TOPⅡ表達與乳腺癌新輔助化療療效的關系分析

張穎，郭楊，閻雪晶，郭阿垚，魏敏杰，金鋒

（中國醫(yī)科大學1.附屬第一醫(yī)院乳腺外科；2.第95期臨床醫(yī)學七年制；3.藥學院藥理教研室，沈陽 110001）

TOPⅡ表達與乳腺癌新輔助化療療效的關系分析

張穎1，郭楊1，閻雪晶2，郭阿垚1，魏敏杰3，金鋒1

（中國醫(yī)科大學1.附屬第一醫(yī)院乳腺外科；2.第95期臨床醫(yī)學七年制；3.藥學院藥理教研室，沈陽 110001）

目的探討乳腺癌新輔助化療方案療效及與化療前后TOPⅡ表達的關系。方法 采用免疫組化方法檢測乳腺癌患者（73例）新輔助化療前后乳腺癌組織中TOPⅡ的表達，了解其與化療方案及療效的關系。結果 TOPⅡ的表達與療效相關（P=0.015），TOPⅡ陽性表達患者對蒽環(huán)類藥物敏感（P=0.005），多西他賽類藥物療效與TOPⅡ表達無相關性（P=0.495）?；熐昂骉OPⅡ表達差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.027），陽轉陰者中獲得pCR為35.3%，陰轉陽或無變化者獲得pCR為9.1%，兩者比較差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.017）。結論TOPⅡ陽性表達者對蒽環(huán)類化療方案敏感，TOPⅡ可能成為預測療效的指標，化療后TOPⅡ表達由陽轉陰者獲得較好的病理緩解，TOPⅡ可能成為指導術后化療方案選擇的指標之一。

乳腺癌；新輔助化療；蒽環(huán)類；多西他賽；TOPⅡ

乳腺癌新輔助化療是較好的療效預測模型，尋找能準確預測化療效果的生物學標志物對指導臨床選擇個體化治療方案非常重要。NSABP-B18實驗顯示病理完全緩解（pathologic complete remission，pCR）對于乳腺癌新輔助化療患者是一個預后因子［1］。一些隨機的臨床試驗數(shù)據(jù)報道乳腺癌新輔助化療達到pCR概率為4%～34%［1，2］。為了獲得高pCR率，尋找一個新的能夠預測新輔助化療療效的生物學指標顯得尤為重要。TOPⅡ可能是蒽環(huán)類藥物的潛在作用靶點，也可能成為預測蒽環(huán)類化療療效的有效指標［3］。我們通過分析73例患者新輔助化療前后TOPⅡ蛋白表達情況，來探討其表達與化療方案及療效的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院乳腺外科2005年8月至2010年9月收治的乳腺癌患者73例。所有患者均為女性，年齡25～68歲，中位年齡52歲。T2期42例，T3期27例，T4期4例。浸潤性導管癌72例，浸潤性小葉癌1例。腫瘤最大徑≥3cm，治療前行雙乳彩超及X線檢查，并且粗芯針穿刺明確病理診斷。

1.2 化療方案

用4周期的多西他賽聯(lián)合鉑類或CEF方案作為新輔助化療方案，具體用藥：表柔比星60mg/m2，d1，靜滴；或多西他賽75mg/m2聯(lián)合鉑類150mg，d1，靜滴，21d為1個周期。4周期化療結束后休息2周行手術治療?；熎陂g給予抗腫瘤支持治療?；煼桨敢罁?jù)患者病理情況、身體情況、藥物毒副反應、經濟條件以及經患者同意后而確定。

1.3 療效評價標準

療效按WHO制定的統(tǒng)一標準分為完全緩解（complete remission，CR）、部分緩解（partial remission，PR）、無變化（stable disease，SD）和進展（progressive disease，PD）。完全緩解又分為病理完全緩解（pathologic complete remission，pCR），臨床完全緩解（clinical complete remission，cCR）。pCR定義為原發(fā)腫瘤及區(qū)域淋巴結均無殘留浸潤性癌細胞，其中殘留原位癌也包括在pCR組?？傆行拾ㄍ耆徑夂筒糠志徑?。

