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    局部化療對(duì)宮頸鱗癌組織中Bcl-2、Bax表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡的影響

    2011-02-07 09:11:42陳茜蔡?hào)|閣
    當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2011年2期
    關(guān)鍵詞:比值宮頸癌宮頸

    陳茜 蔡?hào)|閣

    宮頸癌是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,在我國(guó)婦女中發(fā)病率居高不下,并趨向年輕化,故對(duì)其治療方法提出了新的挑戰(zhàn)。放療不再是首選治療方法,隨之出現(xiàn)的新輔助化療越來(lái)越受到重視,尤其對(duì)于希望保留卵巢功能的年輕患者具有重要意義。宮頸是一個(gè)可暴露器官,容易直接治療和觀察,局部化療操作方便,不需麻醉,副作用輕,具有一定的優(yōu)越性。本研究通過(guò)檢測(cè)局部化療前后宮頸癌組織中凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá)及細(xì)胞凋亡的變化,初步探討局部化療的作用機(jī)制,為制定個(gè)體化治療方案和提高療效提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 臨床資料 選取2007年~2009年在我院住院治療的宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者40例,年齡平均45.17歲,所有患者按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期:Ⅱa期23例,Ⅱb期17例,病理分級(jí)鱗狀細(xì)胞癌Ⅱ級(jí)28例,Ⅲ級(jí)12例;均行廣泛性子宮切除加盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù);在手術(shù)前未曾接受放療及全身化療等其他輔助治療。其中治療組選取在手術(shù)前接受宮頸局部化療患者20例,對(duì)照組選取手術(shù)前未接受過(guò)任何輔助治療患者20例。

    1.2 方法

    1.2.1 宮頸癌病灶局部注射化療 將順鉑30~50mg加生理鹽水10m L稀釋,囑患者排空大小便后取膀胱截石位,用20m L注射器套長(zhǎng)7號(hào)針頭,將溶解后的適量順鉑在宮頸病灶周邊多點(diǎn)注射入腫瘤基底部。根據(jù)腫瘤大小決定注射針距,一般外生型穿刺深度為1~5cm,每點(diǎn)推注2~3m L;潰瘍型穿刺深度為0.3~1.0cm,每點(diǎn)推注1~2m L。依腫瘤退縮情況決定注射次數(shù),一般2~3次,最多5次,順鉑累計(jì)總量60~160mg。每3天一次,停藥一周后手術(shù)。

    1.2.2 Bcl-2、Bax表達(dá)的檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)S-P法。取同一患者手術(shù)切除的宮頸癌病灶組織及卵巢組織各一塊,置于10%甲醛溶液中固定,石蠟包埋,4~5μm厚連續(xù)切片。二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化,抗原熱修復(fù)。3%H2O2室溫20m in,10%正常山羊血清封閉,室溫孵育20m in,棄血清,滴加稀釋后的一抗(兩個(gè)抗體的稀釋度及來(lái)源),4℃過(guò)夜。37℃復(fù)溫1h,PBS沖洗。PBS沖洗,DAB顯色15m in。自來(lái)水充分沖洗,蘇木精復(fù)染,梯度乙醇脫水,透明,中性樹膠封片。

    表1 對(duì)照組與治療組Bcl-2、Bax的表達(dá)及bcl-2/bax比值Tab 1 Expressions of Bcl-2, Bax and the the ratio of Bcl-2 and Bax w ith and w ithout local chemotherapy

    1.2.3 細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率[1]。取患者手術(shù)切除新鮮宮頸癌癌灶及卵巢組織標(biāo)本,剪碎,加入胰酶2m L靜置5m in,加PBS液4m L,吹打。放入120目尼龍網(wǎng)過(guò)濾,濾液1000r/m in離心7~8m in。去上清,再加PBS液吹打,再次離心。加入PI(碘化丙啶)150μm L,4℃避光染色20m in后上機(jī)操作。

    1.3 結(jié)果判定

    1.3.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果判定 每標(biāo)本切片均隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(400倍),每視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,瘤細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判斷為陽(yáng)性。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比分級(jí):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性(-);5%~50%為陽(yáng)性(+);>50%為強(qiáng)陽(yáng)性(++),在判斷上兼顧陽(yáng)性染色的強(qiáng)度及數(shù)量[2]。

    1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)指標(biāo) 未經(jīng)宮頸局部化療患者以及局部化療患者手術(shù)切除新鮮標(biāo)本中局部病灶、卵巢組織中DNA周期及細(xì)胞凋亡指數(shù)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)數(shù)資料采用統(tǒng)計(jì)學(xué)x2檢驗(yàn)及直線相關(guān)性分析。

    2 結(jié)果

    2.1 Bcl-2和Bax在宮頸癌組織以及卵巢組織中的表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示,Bcl-2和Bax的陽(yáng)性顆粒均分布在細(xì)胞漿內(nèi),為胞漿型,呈局灶性分布,少部分呈彌漫分布。宮頸癌組織Bcl-2表達(dá)呈下降趨勢(shì),Bax表達(dá)呈上升趨勢(shì),治療組bcl-2/bax比值明顯低于對(duì)照組。治療組卵巢組織Bcl-2表達(dá)呈下降趨勢(shì),Bax表達(dá)呈上升趨勢(shì),治療組Bcl-2/Bax比值低于對(duì)照組(表1)。

