中藥復(fù)方對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌組織AngⅡ、BNP的影響*

宮麗鴻 張 艷△ 高 峰

1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院（遼寧沈陽(yáng)110032）

2遼寧中醫(yī)藥大學(xué)（遼寧沈陽(yáng)110032）

△通信作者

慢性心力衰竭（CHF）是臨床常見病，多發(fā)病及危重病癥，常是所有不同病因所致器質(zhì)心臟病的主要并發(fā)癥及終末表現(xiàn)，其發(fā)病率日益增高。CHF主要是RAS系統(tǒng)激活，血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）等血管活性物質(zhì)增高所致，腦鈉素（BNP）激活導(dǎo)致心室重塑。本實(shí)驗(yàn)觀察中藥益氣活血復(fù)方對(duì)CHF大鼠心肌組織AngⅡ、BNP的影響的干預(yù)機(jī)制。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)健康SD大鼠60只，體質(zhì)量200～230g，12周齡，雄性，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。在通風(fēng)、濕度、濕度適宜的動(dòng)物室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水。

1．2 實(shí)驗(yàn)藥物 益氣活血復(fù)方：由黃芪、人參、紅花、丹參、益母草、三七粉、葶藶子等組成（本溪第三制藥廠）。賴諾普利片：上海信誼萬(wàn)象藥業(yè)股份提供，每片10mg，國(guó)藥準(zhǔn)字H10960265。

1．3 模型制備 常規(guī)喂養(yǎng)大鼠1周，第2周飼料減1／2量，以使其饑餓，同時(shí)游泳至疲乏，每日1次，共4周。經(jīng)多普勒超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室射血分?jǐn)?shù)（EF），計(jì)算 CI值，EF≤60%，CI≤180mL/（min·kg）者為左心衰；同時(shí)大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量減輕，精神萎靡，毛色無光澤。出現(xiàn)以上癥狀視為造模成功。

1．4 分組與給藥 將成模大鼠隨機(jī)分為中藥組、西藥組、模型組，每組15只。另取15只未造模大鼠作為正常組。各用藥組按人-鼠劑量換算（給藥劑量=人給藥劑量×0．018/體質(zhì)量），中藥組予益氣活血方 9．2g/（kg·d）灌胃，西藥組予賴諾普利 1．5mg/（kg·d）灌胃，正常組和模型組大鼠灌胃等容積蒸餾水。每日1次，連續(xù)給藥6周。

1．5 標(biāo)本采集 在對(duì)大鼠灌胃藥物（蒸餾水）6周后，禁食不禁水12h，麻醉處死全部大鼠。腹主動(dòng)脈取血4mL，室溫下血液自然凝固20min，離心20min（3000r/min）。仔細(xì)收集上清液，低溫保存。取其大鼠心臟心肌組織，每組取8只，每只大鼠心臟按標(biāo)準(zhǔn)處理，于液氮中冷凍后在-80℃條件下保存待測(cè)，蛋白印跡分析法檢測(cè)。

1．6 檢測(cè)方法 BNP測(cè)定：按BNP試劑盒說明書步驟操作，試劑盒購(gòu)自北京博士德公司。心肌組織AngⅡ表達(dá)檢測(cè)：按AngⅡ試劑盒說明書步驟操作，試劑盒購(gòu)自大連TaKaRa公司；引物合成，北京華大基因公司。

1．7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件。 數(shù)據(jù)以（x±s）表示。組間比較采用完全隨機(jī)分組多組均數(shù)比較的單因素方差分析，若方差不齊采用Dunnett檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 益氣活血復(fù)方對(duì)CHF大鼠血清BNP水平的影響 見表1。與正常組相比，模型組血清BNP水平顯著升高（P＜0．05）；同模型組比較，中藥組與西藥組血清BNP水平降低（P＜0．05）；中藥組與西藥組比較，無顯著差異（P＞0．05）。

表1 各組大鼠血清BNP水平比較 （μg/L，±s）

表1 各組大鼠血清BNP水平比較 （μg/L，±s）

與模型組比較，*P＜0．05，**P＜0.01。 下同。

組別 n BNP正常組 8 14．49±2．18*模型組 8 39．16±5．83*西藥組 8 23．42±2．21*中藥組 8 24．42±1．98*

2．2 益氣活血復(fù)方對(duì)CHF大鼠心肌組織AngⅡ表達(dá)的影響見表2。與模型組比較，西藥組與中藥組AngⅡmRNA、AngⅡ蛋白表達(dá)有顯著差異（P＜0．01）；中藥組AngⅡ蛋白表達(dá)顯著高于西藥組（P＜0．05）。