化療前及化療4周后均由高年資臨床醫(yī)師和超聲醫(yī)師根據(jù)病灶臨床反映及B超測量腫瘤大小來評定療效。

1.4 試劑與檢測方法

鼠抗人TOPⅡ單抗、免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。治療前粗芯針穿刺以及手術切除的乳腺腫瘤組織，4%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，脫蠟水化，3%H2O2室溫孵育10min以阻斷內源性過氧化物酶；PBS洗3min×3，于pH 6.0的檸檬酸緩沖液中微波修復15min，室溫冷卻20min；以非免疫動物血清封閉10min，PBS洗 3min×3，加一抗室溫（24℃）孵育 1h，PBS沖洗 3min×3，加生物素標記的二抗，室溫（24℃）10min，PBS沖洗，用辣根過氧化物酶標記的鏈霉素親和素復合物孵育10min，PBS沖洗，DAB染色，蘇木素復染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，用試劑盒已知陽性片作陽性對照。

1.5 免疫組化結果判定

TOPⅡ陽性表達主要見于細胞核，呈清晰棕黃色或黃色彌漫性分布。由兩位病理醫(yī)師在不知患者臨床和病理資料的情況下對免疫組織化學染色結果進行評定。每張切片隨機觀察10個高倍視野，核呈棕黃色的細胞數(shù)≥10%，定為TOPⅡ表達（+）；<10%定為 TOPⅡ表達（-）。

雌激素受體（estrogen receptor，ER），孕激素受體（progesterone receptor，PR），人類表皮生長因子受體2（CerbB-2）依據(jù)來自本院病理科病理報告。

1.6 統(tǒng)計學處理

用SPSS 10.0統(tǒng)計學軟件進行χ2檢驗或Fisher精確檢驗法分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TOPⅡ表達與乳腺癌臨床病理特征之間的關系

TOPⅡ在乳腺癌中的陽性表達率為57.5%（42/73），其表達狀況的分布與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結有無轉移以及激素受體狀態(tài)等臨床病理變量無關（P>0.05，表1）。

表1T O P I I表達與乳腺癌臨床病理特征之間的關系T a b.1T h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nT O P I I e x p r e s s i o na n dc l i n i c a l f e a t u r e s f o r b r e a s t c a n c e r Parameter χ2 P TOPⅡexpression+－Year≤50 19 20 2.664 0.103＞50 23 11Node Non-metastasis 15 11 0.009 0.923Metastasis 26 20Tumor T2 25 17 0.204 0.903T3 15 12T4 2 2ER+16 12 0.003 0.957－26 19PR+20 11 1.075 0.300－22 20CerbB-2+or－ 31 19 1.295 0.255++～+++ 11 12

2.2 新輔助化療療效

73例患者中化療總有效率67.1%，其中cCR占9.6%（7/73），PR 占 57.5%（42/73），SD 占 31.5%（23/73），PD占 1.4%（1/73），術后病理確診為 pCR僅11例（15.1%）。

2.3 TOPⅡ表達與化療療效的關系

在TOPⅡ陽性表達者中78.6%（33/42）獲得cCR或PR，高于TOPⅡ陰性表達者［51.6%（16/31）］，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.874，P=0.015）。提示TOPⅡ的表達情況與化療療效具有相關性，TOPⅡ陽性表達患者對新輔助化療較敏感。73例患者中有36例應用蒽環(huán)類藥物進行化療，其中22例TOPⅡ陽性表達者中有18例（81.8%）獲得cCR或PR，14例TOPⅡ陰性者中有5例（35.7%）獲得cCR或PR，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.011），提示TOPⅡ陽性表達患者對蒽環(huán)類藥物敏感。另外37例患者選用多西他賽藥類物治療，其中20例TOPⅡ陽性表達者中有15例（75%）獲得cCR或PR，17例TOPⅡ陰性者中有11例（64.7%）獲得cCR或PR，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.466，P=0.719）。

2.4 化療前后TOPⅡ表達的改變

化療前TOPⅡ陽性表達41例，陰性表達31例，經化療后TOPⅡ表達由陽性轉為陰性17例，陰性轉為陽性10例，化療前后TOPⅡ表達情況的差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=4.891，P=0.027）。另外進一步分析陽轉陰者中獲得pCR為35.3%（6/17），陰轉陽或無變化者獲得pCR為9.1%（5/55），兩者比較差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.017）。