    2.2 局部化療對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,凋亡細(xì)胞在流式細(xì)胞儀的DNA直方圖上呈特征的亞二倍體峰。宮頸癌組織細(xì)胞凋亡率治療組為(45.36±2.37)%,對(duì)照組為(12.93±4.96)%,治療組高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。卵巢組織細(xì)胞凋亡率治療組為(35.64±5.43)%,對(duì)照組為(10.05±1.29)%,治療組高于對(duì)照組,差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.3 細(xì)胞凋亡率與bcl-2,bax表達(dá)的相關(guān)性分析 宮頸癌癌灶中,細(xì)胞凋亡率與bcl-2表達(dá)呈反相關(guān)(r=-0.9633,P<0.05),即隨著bcl-2表達(dá)的下降細(xì)胞凋亡率上升;細(xì)胞凋亡率與bax表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.9694,P<0.05),即隨著bax表達(dá)的上升細(xì)胞凋亡率上升;細(xì)胞凋亡率與b cl-2/bax比值呈負(fù)相關(guān)(r=0.9529,P<0.05),即隨著bcl-2/bax比值的下降細(xì)胞凋亡率上升。卵巢組織中細(xì)胞凋亡率與bcl-2/bax表達(dá)的相關(guān)性同癌灶。

    3 討論

    宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,在我國(guó)宮頸癌發(fā)病率居高不下,并趨向年輕化,故對(duì)其治療方法提出了新的挑戰(zhàn)。常規(guī)的放療或全身化療對(duì)早期宮頸癌有較好的效果,但對(duì)中晚期及高危宮頸癌患者的療效仍不滿意。宮頸癌局部化療利用子宮與外界相通這一自然腔隙,把順鉑直接注射到宮頸腫瘤組織內(nèi),以達(dá)到局部濃度大而全身副作用少的優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于癌灶較大有手術(shù)困難的患者,可在術(shù)前瘤體局部注射化療藥物以縮小腫瘤體積,提高手術(shù)療效。局部化療還可以增強(qiáng)腫瘤組織對(duì)放射線的敏感性,對(duì)于中晚期宮頸癌患者在放療前輔以局部化療,可大大提高放療的療效[3]。

    以往認(rèn)為,腫瘤的發(fā)生是原癌基因的激活及抑癌基因的失活導(dǎo)致細(xì)胞增生過(guò)度和分化異常所致,現(xiàn)證實(shí)腫瘤的發(fā)生亦是細(xì)胞凋亡異常的結(jié)果[4]。在宮頸癌中不僅有細(xì)胞的過(guò)度增殖,同時(shí)還存在細(xì)胞的凋亡異常,兩者是宮頸癌發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)[5]。細(xì)胞增殖與死亡之間的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)生物體的正常發(fā)育至關(guān)重要,腫瘤的發(fā)生正是這種動(dòng)態(tài)平衡被打破、細(xì)胞數(shù)量惡性膨脹的結(jié)果。bcl-2是目前研究最多的與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的基因之一,bax基因是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種凋亡促進(jìn)基因,屬bcl-2同一家族,其不但拮抗bcl-2的抑制凋亡作用,而且有直接促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能[6]。bcl-2/bax的比值[7],對(duì)于決定細(xì)胞接受刺激信號(hào)后存活與否有關(guān)鍵作用。Oltvai[8]研究證明在宮頸癌組織中bcl-2占優(yōu)勢(shì)可使bax同型二聚體減少,bcl-2/bax異型二聚體增多,腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡的敏感性降低,使之易于逃避凋亡原的刺激,致使瘤細(xì)胞存活期延長(zhǎng),導(dǎo)致腫瘤不斷增大,說(shuō)明在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中,細(xì)胞凋亡是腫瘤抵抗惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵防御機(jī)制[9]。易慕華等[10]發(fā)現(xiàn)bcl-2的表達(dá)為全漿型或核周型為主,而這一部位也正好是bax失表達(dá)部位,提示細(xì)胞凋亡的激活可能與bcl-2/bax的表達(dá)失衡有重要關(guān)系。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)局部化療的宮頸癌癌灶及卵巢組織中細(xì)胞凋亡明顯高于未經(jīng)過(guò)局部化療組,bcl-2表達(dá)降低而bax表達(dá)上升,bcl-2/bax比值有下降趨勢(shì)且與細(xì)胞凋亡率有相關(guān)性。提示宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),局部化療可能誘導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的凋亡,同時(shí)對(duì)于卵巢組織也有一定程度的影響,從而可降低宮旁轉(zhuǎn)移率[11]。bcl-2/bax平衡的改變參與了凋亡調(diào)控,bcl-2、bax的表達(dá)情況以及bcl-2/bax比值變化可作為局部化療敏感性和治療效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

    宮頸癌局部化療近期療效肯定,操作方便,雖有一定的技術(shù)要求,但無(wú)明顯痛苦,不需麻醉,不需靜脈水化。與其他途徑化療相比所需時(shí)間短,無(wú)穿刺疼痛和靜脈炎發(fā)生,全身毒副作用輕,使病人生存質(zhì)量得到了有效的提高,在中晚期及高危宮頸癌病人的治療中具有巨大的潛在價(jià)值。

    [1]劉穎,林新生,劉慧.細(xì)胞凋亡和P53,PCNA表達(dá)在宮頸癌的研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2004,10,9(5):461-463.

    [2]許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)癌癥雜志,1996,12,6(4):229-231.

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