兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型的建立與觀察△

黃文麗 蔣永祥 呂志剛

·基礎(chǔ)研究·

兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型的建立與觀察△

黃文麗 蔣永祥＊呂志剛

目的建立一種微創(chuàng)、安全、有效、快速的兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型，為更高要求的實驗作準備。方法新西蘭大白兔11只(22只眼)，行雙眼超聲乳化術(shù)，分別于術(shù)后1 d、3 d、1周、2周和術(shù)后1、2、3個月對術(shù)眼進行裂隙燈顯微鏡及組織病理學(xué)檢查,觀察兔眼前、后節(jié)反應(yīng)，后囊膜混濁形成時間、部位、發(fā)展過程及組織形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果后囊膜混濁由周邊部向中央?yún)^(qū)發(fā)展，伴Elschnig小體和晶狀體纖維生成,其程度隨時間推移日漸加重；術(shù)后3個月均出現(xiàn)不同程度的后囊膜混濁。結(jié)論成功建立兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型，可為更高要求研究后囊膜混濁的實驗做準備。(中國眼耳鼻喉科雜志，2011，11：13-15)

超聲乳化； 后囊膜混濁； 白內(nèi)障

后囊膜混濁是白內(nèi)障現(xiàn)代囊外和超聲乳化摘出術(shù)后影響視功能的主要并發(fā)癥之一[1]，目前臨床上尚無確切的預(yù)防方法。因此，后囊膜混濁形成機制及其預(yù)防仍將受到足夠的重視。動物后囊膜混濁模型是在體觀察后囊膜混濁藥物、激光、手術(shù)治療效果的實驗載體，其優(yōu)劣直接影響到結(jié)果的準確性。為建立一種能與臨床主流手術(shù)相匹配的后囊膜混濁模型，我們采用兔2.6 mm透明角膜切口晶狀體超聲乳化摘出術(shù)建立后囊膜混濁模型，以期為更高要求研究后囊膜混濁的實驗做準備。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和試劑 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供的5～8月齡的體重2.5～3.5 kg新西蘭大白兔，雌雄兼用，晶狀體透明，眼前段及眼底檢查正常。麻醉用鹽酸奧布卡因滴眼液購自日本參天株式會社，氯胺酮和氯丙嗪分別購自江蘇恒瑞制藥有限公司和上海禾豐制藥有限公司。sovereign超聲乳化儀為美國AMO公司生產(chǎn)。

1.2 兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型建立 新西蘭大白兔11只(22只眼)，復(fù)方托吡卡胺滴眼液充分擴瞳，氯丙嗪、氯胺酮混合液(體積比1∶3)肌內(nèi)注射(1.5 mL/kg)行全身麻醉[2]，鹽酸奧布卡因滴眼液行表面麻醉。開瞼器開瞼，11：00處2.6 mm透明角膜切口，注入醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉。行連續(xù)環(huán)形撕囊，直徑4～5 mm，水分離，超聲乳化吸除晶狀體核，超聲能量30%～40%，負壓260～280 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa),流量28 mL/min，超聲時間為(13.27±3.21)s。抽吸去除殘余皮質(zhì)，負壓350～360 mm Hg[3]，切口縫合達水密。結(jié)膜下注射地塞米松2 mg，1%阿托品眼膏涂眼。

1.3 術(shù)后處理 術(shù)后術(shù)眼每天用妥布霉素地塞米松滴眼液3次和1%阿托品滴眼液滴眼1次，共用2 周。術(shù)后第1、3、7、14天檢查術(shù)眼的傷口、角膜、虹膜及前房的情況。術(shù)后第1、2、3個月擴瞳后在裂隙燈和檢眼鏡下檢查后囊膜混濁情況，并行裂隙燈后囊膜照相。術(shù)前和術(shù)后3個月用日本NIDEK公司US-1800眼科超聲診斷儀眼軸測量和NIDEK公司OPD-scan角膜地形圖儀角膜曲率測量，以3次測量的平均值記錄。術(shù)后3個月從兔耳緣靜脈注射空氣處死動物，迅速摘除眼球，用10%甲醛溶液固定眼球48 h后取材，火棉膠石蠟雙重包埋、切片、常規(guī)蘇木素-伊紅(hematoxylin eosin,HE)染色，光鏡觀察晶狀體后囊膜、角膜、視網(wǎng)膜組織。

