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    CB和CD在上皮性卵巢腫瘤中的表達及意義

    2011-02-07 09:11:44蔡東閣陳茜方曉荷
    當代醫(yī)學 2011年2期
    關(guān)鍵詞:性囊著色陽性細胞

    蔡東閣 陳茜 方曉荷

    組織蛋白酶是近年來發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白水解酶, 能夠直接降解或激活纖溶酶原激活劑及其它酶類而間接降解細胞外基質(zhì)成分,其活性高低可作為某些惡性腫瘤的預(yù)后指標[1]。本課題通過分析CB與CD在人類上皮性卵巢癌中的表達情況,探討兩者與上皮性卵巢癌惡性生物學行為的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    共收集2002年~2006年上皮性卵巢癌患者32例(漿液性囊腺癌20例,黏液性囊腺癌12例)作為研究對象,年齡21~72歲,術(shù)前均無化療、放療、免疫治療史及毒物、放射線、煙酒等危險因素接觸史,無傳染性肝炎、自身免疫性疾病史等其它合并癥。選擇同期接受手術(shù)治療的良性卵巢上皮性腫瘤9例(漿液性囊腺瘤5例,黏液性囊腺瘤4例)。并取同期手術(shù)中因其他良性疾病而切除的正常卵巢組織13例作為對照組,患者年齡19~73歲。

    1.2 免疫組化染色方法及結(jié)果判定

    表1 CB、CD表達與卵巢癌臨床病理特征間的關(guān)系

    兔抗人組織蛋白酶B單克隆抗體濃縮液,工作濃度1:200,購自武漢博士德生物工程有限公司。兔抗人組織蛋白酶D單克隆抗體濃縮液,工作濃度1:200,購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

    CB著色評估:CB陽性表達于卵巢上皮細胞,呈彌漫分布的棕黃色顆粒定位于細胞質(zhì)或位于核周。綜合染色強度和陽性細胞占總體細胞數(shù)的百分比進行半定量分析[2]?;静恢?分,著色淡1分,著色適中2分,著色深3分;著色細胞占計數(shù)細胞的百分率≤5%為0分,6%~25%為1分,26%~50%為2分,≥51%為3分。將每張切片平均著色程度得分與平均著色細胞百分率得分各自相乘為其最后得分,總分≥3分者為CB陽性表達;總分<3分者為CB陰性表達。CD為細胞漿和細胞膜染色,陽性判斷標準為:凡細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒為陽性,雙盲法隨機選5個高倍視野計算陽性細胞數(shù),陽性細胞>75%為(+++),評3分,>50%為(++),評2分,>25%為(+),評1分,<25%為(-)分,評0分。將0分和1分判斷為陰性表達,2分和3分判斷為陽性表達。用已知染色陽性的乳腺癌組織切片作陽性對照。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    SPSS11.5軟件分析,采用x2檢驗和Fisher 精確檢驗法。P<0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 CB及CD在正常卵巢組織及上皮性卵巢癌中的表達情況CB及CD染色陽性細胞分布于胞漿(圖1),兩者表達在卵巢癌組織中較正常卵巢組織中高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    2.2 CB、CD的表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系,見表1。

    CB、CD表達與患者年齡、病理學類型無明顯關(guān)系(P>0.05),在臨床分期晚、體內(nèi)有腹水或發(fā)生轉(zhuǎn)移病例中其表達增高,其間有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。組織學分化程度越低,CB與CD表達增高,有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

    圖1. CB及CD在上皮性卵巢癌中的表達A :The expression of CB in serous cystadenocarcinom a(10×10倍)B:The expression of CD in serous cystadenocarcinoma(10×20倍)

    3 討論

    浸潤、轉(zhuǎn)移是許多惡性腫瘤治療失敗和患者死亡的主要原因。腫瘤細胞通過組織屏障和進入血液及淋巴管的機制并不完全清楚。已有研究表明,腫瘤細胞的浸潤與轉(zhuǎn)移發(fā)生在基底膜降解的基礎(chǔ)上,穿過基底膜侵犯周圍組織,進入循環(huán)系統(tǒng)[3]。組織蛋白酶通常是指一類裂解肽鍵的蛋白水解酶,具有廣譜的蛋白水解活性,在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要的作用。

    CB廣泛存在于哺乳動物的各種組織中,與多種人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[4-5]。腫瘤細胞可分泌CB,并能夠激活酶原形成活性CB,在多種人類和動物的腫瘤中如宮頸癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等都發(fā)現(xiàn)CB表達水平和(或)活性高于鄰近正常組織[6-8]。另有研究證實,下調(diào)或沉默CB在惡性腫瘤細胞中的表達,腫瘤細胞的侵襲能力則大大減弱[9]。CD以天冬氨酰蛋白酶原的前體形式廣泛存在于人體細胞的溶酶體內(nèi),通過水解形成有催化活性的蛋白,在乳腺癌、肝癌、大腸癌患者中研究較多,并認為其與以上腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān),是較好的預(yù)后指標[10]。

    本研究結(jié)果顯示,CB和CD在正常卵巢中不表達,而在上皮性卵巢癌中呈高表達,提示CB和CD參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程。本研究還表明,兩者在卵巢癌組織中臨床分期越高、組織學分化程度越低其表達越強,在發(fā)生轉(zhuǎn)移及產(chǎn)生腹水組織中其表達程度亦增強,提示CB和CD參與了卵巢癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過程。已有證據(jù)表明CB和CD可能通過降解細胞外基質(zhì)蛋白,促進腫瘤新生血管的形成等參與了惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程[11]。CD除能直接降解ECM外,還可通過激活CB進一步降解ECM,促進腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。

    綜上所述,CB和CD 或許可作為上皮性卵巢癌的標志物,幫助預(yù)測腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移情況及患者的預(yù)后。且可針對其在上皮性卵巢癌中的作用特點,尋找其相應(yīng)的選擇性、可逆性抑制劑用于臨床疾病的治療,也是值得人們進一步探索的熱點。

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