幼鼠肝組織超氧化物歧化酶活性檢測

張中林, 鄭劍玲, 孫宏偉, 齊賀

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一類廣泛存在于機(jī)體內(nèi)的金屬抗氧化酶[1],其主要功能是特異性地催化超氧陰離子的歧化反應(yīng),清除細(xì)胞生命活動(dòng)中產(chǎn)生的超氧陰離子。SOD對(duì)防止活性氧(包括O2·和OH·兩種自由基)對(duì)機(jī)體的傷害、預(yù)防衰老、抗輻射損傷等有十分重要的作用。本研究以小鼠的肝組織勻漿液為實(shí)驗(yàn)材料,檢測不同鼠齡的肝組織SOD活力。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 按單雙號(hào)法隨機(jī)選取正常幼鼠(2月齡)、成年鼠(10月齡)和老齡鼠(18月齡)各 10只小鼠,雌雄各半,由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(SCXK(京)2004-0001)提供。

1.2 藥品與試劑 鄰苯三酚:白色粉末(甌?；ぴ噭S,批號(hào):880512);無水乙醇:分析純(沈陽第一試劑廠,批號(hào):980610);氯仿:分析純(天津化學(xué)試劑廠,批號(hào):090708)50 mmol/L;Tris-HCL緩沖液:pH 8.0。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 722s可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司制造,UV 755B);高速分散器(上海金達(dá)上生化儀器廠,XHF-1);離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠,LD4-2A);電熱恒溫三用水箱(北京永光明醫(yī)療儀器,HH-W 21)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 肝組織勻漿的制備 每組小鼠稱體質(zhì)量,用1%戊巴比妥進(jìn)行腹腔麻醉(0.4m L/100 g),開腹,取肝組織后用冷生理鹽水沖洗,用濾紙吸干外層水分。準(zhǔn)確稱取0.5 g肝組織,加入1∶9勻漿介質(zhì)(冷),用高速分散器8 000 rpm研磨0.5 min,勻漿液備用。

1.4.2 酶提取液的制備 肝組織勻漿液用離心機(jī)于3 000 rpm離心10 m in,棄去沉淀。取上清液2m L,再加適量氯仿,振混1 m in。再于 3 000 rpm離心10 min,上層則為酶提取液。按常規(guī)方法測定SOD活性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件分析處理,計(jì)量資料以 x±s表示,組間比較用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

幼鼠組肝組織SOD活性高于成年鼠組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。幼鼠組肝組織SOD酶活性高于老齡鼠組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。成年鼠組肝組織SOD酶活性與老齡鼠組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同鼠齡小鼠肝組織SOD活性的變化( x±s,n=10)

3 討論

SOD是生物體內(nèi)一種最重要的細(xì)胞保護(hù)酶,尤其表現(xiàn)為對(duì)氧自由基的清除上。SOD通過其優(yōu)先被氧化,或修復(fù)氧化引起的損傷而對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用。在正常機(jī)體內(nèi),SOD的主要功能就是歧化在體內(nèi)代謝產(chǎn)生的氧自由基,使之轉(zhuǎn)化為H 2O2及O2,以減輕氧自由基對(duì)細(xì)胞的損害。機(jī)體在正常的生化代謝中不斷產(chǎn)生自由基,可產(chǎn)生細(xì)胞毒害作用,引起細(xì)胞凋亡、衰老,同時(shí)機(jī)體自身也存在抗氧化系統(tǒng)及時(shí)清除自由基,維持體內(nèi)的平衡狀態(tài)。目前認(rèn)為,SOD能有效清除自由基,阻止脂質(zhì)過氧化,保護(hù)機(jī)體細(xì)胞免受損失[2]。

在正常生理?xiàng)l件下,動(dòng)物鼠的體內(nèi)自由基保持低濃度平衡狀態(tài)[3]。機(jī)體內(nèi)一方面不斷產(chǎn)生自由基,而另一方面同時(shí)有清除自由基的機(jī)制,使機(jī)體免受不良影響。如果一旦體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與平衡失調(diào),大量的自由基就會(huì)對(duì)機(jī)體造成不利影響,導(dǎo)致疾病的發(fā)生,加速生物的衰老。因此,清除自由基已成為提高機(jī)體生命質(zhì)量,防御機(jī)體衰老的一個(gè)非常重要的內(nèi)容[4,5]。

本研究顯示幼鼠組肝組織SOD活性高于成年鼠組和老齡鼠組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,0.01)。隨著幼鼠年齡增長,其肝組織SOD活力呈降低趨勢。但成年鼠組肝組織SOD活性與老齡鼠組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。不同年齡鼠的肝組織SOD活性比較未見文獻(xiàn)報(bào)道,有待于進(jìn)一步探討。

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