1.4 后囊膜混濁分級標準 根據(jù)Hayashi等[4]用裂隙燈評分法對后囊膜混濁進行分級:0 級,后囊膜無混濁；1級,后囊膜輕度混濁,眼底能看清；2 級,后囊膜中度混濁,眼底部分模糊不清；3 級,后囊膜明顯混濁,眼底不能窺見或周邊部環(huán)狀皮質(zhì)增生。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用STATA8.0統(tǒng)計軟件行配對設(shè)計資料t檢驗，以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后眼前節(jié)反應(yīng) 術(shù)后第1天大部分術(shù)眼睜眼輕度受限，裂隙燈檢查見角膜緣切口處局部睫狀充血輕微，切口處角膜輕度水腫，前房Tyndall(+～++)，有少許纖維素滲出。術(shù)后第2天大部分術(shù)眼睜眼如常，前房反應(yīng)減輕。至第3～4天前房纖維素滲出吸收，切口水腫逐漸消退。術(shù)后第7～10天眼前節(jié)基本無明顯手術(shù)反應(yīng)。

2.2 角膜曲率及眼軸變化 22只眼術(shù)前角膜平均曲率為(46.58±0.87)D，術(shù)后3個月為(46.63±0.79)D，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.539 2,Pgt;0.05)；術(shù)前眼軸為(16.43±0.71)mm，術(shù)后3個月為(16.56±0.77)mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-1.223 8,Pgt;0.05)。

2.3 后囊膜混濁分級 造模術(shù)后1個月0級后囊膜混濁10只眼，1級后囊膜混濁7只眼，2級5只眼，3級0只眼；術(shù)后2個月0級后囊膜混濁0只眼，1級后囊膜混濁13只眼，2級7只眼，3級2只眼；術(shù)后3個月術(shù)眼不同程度后囊膜混濁較前加重，1級后囊膜混濁5只眼，2級13只眼，3級4只眼(附3頁圖①)。

2.4 病理學(xué)檢查 大體標本見后囊膜Soemmering環(huán)和纖維化混濁(附3頁圖②)。組織病理學(xué)檢查經(jīng)HE染色，光鏡下可見中央后囊膜少量晶狀體上皮細胞增殖及纖維化形成；近赤道部后囊膜有較多晶狀體上皮細胞增殖及再生皮質(zhì)形成(附3頁圖③)。

3 討論

晶狀體后囊膜混濁是白內(nèi)障摘出人工晶狀體植入術(shù)后最常見的并發(fā)癥之一，亦是白內(nèi)障患者術(shù)后視力下降的主要原因，兒童患者發(fā)病率幾乎為100%[5-7]。隨著手術(shù)技巧的逐步提高和人工晶狀體設(shè)計的完善，白內(nèi)障摘出聯(lián)合人工晶狀體植入術(shù)后，后囊膜混濁(又稱后發(fā)性白內(nèi)障)的發(fā)生率逐漸下降，但它仍然是患者遠期視力下降和再失明的主要原因之一，同時未來人工晶狀體發(fā)展的趨勢——注入式人工晶狀體植入，由于后囊膜必須完整保留[8]，故后囊膜混濁的預(yù)防仍是值得深入研究且須亟待解決的問題。

研究后囊膜混濁發(fā)生機制和防治方法的實驗?zāi)Ｐ陀畜w外培養(yǎng)及在體動物模型兩種。前者包括晶狀體上皮細胞和晶狀體囊袋的體外培養(yǎng)，雖然培養(yǎng)液可滿足晶狀體上皮細胞生長、增生的需要,但體外環(huán)境與在體環(huán)境的差異必然會對晶狀體上皮細胞的生長和生物學(xué)特性造成一定影響,比如晶狀體上皮細胞雖然可在體外培養(yǎng)液中增生,卻不能形成Seomerring環(huán)或Elschnig珍珠小體等臨床常見后囊膜混濁表現(xiàn)形式。目前,在體動物模型使用最為廣泛的是新西蘭大白兔,其次有貓、狗等[9]。

