復(fù)合L-色氨酸發(fā)酵微生態(tài)制劑對(duì)土雞生長(zhǎng)性能和非特異性免疫的影響

吳毅芳 周常義 蘇文金 張志剛 蘇國(guó)成

隨著食品安全引起的社會(huì)問題被廣泛關(guān)注，人們健康安全意識(shí)的逐步提高，抗生素、促生長(zhǎng)素等與日常飲食息息相關(guān)的添加劑的生產(chǎn)和使用備受爭(zhēng)議。在這種情況下，對(duì)綠色畜禽產(chǎn)品的大量需求促進(jìn)了微生態(tài)制劑在畜禽養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用和相關(guān)新型制劑的開發(fā)生產(chǎn)。

本試驗(yàn)中使用的發(fā)酵制劑為復(fù)合L-色氨酸發(fā)酵微生態(tài)制劑，以枯草芽孢桿菌、多肽、蛋白酶、L-色氨酸、豆腐渣為主要成分，旨在實(shí)現(xiàn)豆腐渣、玉米漿等工業(yè)下腳料二次利用的同時(shí)，獲得既能平衡日糧氨基酸又具有益生效應(yīng)、生產(chǎn)成本較低的微生態(tài)制劑。本試驗(yàn)通過改變制劑在基礎(chǔ)日糧中的添加比例，考察該制劑對(duì)土雞生長(zhǎng)性能和非特異性免疫活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)合L-色氨酸發(fā)酵微生態(tài)制劑（本實(shí)驗(yàn)室制得）；基礎(chǔ)日糧（直接從飼料店購(gòu)得適合雛雞食用的小雞飼料）；雞苗（從雞苗場(chǎng)購(gòu)得1日齡土雞120羽）；溶菌酶檢測(cè)試劑盒（南京建成公司購(gòu)得）；實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)制劑。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及飼喂方式

土雞苗分成4組，每組30羽。A組飼喂基礎(chǔ)日糧；B組飼喂95%的基礎(chǔ)日糧和5%發(fā)酵制劑混合物；C組飼喂90%的基礎(chǔ)日糧和10%發(fā)酵制劑混合物；D組飼喂85%的基礎(chǔ)日糧和15%發(fā)酵制劑混合物。

從2日齡開始在B、C、D 3組日糧中添加適量的發(fā)酵制劑直到7日齡，作為適應(yīng)期。

1.2.2 檢測(cè)方法

從7日齡開始對(duì)各組日糧按比例混合后飼喂，每日早晚飼喂兩次，每次飼喂時(shí)間為2 h，每日稱取各組日糧消耗量。8日齡、17日齡、27日齡時(shí)每組分別取樣6只進(jìn)行稱重、解剖試驗(yàn)。獲取各試驗(yàn)組的肝臟、小腸上段內(nèi)容物及糞便，對(duì)各組料肉比[1]、消化酶[2]、溶菌酶[3]、肝臟器官指數(shù)[4]、腸道及糞便中的大腸桿菌和乳酸桿菌[5]進(jìn)行比較。

1.2.3 測(cè)定指標(biāo)

1.2.3.1 料肉比

料肉比=每組飼料總消耗量/每組總增重量。

1.2.3.2 消化酶

消化酶主要針對(duì)腸道中蛋白酶和纖維素酶進(jìn)行檢測(cè)，取每個(gè)小腸上段內(nèi)容物0.5 g于50 ml離心管中，添加9.5 ml生理鹽水稀釋，置于37℃搖床150 r/min震蕩30 min后，參照Cüneyt Suzer[2]的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3.3 溶菌酶

詳見南京建成公司溶菌酶檢測(cè)試劑盒說明書。

1.2.3.4 肝臟器官指數(shù)

肝臟器官指數(shù)=肝臟重量/體重。

1.2.3.5 大腸桿菌及乳酸桿菌檢測(cè)

通過選擇性培養(yǎng)基（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和MC培養(yǎng)基）對(duì)以上兩種菌進(jìn)行活菌平板計(jì)數(shù)。小腸上段內(nèi)容物樣品以及糞便樣品的制法同1.2.3.2。

