KLF4蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

陳 濤 謝黎明

（南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南 衡陽 421001）

結(jié)腸癌是常見的消化道腫瘤之一，隨著人民生活方式、飲食結(jié)構(gòu)的改變，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，此趨勢(shì)在大中城市較明顯。據(jù)我國(guó)統(tǒng)計(jì)資料估計(jì)，我國(guó)2005年結(jié)腸癌發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)分別達(dá)17.2萬和9.9萬，嚴(yán)重影響人類健康。要治愈和預(yù)防結(jié)腸癌的發(fā)生，關(guān)鍵問題是了解結(jié)腸的病因及其發(fā)病機(jī)制[1]。KLF家族（krüppel-1ike factors）是真核生物中廣泛存在的一類基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄元件結(jié)合蛋白（BTEB），KLF4是該家族的一名重要分子[2]。本研究采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)KLF4在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá)，探討KLF4與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，為進(jìn)一步闡明結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

收集南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2010至2011年間結(jié)腸癌切除標(biāo)本58例，患者術(shù)前均未接受化療及放療。其中男性27例，女性31例；年齡41～79歲，年齡（54±9）歲，Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期21例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例。所有樣本均按照WHO結(jié)腸癌組織學(xué)分類及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。

1.2 試劑

所用鼠抗人KLF4單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa cruz公司，免疫組織化學(xué)SP 試劑盒及BAD顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μL 厚切片，SP免疫組織化學(xué)染色。所用抗KLF4抗體濃度為1∶50，染色步驟按說明書進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定

KLF4陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)染色強(qiáng)度和分布范圍進(jìn)行半定量處理，以如下標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)光鏡下觀察陽性染色的細(xì)胞比例（5個(gè)高倍視野下的均數(shù)） 分為：①陰性（-），染色細(xì)胞數(shù)少于10%；②陽性（+），染色細(xì)胞數(shù)在10%～50%；③強(qiáng)陽性（++），染色細(xì)胞數(shù)多于50%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 KLF4在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá)情況

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，58例結(jié)腸癌組織中KLF4表達(dá)陽性12例，陽性表達(dá)率為20.7%，58例癌旁正常組織中KLF4表達(dá)陽性44例，陽性表達(dá)率75.9%。二者比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 KLF4表達(dá)與的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

KLF4表達(dá)與結(jié)腸癌患者性別、年齡、大體類型之間無顯著相關(guān)（P＞0.05），KLF4在結(jié)腸癌不同的臨床分期中的表達(dá)分別是Ⅰ期4/9（44.4%），Ⅱ期4/13（30.8%），Ⅲ期2/15（13.3%），Ⅳ期2/21（9.5%），分別與癌旁對(duì)照組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；KLF4在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中陽性表達(dá)分別為2/17（11.8%），10/41（24.4%），二者比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討 論

KLF家族是真核生物中一大類基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子（BTEB）[2]，最早發(fā)現(xiàn)于果蠅胚胎中的發(fā)育調(diào)控因子Krüppel，具備羧基端三個(gè)串連的Cys2His2類型的鋅指結(jié)構(gòu)，負(fù)責(zé)結(jié)合靶基因富含Gc的啟動(dòng)子序列，促進(jìn)或抑制靶基因的表達(dá)，參與早期胚胎發(fā)育、癌癥形成以及血管形成及其病理發(fā)生，進(jìn)而影響細(xì)胞的各種代謝途徑。KLF4是典型的KLF因子參與的轉(zhuǎn)錄激活作用，在平滑肌細(xì)胞（SMC）分化過程中，KLF4可以抑制血清反應(yīng)因子的表達(dá)及其和SMC基因啟動(dòng)子的結(jié)合，進(jìn)而抑制SMC的分化，也可通過結(jié)合SMC細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白基因啟動(dòng)子中TCE元件來抑制SMC基因過表達(dá)，還可以促進(jìn)PDGF-BB的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)在癌變膀胱上皮細(xì)胞中，KLF4表達(dá)下調(diào)，而過表達(dá)KLF4后，癌變膀胱上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)被抑制，說明KLF4的表達(dá)下調(diào)和膀胱癌的發(fā)生相關(guān)[3]。

本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)KLF4在結(jié)腸癌和癌旁組織中的表達(dá)水平變化，以及KLF4表達(dá)與結(jié)腸癌的臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。結(jié)果表明，KLF4在結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)率達(dá)20.7%，而在相應(yīng)癌旁對(duì)照組織中陽性表達(dá)率為75.9% （P＜0.01），隨著結(jié)腸癌的臨床分期演進(jìn)KLF4表達(dá)逐漸降低，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的KLF4表達(dá)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。提示KLF4可能作為腫瘤抑癌基因參與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展，與結(jié)腸癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能成為結(jié)腸癌潛在的治療靶點(diǎn)和預(yù)后判斷提供了更有力的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

[1]廖前進(jìn),蘇堅(jiān),何潔,等.二烯丙基二硫?qū)θ私Y(jié)腸癌SW480細(xì)胞周期的阻滯作用[J].癌癥,2009,28(2):138-41.

[2]Yang HW,Xia T,Chen ZL,et al.Cloning,chromosomal localization and expression patterns of porcine Kruppel-like factors 4,-5,-7 and the early growth response factor 2[J].Biotechnol Lett,2007.29(1):157-163.

[3]Ohnishi S,Ohnami S,Laub F,et al.Downregulation and growth inhibitory effect of epithelial-type Kruppel-like transcription factor KLF4,but not KLF5,in bladder cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2003,308(2):251-256.