良好的在體后囊膜混濁模型可為后囊膜混濁相關(guān)研究提供依據(jù)。既往后囊膜混濁模型往往采用晶狀體囊外摘出方法[10]，優(yōu)點是不需特殊的儀器和設(shè)備，缺點是手術(shù)用時太長，術(shù)后反應(yīng)大，不利于大批的模型制作。因此，與高標準的實驗要求有一定距離。目前，臨床上白內(nèi)障手術(shù)90%以上是晶狀體超聲乳化摘出手術(shù)，為制作與之匹配的后囊膜混濁模型，我們應(yīng)用了主流的2.6 mm透明角膜切口晶狀體超聲乳化術(shù)。使用美國AMO公司生產(chǎn)sovereign超聲乳化儀，參數(shù)設(shè)置：超聲能量30%～40%，負壓260～280 mm Hg,流量28 mL/min，超聲時間為(13.27±3.21)s，皮質(zhì)抽吸負壓350～360 mm Hg。兔眼的晶狀體雖是透明，但較黏，使用此參數(shù)足以乳化晶狀體核并吸盡殘余皮質(zhì)，最大限度保證造模的可重復(fù)性和準確性。術(shù)后不同時間點對術(shù)眼進行裂隙燈顯微鏡和組織病理學(xué)檢查顯示,所有兔眼術(shù)后均發(fā)生臨床顯著性后囊膜混濁,其程度隨著時間推移而逐漸加重；而2.6 mm透明角膜小切口手術(shù)使手術(shù)前后的角膜曲率和眼軸比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明手術(shù)本身創(chuàng)傷小、穩(wěn)定性好。

由于每個個體后囊膜混濁出現(xiàn)的時間和程度不盡相同，因此，手術(shù)時應(yīng)盡可能保持相對一致。操作要點是：①由于兔鞏膜硬度系數(shù)低，手術(shù)后透明角膜切口要縫合一針，否則前房形成不易；②兔為球形晶狀體，前房相對較淺，操作要謹慎，以免損傷眼內(nèi)其他組織，致術(shù)后反應(yīng)大；③兔晶狀體懸韌帶張力較高，起始中央環(huán)形撕囊口徑易小，4 mm較合適，否則易形成放射狀撕裂；④兔晶狀體為軟核，手術(shù)時充分水分離較為重要，便于快速去除晶狀體核。皮質(zhì)盡可能吸盡，以便使后囊膜混濁出現(xiàn)時間較為一致。

實驗證明，2.6 mm透明角膜切口晶狀體超聲乳化摘出術(shù)術(shù)后囊膜混濁模型制作用時短，僅5～6 min一例；術(shù)后反應(yīng)小，2～3個月術(shù)后均能形成后囊膜混濁。缺點是需要使用超聲乳化儀器和相關(guān)器械，手術(shù)成本較高。但不失為一種較好的、可為較高要求實驗使用的兔后囊膜混濁模型制作方法。

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2010-10-20)

(本文編輯 諸靜英)

讀者·作者·編者

關(guān)于中英文摘要的寫作要求

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1 標題：應(yīng)簡潔、明了，不要用“A study on …”,“A survey of …”等開頭；去掉開頭的“The”,“A”等。已得到整個科技界或本行業(yè)科技人員公認的縮略詞語，才可用于標題中，否則不要輕易使用。

2 署名：中國人名按漢語拼音拼寫。姓氏全部字母要大寫，名字僅第1個字母大寫，名字的兩個詞間加連字符。仔細核對拼寫。應(yīng)列出全部作者姓名。

3 單位：單位名稱要寫全(從小到大)，后面為“城市名 郵政編碼”，最后是“China”，如Eye Ear Nose and Throat Hospital, Fudan University, Shanghai 200031, China。只寫第一作者單位。新近改變歸屬的醫(yī)學(xué)院校名稱，要寫該院校新的寫法。解放軍編號醫(yī)院名稱的寫法為：No.XXX Hospital of People′s Liberation Army。通訊作者(Corresponding author)一般需提供Email。