表 2 各組大鼠心肌組織AngⅡ表達(dá)比較 （±s）

表 2 各組大鼠心肌組織AngⅡ表達(dá)比較 （±s）

與西藥組比較，△P＜0．05。

組別 n正常組 8模型組 8西藥組 8中藥組 8 AngⅡmRNA 1.00±0.00*1.418±0.545 1.206±0.498**1.227±0.788**AngⅡ蛋白表達(dá)51.938±6.919*180.232±3.047 83.197±4.919**90.387±6.606**△

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了益氣活血復(fù)方治療CHF的有效性，其治療效果與西藥療效相當(dāng)。通過臨床大量試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)益氣活血復(fù)方治療CHF有效可達(dá)85%以上［1］。根據(jù)中醫(yī)辨證論治的認(rèn)識(shí)，CHF的病機(jī)關(guān)鍵是心（氣）陽(yáng)虛，根據(jù)“虛則補(bǔ)之”的原則，臨床采用益氣溫陽(yáng)的手段恢復(fù)陽(yáng)氣，調(diào)整臟腑功能，平衡氣血陰陽(yáng)。我們根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CHF患者多屬心氣虛，血脈不通，心血瘀阻，水濕內(nèi)停所致。而血瘀與水飲又互相影響，如仲景所云“血不利則為水”，如使得水濕得化，瘀血得消，則陽(yáng)氣自復(fù)，從而達(dá)治療之功。由此可見益氣活血是CHF，特別是氣虛血瘀證的治療大法，且貫穿于CHF各證型的治療大法。

BNP是利鈉肽類的一種肽類激素，在左右心房的含量最多。BNP的合成分泌受心室容量負(fù)荷和室壁張力的影響，故血BNP含量可直接反映心室功能。BNP的前體前腦鈉肽原 （prep roBNP）由心室細(xì)胞分泌，脫去N端28個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽，成為由108個(gè)氨基酸組成的腦鈉肽原，在分泌過程或進(jìn)入血液過程中，由絲氨酸蛋白酶分解成為具有生物活性的含有32個(gè)氨基酸的BNP和含有76個(gè)氨基酸的無活性的氨基末端腦鈉肽前體（NT-proBNP）［2］。 外周血中 BNP 和 NT-proBNP 二者的濃度相等，但他們的半衰期卻有較大差別，BNP為20min，NT-proBNP為120min，故有些學(xué)者認(rèn)為，通過測(cè)定NT-proBNP在血漿中的水平，更能反映BNP水平的變化［3］。腦鈉肽對(duì)CHF的影響其主要作用包括：對(duì)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的拮抗作用，對(duì)交感神經(jīng)系統(tǒng)的拮抗作用，舒張冠脈作用。 此外，BNP還具有抑制心肌纖維化，抑制血管平滑肌增生，抑制系膜細(xì)胞及纖維母細(xì)胞增生，在心室重構(gòu)中作為一種局部調(diào)節(jié)因子起作用。另外，還可以抑制纖溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）的表達(dá)，防止血栓形成［4］。

AngⅡ是造成心肌肥厚、心室重構(gòu)，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致CHF重要且相對(duì)獨(dú)立、特異的指標(biāo)。特別是對(duì)心肌細(xì)胞直接注射AngⅡ，而AngⅡ在不依賴血流動(dòng)力學(xué)改變的情況下對(duì)心肌細(xì)胞增生及肥厚有明顯作用，嚴(yán)重時(shí)可造成心肌纖維化、心肌重構(gòu)，導(dǎo)致心肌收縮與舒張功能受損，最終造成CHF的發(fā)生［5］。

通過本實(shí)驗(yàn)證明，益氣活血復(fù)方對(duì)心肌組織中AngⅡ、BNP相對(duì)模型組有抑制其表達(dá)的作用，與西藥組相比療效相當(dāng)；充分證明益氣活血復(fù)方可抑制或逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的過程，從而達(dá)到治療CHF的目的。

［1］ 張艷，楊碩，龐敏，等.益氣活血復(fù)方對(duì)慢性心衰大鼠心肌組織AngⅡ及 PKC 的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2008，23（11）：999-1001.

［2］ 盧飛舟，趙殿有．充血性心力衰竭患者血漿腦鈉肽素濃度與心功能的關(guān)系［J］．心臟雜志，2004，16（3）：266．

［3］ Szypryt E P， Twining P， Mulholland RC， et al．The prevalence of disc degenerationassociatedwithneuralarchdefectsofthelumbarspine assessed bymagneticresonanceimaging［J］.Spine，1989 ，14（11）：977.

［4］ 陶以嘉，李春慶，金偉東，等.血漿B型利鈉肽（BNP）在心功能不全中的診斷和治療效果中的應(yīng)用 ［J］.中國(guó)微循環(huán)，2005，9（6）：433-435.

［5］ KannelWB，Ho K，Thorn T．Changing epidemiological featuresof cardiac failure［J］．BrHeart J，1994，72（5）：3-9.