2 結(jié)果分析與討論

2.1 發(fā)酵制劑對(duì)土雞生產(chǎn)性能的影響（見表1）

表1 發(fā)酵制劑對(duì)土雞生產(chǎn)性能的影響

由表1可知，B、C、D 3個(gè)試驗(yàn)組的料肉比均比對(duì)照組A有所下降，階段二料肉比均與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。階段一即8日齡到17日齡，由于肉雞羽毛尚未發(fā)育完全，需要消耗較多的能量以維持體溫，另外戶外養(yǎng)殖期間氣溫較低等因素導(dǎo)致階段一料肉比較高。階段二即18日齡到27日齡，由于肉雞羽翼逐漸豐滿，維持體溫所需能量相對(duì)較少，試驗(yàn)組逐漸適應(yīng)添加了發(fā)酵制劑的日糧口味和養(yǎng)殖環(huán)境以及發(fā)酵制劑促進(jìn)消化吸收作用逐步凸顯等原因，3個(gè)試驗(yàn)組階段二的料肉比均較階段一有所減少，其中B組下降最為顯著，為10.7%。未添加發(fā)酵制劑的對(duì)照組階段二的料肉比比階段一提高了9%。27日齡時(shí)，B、C、D 3組料肉比分別相對(duì)A組下降了19.4%、16.1%和15.5%。理論上，發(fā)酵制劑促消化吸收能力與枯草芽孢桿菌、蛋白酶、多肽、L-色氨酸等營(yíng)養(yǎng)成分相關(guān)，階段一3個(gè)試驗(yàn)組的料肉比相對(duì)對(duì)照組有所下降，說明發(fā)酵制劑在促進(jìn)土雞消化吸收方面具有一定程度的滯后性。由此可推斷，蛋白酶、多肽、L-色氨酸等成分在提高日糧吸收利用率方面起一定的作用。但其后料肉比顯著降低，關(guān)鍵是由于枯草芽孢桿菌在腸道中的定植以及相關(guān)消化酶的分泌，促進(jìn)飼料中大分子的蛋白、纖維和脂肪在腸道中的再次分解和吸收，同時(shí)多肽促進(jìn)氨基酸吸收的協(xié)同作用進(jìn)一步提高了營(yíng)養(yǎng)成分的吸收率，從而導(dǎo)致料肉比的下降。

2.2 發(fā)酵制劑對(duì)土雞消化道能力的影響（見表2）

表2顯示在雛雞生長(zhǎng)的前27日齡，對(duì)照組腸道中的蛋白酶、纖維素酶酶活隨著日齡的增長(zhǎng)逐漸降低并趨于穩(wěn)定（總體上變化程度逐漸減小）。理論上該指標(biāo)將穩(wěn)定在一個(gè)適宜的水平直到生長(zhǎng)后期隨著動(dòng)物機(jī)能的衰退而進(jìn)一步降低。A組腸道蛋白酶活性27日齡時(shí)下降到8日齡36.6%，B、C、D 3組分別達(dá)到8日齡時(shí)的66.1%、79.6%、66.7%，蛋白酶的下降程度與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。其中B、C兩組的蛋白酶下降程度不及A組的50%。階段一中，蛋白酶和纖維素酶主要來源于日糧。表2中17日齡的纖維素酶和蛋白酶數(shù)據(jù)反映出3個(gè)試驗(yàn)組與對(duì)照組蛋白酶活性差異顯著，3個(gè)試驗(yàn)組蛋白酶降低程度不及對(duì)照組，說明日糧中的蛋白酶在胃酸性環(huán)境下具有一定程度的穩(wěn)定性，即通過胃消化酶的作用后仍具有活性，有效增加腸道中蛋白酶作用效果，促進(jìn)未完全分解的蛋白物質(zhì)的消化吸收。階段二中3個(gè)試驗(yàn)組的蛋白酶主要來自定植于腸道中的枯草芽孢桿菌的分泌和日糧供給。A、B、C、D 4組27日齡時(shí)纖維素酶活性分別是8日齡的42.9%、113.9%、90.7%和64.2%。階段二纖維素酶來自于定植后的枯草芽孢桿菌的分泌以及日糧的補(bǔ)充，導(dǎo)致B、C兩組纖維素酶活性有所提高，前者對(duì)纖維素酶活性的提高具有關(guān)鍵作用。D組纖維素酶和蛋白酶活性的下降，可能由于添加發(fā)酵制劑含量過高，一定程度上改變了蛋白質(zhì)、纖維素等營(yíng)養(yǎng)成分的平衡，纖維素?cái)z取量比對(duì)照組有所下降并超過某一臨界點(diǎn)導(dǎo)致了D組纖維素酶活性整體偏低。

