初生幼犬的免疫機(jī)理及人工主動(dòng)免疫方法

(浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310029)

動(dòng)物免疫，狹義上講是動(dòng)物抵御(傳染性)疾病的能力；廣義上講是動(dòng)物機(jī)體對(duì)自身和非自身的識(shí)別，并排除非自身的大分子物質(zhì)，從而保持機(jī)體內(nèi)、外環(huán)境平衡的生理性反應(yīng)。具體包括三方面的功能：免疫防御、自身穩(wěn)定和免疫監(jiān)視。

1 幼犬免疫機(jī)理

新生幼犬通過(guò)初乳獲得被動(dòng)免疫。幼犬在出生時(shí)免疫系統(tǒng)尚未完善，是后來(lái)逐步發(fā)展起來(lái)的。LewisL曾對(duì)6周齡幼犬試驗(yàn)性接種牛血清白蛋白，僅有2/6幼犬產(chǎn)生很弱的免疫應(yīng)答，表明幼犬免疫系統(tǒng)尚未完善。新生幼犬需要較高劑量的抗原刺激才能產(chǎn)生抗體，且產(chǎn)生的抗體主要是IgM而不是IgG。

1．1抗體來(lái)源 幼犬出生時(shí)由于尚無(wú)健全的免疫系統(tǒng)，如果新生幼犬又得不到母犬提供的保護(hù)，則非常容易感染外界的各種傳染病。在犬科動(dòng)物中，這種保護(hù)大部分是產(chǎn)后獲得的，由胎盤(pán)轉(zhuǎn)移而來(lái)的免疫球蛋白僅只5%～10%，其余都是通過(guò)初乳獲得的。初乳中不僅含有供幼犬生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而且還含有抗體和能防止發(fā)生早期感染的某些因子，母犬在分娩時(shí)，初乳中免疫球蛋白含量高達(dá)15 mg/mL，而分娩2 d后母犬奶中的免疫球蛋白含量就會(huì)下降到2～3 mg/mL。初乳中80%是IgG、20%是IgA，該比例隨著時(shí)間改變而改變，在第1周泌乳期結(jié)束時(shí)，奶中大于80%的免疫球蛋白是IgA，其余是IgG和IgM。IgA和IgM主要是在乳腺中產(chǎn)生的，而IgG僅在乳腺中產(chǎn)生一小部分，大部分可能來(lái)自血清。

1.2胞飲吸收 至今仍未充分了解新生動(dòng)物是如何從腸道完整地吸收免疫球蛋白的。免疫球蛋白是從小腸通過(guò)胞飲方式吸收的，并有嚴(yán)格的時(shí)間限制。幼犬出生后24 h腸道幾乎完全封閉，已證明在腸道發(fā)生的免疫球蛋白轉(zhuǎn)移最高峰是在生后8h，15 h后幾乎全部完成。

血清給予的時(shí)間也一樣，因?yàn)樵谌占Z中的蛋白質(zhì)會(huì)導(dǎo)致早期的腸道封閉，已證明幼犬對(duì)免疫球蛋白的吸收從出生時(shí)就開(kāi)始了，在8 h時(shí)達(dá)到高峰，超過(guò)24-48 h就基本上封閉了，對(duì)于提高血清中免疫球蛋白濃度來(lái)說(shuō)，在生后8 h通過(guò)胃管給予免疫血清可能是最有效的途徑。皮下注射給予血清的最佳時(shí)間尚不清楚。

不管腸道吸收免疫球蛋白的機(jī)理如何，新生幼犬的存活率與其免疫球蛋白的獲得量有著密切關(guān)系。因此，建議診斷被動(dòng)免疫失敗原因時(shí)應(yīng)充分考慮血清中原免疫球蛋白的濃度高低。

1.3被動(dòng)免疫方法 被動(dòng)免疫不僅僅是指初乳的轉(zhuǎn)移，其涉及的范圍更大，或者說(shuō)具有更廣的含義。許多專(zhuān)家都贊成和推薦對(duì)不能獲得初乳的幼犬推薦使用血清，血清能通過(guò)胃管、口腔或皮下、肌內(nèi)、腹腔注射等方式轉(zhuǎn)移給幼犬。

