合來自凋亡Jurkat T細(xì)胞的LMPs，從而活化補(bǔ)體經(jīng)典途徑[35]。MPs表面有C3、C4的沉淀物可證實(shí)這一點(diǎn)。體內(nèi)檢測(cè)人類血漿中C1q陽性微粒量也同樣可證明。補(bǔ)體經(jīng)典途徑早期成分的沉積能激活經(jīng)典途徑促進(jìn)炎癥反應(yīng)。同時(shí)，在刺激炎癥反應(yīng)的機(jī)制中，微粒能釋放花生四烯酸作用于靶細(xì)胞，增強(qiáng)炎癥細(xì)胞的趨化性，并可誘導(dǎo)炎癥因子的形成。LMPs也可通過誘導(dǎo)免疫活性細(xì)胞凋亡來發(fā)揮抗炎作用。Jodo等[36]發(fā)現(xiàn)細(xì)胞能釋放表面攜帶FasL的微粒。與可溶性FasL和弱細(xì)胞毒性介質(zhì)有關(guān)不同，微粒相關(guān)的的FasL的作用類似于殺傷性B細(xì)胞、T細(xì)胞的FasL的作用。已證實(shí)T細(xì)胞來源的LMPs能誘導(dǎo)Raw264.7巨噬細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)凋亡中的巨噬細(xì)胞釋放微粒[15]。這種促凋亡機(jī)制和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。但在惡性腫瘤中，來源于腫瘤細(xì)胞并攜帶FasL的微粒誘導(dǎo)殺傷性T細(xì)胞凋亡可導(dǎo)致腫瘤逃逸。HIV-1感染患者外周血液中也有來源于輔助T細(xì)胞的微粒的增加。

5 小結(jié)

LMPs作為淋巴細(xì)胞受刺激活化或凋亡后形成的細(xì)胞脫落物，循環(huán)血液中LMPs水平和性質(zhì)可反映其來源淋巴細(xì)胞的功能狀態(tài)，并發(fā)揮多種重要的生物學(xué)作用，參與許多臨床疾病的病理生理過程，因此對(duì)LMPs的形成過程、產(chǎn)生機(jī)制、內(nèi)部成分及其生物學(xué)活性的作用機(jī)制等的進(jìn)一步研究都將成為今后深入探討的熱點(diǎn)。LMPs作為淋巴細(xì)胞活化或凋亡的標(biāo)志物，如何將LMPs的各種作用運(yùn)用于臨床等都有待進(jìn)一步解決。

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Formationandactivityoflymphocyte-derivedmicroparticles

QIU Qian1, ZHAO Ling2, XIONG Wei1

(1RespirationDepartmentofSouthwestHospitalAffiliatedtoTheThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China;2DepartmentofObstetricsandGynecology,TheTwelfthHospitalofPLA,Kashi830000,China.E-mail:xiongwei64@126.com)

Lymphocyte-derived microparticles (LMPs) are small membrane vesicles that are released upon activation or during apoptosis from lymphocytes.The LMPs were detected at elevated levels in the patients with inflammatory diseases, cardiovascular diseases or diabetes. In addition, LMPs are important mediators of transferring biological information and switching on the biological effects through their interaction with the target cells. Moreover, LMPs play completely distinct roles in different physiological and pathological conditions. This article describes the possible mechanism involved in the formation, composition, key biological activities and the relationship with diseases.

Lymphocyte-derived microparticles; Immune response; Angiogenesis

1000-4718(2011)04-0817-06

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.04.039

2010-07-19

2010-11-30

△通訊作者 Tel:023-68765316; E-mail: xiongwei64@126.com