表2 發(fā)酵制劑對(duì)土雞腸道消化能力的影響（U/g）

2.3 發(fā)酵制劑對(duì)土雞非特異免疫活性的影響（見表3）

表3 發(fā)酵制劑對(duì)土雞非特異免疫活性的影響

本試驗(yàn)中考察非特異性免疫力指標(biāo)為血清中溶菌酶含量和肝臟指數(shù)。表3中，對(duì)照組溶菌酶含量隨日齡的增加不斷提高，17日齡時(shí)各組溶菌酶含量分別達(dá)到8日齡的3.92倍、4.54倍、4.66倍和4.25倍，試驗(yàn)組和對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。27日齡時(shí)各組溶菌酶含量分別達(dá)到8日齡的4.25倍、4.64倍、4.67倍和4.61倍，試驗(yàn)組與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。由此推測(cè)，發(fā)酵制劑的添加可提前激活機(jī)體非特異性免疫活性，使機(jī)體溶菌酶含量迅速達(dá)到穩(wěn)定閾值。表3中免疫器官指數(shù)即肝臟指數(shù)則隨日齡的增加不斷下降，27日齡時(shí)各組免疫器官指數(shù)分別為8日齡的65.7%、67.6%、70.5%和74.7%，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。綜上所述，試驗(yàn)組的非特異性免疫活性高于對(duì)照組，證明該發(fā)酵制劑有利于提高機(jī)體非特異性免疫力，可一定程度上促進(jìn)機(jī)體非特異性免疫力提前達(dá)到穩(wěn)定閾值。由階段一與階段二溶菌酶活性及免疫器官指數(shù)的變化程度可推測(cè)發(fā)酵制劑中的多肽是提高非特異性免疫的有效成分。多肽與枯草芽孢桿菌均能提高機(jī)體免疫力，但二者作用機(jī)理不同。目前關(guān)于二者作用機(jī)理的研究和探討還處于初步階段，未有成熟的理論體系和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證說明。多肽對(duì)于免疫力的提高作用可能與其參與體液循環(huán)有關(guān)，階段一由于雛雞個(gè)體較小，血液流量小，從日糧中吸收的多肽相對(duì)濃度較高，一定程度上加快了機(jī)體免疫力提高的速度。

2.4 發(fā)酵制劑對(duì)土雞腸道微生物菌群的影響（見表4）

表4 發(fā)酵制劑對(duì)土雞腸道微生物菌群的影響（×105CFU/g）

由表4可知，腸道中的大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量隨日齡的增加逐漸減少。這可能與腸道長(zhǎng)度和質(zhì)量的增加有關(guān)，長(zhǎng)度的增長(zhǎng)使微生物的分布逐漸擴(kuò)散開，一定程度上降低了分布密度。另外，由于所取腸道為上段，接近胃部，隨著日齡的增長(zhǎng)，胃部和腸道上部消化能力的逐漸完善，腸道上端環(huán)境中存在的蛋白酶、酸堿消化液等均不利于微生物的生長(zhǎng)繁殖，故大腸桿菌和乳酸桿菌密度隨著日齡的增長(zhǎng)逐漸減小，理論上將趨于穩(wěn)定。糞便中的菌群首先來源于腸道，其次是空氣和環(huán)境。表4顯示糞便中的相關(guān)菌密度高于腸道上段，這是由于糞便中來自于腸道的菌群主要來自于腸道中段和下段，這些部位的菌密度由于腸道生存環(huán)境的改善而有所提高，高于腸上段菌群密度。表4中，試驗(yàn)組17 d、27 d B、C、D 3組的腸道和糞便中的大腸桿菌數(shù)均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05)，而乳酸桿菌數(shù)則顯著高于A組（P＜0.05）。兩種菌群數(shù)量變化主要由于腸道中氧氣的變化，即枯草芽孢桿菌的定植及其需氧特性，降低了腸道中的氧氣濃度，促進(jìn)了乳酸桿菌的生長(zhǎng)，同時(shí)抑制了大腸桿菌。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)考察了自制復(fù)合L-色氨酸微生態(tài)制劑對(duì)土雞生長(zhǎng)性能和非特異性免疫等生理活性的影響。通過試驗(yàn)既驗(yàn)證了復(fù)合L-色氨酸微生態(tài)制劑具有降低土雞料肉比、提高非特異性免疫、促進(jìn)腸道益生菌生長(zhǎng)等生理作用，也為該制劑日后生產(chǎn)實(shí)踐中粗蛋白、纖維素等相關(guān)比例的調(diào)整提供了依據(jù)，即粗蛋白濃度過高、纖維素濃度過低均可最終提高料肉比，降低經(jīng)濟(jì)效益。通過綜合比較，以添加5%制劑的混合日糧為最佳配方，該添加比例能平衡日糧中的氨基酸、顯著降低土雞的料肉比、提高非特異性免疫活性、有效促進(jìn)其腸道益生菌的生長(zhǎng)，滿足了微生態(tài)制劑對(duì)于提高生長(zhǎng)性能、提高經(jīng)濟(jì)效益的基本要求。今后可以其中L-色氨酸含量、多肽含量、枯草芽孢桿菌數(shù)為基準(zhǔn)，調(diào)整混合日糧中的粗蛋白、纖維素比例，以實(shí)現(xiàn)更高的經(jīng)濟(jì)效益。

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