對(duì)于轉(zhuǎn)移給幼犬血清的劑量：Creene推薦24 mL/kg。Ellen M研究表明對(duì)幼犬即使按照22 mL/kg的量給予成年犬血清，與母犬喂養(yǎng)的幼犬體內(nèi)免疫球蛋白含量相比，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的增高。而母犬初乳中的免疫球蛋白含量在分娩時(shí)為15 mg/mL，分娩后第2 d為2～3 mg/mL。

免疫球蛋白的轉(zhuǎn)移途徑：Ellen研究表明，通過(guò)皮下注射給予不能獲得初乳的幼犬血清，幼犬體內(nèi)血清中的IgM濃度要明顯高于哺吮初乳犬和通過(guò)胃管補(bǔ)給血清犬。因此，如果希望得到IgM，以皮下注射途徑最為理想。IgM抗體被認(rèn)為以防止膿毒敗血癥最有效，然而因IgG是初乳中的主要免疫球蛋白，IgM僅占一小部分，因此可以認(rèn)為IgM可能是保護(hù)幼犬效率最高的抗體。Greene也推薦使用口服或皮下、肌內(nèi)、腹腔注射血清方法對(duì)不能獲得初乳的幼犬進(jìn)行被動(dòng)免疫，皮下注射與腹腔注射效果基本相似。通過(guò)靜脈途徑給予幼犬注射血清雖然未經(jīng)試驗(yàn)，但從理論上講應(yīng)該是可行的。

初乳中免疫球蛋白的濃度與母源抗體成正相關(guān)，一般情況下，母犬體內(nèi)的免疫球蛋白濃度低，則幼犬體內(nèi)的免疫球蛋白濃度也低，特異性抗體也是如此。同窩犬?dāng)?shù)較少的仔犬其生長(zhǎng)發(fā)育較快，疾病抵抗力較強(qiáng)；而同窩犬?dāng)?shù)較多的仔犬其生長(zhǎng)發(fā)育較慢，對(duì)疾病的抵抗力較差。另外，同一母犬不同乳腺組織中的免疫球蛋白含量也完全不同，母犬母性的優(yōu)劣和本性，以及幼犬吸吮能力和本性，也會(huì)影響其吸收免疫球蛋白量，同窩仔犬的血清球蛋白量也會(huì)因吮食初乳量不同而高低不一。

1．4被動(dòng)免疫抗體的半衰期 免疫球蛋白的濃度與傳染病的易感性成負(fù)相關(guān)。被動(dòng)免疫抗體對(duì)特定傳染病的抵抗力肯定是重要的，這種抵抗力可通過(guò)已建立的診斷來(lái)檢測(cè)抗體含量，據(jù)報(bào)道犬瘟熱抗體的半衰期為8．4 d，對(duì)犬來(lái)說(shuō)這種被動(dòng)免疫抗體的半衰期約為9 d，這樣人們就可根據(jù)轉(zhuǎn)移的初乳效價(jià)、血清效價(jià)、母犬血清效價(jià)或幼犬體內(nèi)抗體效價(jià)之一，來(lái)推測(cè)抗體的下降情況，等到幼犬體內(nèi)的抗體效價(jià)降至不影響主動(dòng)免疫尚能抵御各種傳染病的感染時(shí)，就可進(jìn)行主動(dòng)免疫。近年來(lái)，犬的各種傳染病流行十分嚴(yán)重，母犬沒(méi)有經(jīng)過(guò)強(qiáng)化免疫或即使進(jìn)行免疫由于疫苗質(zhì)量等因素，都會(huì)影響母犬的抗體效價(jià)，由于幼犬免疫系統(tǒng)的不成熟決定了幼犬必須要在6-8周齡時(shí)才能對(duì)其實(shí)行主動(dòng)免疫，而對(duì)這一階段的免疫單靠初乳往往解決不了，所以轉(zhuǎn)移血清是一種最容易、最簡(jiǎn)便和切實(shí)可行的被動(dòng)免疫途徑。

2 犬的人工主動(dòng)免疫

隨著犬的生長(zhǎng)，母源抗體在體內(nèi)逐漸衰減，必須進(jìn)行人工免疫以保證體內(nèi)免疫抗體，即主動(dòng)物免疫。

2．1免疫時(shí)間 綜上所述，幼犬6周齡時(shí)免疫系統(tǒng)才開(kāi)始出現(xiàn)成熟化，到8周齡時(shí)才基本完善。有人曾對(duì)小獵兔犬的胸腺進(jìn)行了解剖，其出生時(shí)的胸腺大約為100 mg，到12周齡時(shí)可增加到300 mg以上。因此，過(guò)早進(jìn)行人工免疫，即6周齡前進(jìn)行免疫其實(shí)用意義不大。一般于6-8周齡時(shí)進(jìn)行首次免疫才具有意義，但此時(shí)由于母源抗體的干擾和免疫系統(tǒng)的不完善等因素的影響，其抗體產(chǎn)生的量仍會(huì)受到限制，應(yīng)在2周左右之后立即進(jìn)行二次免疫。有人指出，為了提高免疫效果，應(yīng)在母源抗體滴度低于10x時(shí)(一般在8周齡后)進(jìn)行免疫接種最為適宜。