4 目的：一般用動詞不定式短語“To…”即可。一般不需要進行背景介紹。注意不可與標題重復(fù)。

5 方法：應(yīng)當用完整的句子。用第三人稱，即不能有“We…”，“Our…”等，可改為“The authors…”。盡可能說明各組研究對象的基本情況，如例數(shù)及分組用的編號或名稱。

6 結(jié)果：直接寫出結(jié)果。數(shù)據(jù)要與中文摘要一致，特別注意“比較”和“相關(guān)”等的表達方法，表達“……與……相關(guān)”一定要用“…correlated with…”，并且應(yīng)在括號內(nèi)提供相關(guān)系數(shù)r(注意不是γ)及其P值。

7 結(jié)論：不需要說“These results demonstrated that…”，“Based on the above results we concluded that ……”，而是直接說結(jié)論。特別注意不要用“This study(These results) may provide some valuable theoretical and technical basis for…”之類無實際內(nèi)容的說法。

8 單位：句子中表述有單位的數(shù)據(jù)時應(yīng)力求簡潔，如不用“at a temperature of 250 ℃ to 300 ℃”，而用“at 250～300 ℃”；不用“at high pressure of 200 MPa to 250 MPa”，而用“at 200～250 MPa”等。

9 標點符號：英文中絕對不應(yīng)出現(xiàn)中文專用的標點符號，如頓號(、)、句號(。)、書名號(《》)等。

10 縮寫詞：除規(guī)定不需要注明全文者，一律在第1次出現(xiàn)時注明全文。如在下文中不再出現(xiàn)，一般不要寫出縮寫。

11 數(shù)字：一句話若一定要以數(shù)字開頭，應(yīng)該用數(shù)字的英文寫法，而不用阿拉伯數(shù)字表示。

12 時態(tài)：描述方法和結(jié)果時，應(yīng)當使用一般過去式。結(jié)論中，如果是被廣泛認可，已經(jīng)成為“真理”的可以使用一般現(xiàn)在時，否則一般采用過去時形式。

13 語態(tài)：原來主張科技論文中多使用被動語態(tài)，現(xiàn)在主張摘要中盡量用主動語態(tài)的越來越多，因其有助于文字清晰、簡潔及有力表達。但是盡量不要混用。

本刊編輯部

Establishmentandobservationofanimalmodelofposteriorcapsuleopacificationinrabbits

HUANGWen-li,JIANGYong-xiang＊,LüZhi-gang.DepartmentofOphthalmology,JinhuaCentralHospitalofZhejiangProvince,Jinhua321000,China

Corresponding author：JIANG Yong-xiang，Email: yongxiangjiang@ yahoo.com.cn

ObjectiveTo establish an animal model of posterior capsule opacification (PCO) with clear corneal tunnel phacoemulsification technique in rabbits.MethodsClear corneal tunnel phacoemulsifications were perfomed in 22 eyes of 11 New Zealand rabbits．The operative eyes were examined at 1 day, 3 days, 1 week, 2 weeks and 1 month, 2 months, 3 months postoperatively by slitlamp microscope and histopathological method respectively to observe the time, location, development and histomorphological changes of PCO formation.ResultsThe posterior capsule opacity developed from the periphery to the central area with Elschnig peals and lens fibers formation, the degree of which grew worse with the extension of time. PCO appeared in all eyes 3 months after the surgery．ConclusionsThe PCO animal model with clear corneal tunnel phacoemulsification technique was successfully established in rabbits. (Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2011,11:13-15)

Phacoemulsification； Posterior capsule opacification； Cataract

中國科學(xué)院金華科技園專項基金項目(2006-3-005)

浙江省金華市中心醫(yī)院眼科 金華 321000

＊復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院眼科 上海 200031

蔣永祥(Email: yongxiangjiang @yahoo.com.cn)