3 討論

TOPⅡ為催化拓撲結構改變的酶系，參與DNA的轉錄、翻譯、復制及染色體分離等過程?；熕幬镏饕ㄟ^與TOPⅡ結合而造成DNA復制及轉錄異常，阻礙腫瘤細胞的增殖，是腫瘤化療藥物作用的主要靶酶。本實驗結果提示TOPⅡ陽性表達者對化療敏感（P<0.05），應用蒽環(huán)類的TOPⅡ陽性表達患者對化療更為敏感（P<0.05），與應用多西他賽組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 Durbecq等［4］應用蒽環(huán)類或紫杉類治療108例乳腺癌的回顧性分析發(fā)現(xiàn)，TOPⅡ蛋白表達對用蒽環(huán)類方案的療效有預測價值，但對紫杉類方案的化療無預測價值，由此推測TOPⅡ可能成為預測蒽環(huán)類化療方案療效的生物學指標之一。另外本實驗結果提示化療前后TOPⅡ蛋白表達改變，化療后TOPⅡ由陽轉陰者獲得pCR有效率高于陰轉陽或者無變化者，其中7名患者（63.6%）應用蒽環(huán)類藥物治療?，F(xiàn)有文獻報道經蒽環(huán)類藥物新輔助化療后TOPⅡ表達由陽轉陰的患者能獲得較好的病理緩解［5］。應用化療藥物后，腫瘤大小變化不同，說明腫瘤對藥物不敏感或耐藥，許多腫瘤產生耐藥的生物學基礎取決于腫瘤多藥耐藥基因的擴增，在腫瘤組織中產生GST-Pi、TOPO-Ⅱ和Pgp的含量升高，則對抗癌藥物產生耐藥性［6］。由此推測TOPⅡ陽轉陰的患者更易獲得pCR，TOPⅡ可能成為指導術后化療方案選擇的指標之一。

化療前后患者TOPⅡ表達的改變可能是由于治療過程中藥物誘導了增殖的腫瘤細胞重新表達受體［8］，另外治療期間腫瘤細胞的選擇性克隆也是一個原因，即受體陽性或者陰性的細胞選擇性存活［8］。本實驗樣本量少，對于所選用的化療方案存在多種因素影響，并不能斷言TOPⅡ可以作為預測蒽環(huán)類藥物化療療效的預測指標，準確的數(shù)據(jù)需要大樣本、多中心、隨機的臨床試驗來進一步驗證。

目前有研究表示TOPⅡ基因擴增以及缺失的患者應用蒽環(huán)類藥物輔助治療，可以改善療效［9］，Kawachi等［5］研究認為 TOPⅡ/CEP17的比值也許會對乳腺癌蒽環(huán)類新輔助化療療效預測起到作用，成為一個預測因子。這為我們日后研究提供方向［10］，可能會獲得更準確更有意義的結果，得到可靠的預測指標。

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［9］Brase JC，Schmidt M，F(xiàn)ischbach T，et al.ERBB2and TOP2A in breast cancer：a comprehensive analysis of gene amplification，RNA levels，and protein expression and their influence on prognosis and prediction［J］.Clin Cancer Res，2010，16（8）：2391－2401.

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（編輯武玉欣，英文編輯劉寶林）

The Relationship of TOPⅡExpression and Neoadjuvant Chemotherapy in Breast Cancer

ZHANG Ying1，GUO Yang1，YAN Xue-jing2，GUO A-yao1，WEI Min-jei3，JIN Feng1
（1.Department of Breast Surgery,The First hospital,China Medical University,Shenyang 110001,China；2.The 95th Class，7-year System，Clinical Medicine，China Medical University,Shenyang 110001,China；3.Department of Pharmacology，China Medical University,Shenyang 110001,China）

ObjectiveTo investigate the relationship between expression of TOPⅡ and response of neoadjuvant chemotherapy in breast cancer.MethodsCore biopsy samples were obtained for assay of TOPⅡ expression before the chemotherapy and surgery.The TOPⅡ status was examined using immunohistochemistry（IHC）in 73pairs of pre-and post-chemotherapeutic breast cancer tissues.ResultsTOPⅡpositive expression showed a correlation with anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy response（P=0.005）.On the other hand,the difference between pre-operative and post-operative TOPⅡ expression was statistically significant（P=0.027）.The reduction of the TOPⅡ-positive cells correlated with a better pathological response to the neoadjuvant chemotherapy（P=0.017）.ConclusionThe results thus suggest that in breast cancer TOPⅡmay be a useful predictor of the effects of anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy and guiding the choice of post-operative chemotherapy.

breast cancer；neoadjuvant chemotherapy；anthracycline；duoxitasai；topoisomerase Ⅱ

R737.9

A

0258-4646（2011）05-0462-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1815.018

http：//www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1815.018.html

張穎（1983-）,女，碩士研究生.

金鋒，E-mail：jinfeng66cn@hotmail.com

2010-11-22

網絡出版時間：2011-05-1815：25