由于2月齡以?xún)?nèi)幼犬首次免疫的可變系數(shù)很大，且新生犬初次免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的抗體幾乎全是IgM類(lèi)，成年犬產(chǎn)生的抗體則為IgM和IgG，這兩種免疫球蛋白的數(shù)量與初生犬的IgM幾乎相等。新生犬在再次反應(yīng)中才合成IgG和IgM。因此，新生犬第1年必須進(jìn)行三次免疫，可以將首次免疫看作為補(bǔ)充免疫，后兩次為正常免疫。至于正常免疫的兩次間隔，以多長(zhǎng)時(shí)間為好，有研究者認(rèn)為以3-4周最為合適，其抗體效價(jià)超過(guò)間隔2周或半年的方式。

2．2免疫失敗的原因分析

2.2.1母源抗體因素 母源抗體對(duì)預(yù)防仔犬早期感染是有益的，但也是干擾免疫的最常見(jiàn)因素。

2.2.2遺傳性和獲得性免疫缺陷因素 犬在體液免疫和細(xì)胞免疫兩方面的缺陷，往往導(dǎo)致疫苗注射后達(dá)不到應(yīng)有的保護(hù)或免疫后發(fā)生并發(fā)癥。特別是一些獲得性免疫缺陷性疾病，如犬瘟熱、犬細(xì)小病毒等均可引起免疫抑制。犬瘟熱病毒有破壞脾臟、淋巴結(jié)和骨髓中淋巴組織的作用，犬細(xì)小病毒對(duì)骨髓和淋巴系統(tǒng)有親合性，具有部分的持續(xù)性免疫抑制。

2.2.3疫苗因素 疫苗中毒株差異，如國(guó)外進(jìn)口的疫苗與國(guó)內(nèi)同種疾病在毒株上的差異。疫苗中的病毒顆粒少，即病毒效價(jià)偏低。 疫苗免疫原性較差，毒株馴化不良等均可影響免疫效果。

此外，貯存、運(yùn)輸和使用過(guò)程中方法不當(dāng)也會(huì)使疫苗效價(jià)下降。

2.2.4疾病因素 體溫：體溫偏高時(shí)，注射疫苗可引起臨床癥狀。一般認(rèn)為，體溫較高能抑制弱毒的繁殖。體溫過(guò)低能抑制細(xì)胞免疫系統(tǒng)和影響抗體的產(chǎn)生。體內(nèi)外寄生蟲(chóng)：一般認(rèn)為是一種復(fù)雜的應(yīng)激因素，近年來(lái)已證明至少某些寄生蟲(chóng)感染，如犬蠕形螨可能是直接的免疫抑制物。

2.2.5藥物干擾 左旋咪唑：是一種免疫調(diào)節(jié)劑，低劑量(3 mg以下/kg體重)可增強(qiáng)免疫；劑量達(dá)到15 mg/kg體重時(shí)往往會(huì)造成免疫抑制。 接種疫苗前使用免疫抑制性藥物；如甲砜霉素、氟苯尼考、磺胺類(lèi)藥物和四環(huán)素等；一些激素類(lèi)藥物如腎上腺皮質(zhì)激素、地塞米松；退熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物如安乃近、安基比林等均可影響疫苗的免疫效果。 同時(shí)使用血清或抗體：會(huì)發(fā)生免疫抗原、抗體的中和反應(yīng)，產(chǎn)生免疫干擾。

2.2.6生理環(huán)境 如過(guò)度擁擠的犬舍、運(yùn)輸和環(huán)境變更，溫度和濕度改變，妊娠和疲勞等都可能抑制疫苗接種的免疫應(yīng)答。

2.2.7營(yíng)養(yǎng) 一般認(rèn)為蛋白質(zhì)缺乏、嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良、維生素E和硒缺乏常會(huì)影響免疫效果。