半枝蓮總黃酮對ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表達的影響

祝娉婷，卜平，孫云，鄭新梅，張振剛，張旭東，孫黨紅

（1.揚州大學醫(yī)學院中西醫(yī)結合研究所，江蘇 揚州 225001；2.揚州市第一人民醫(yī)院心內科，江蘇 揚州 225001；3.江蘇省蘇北人民醫(yī)院心內科，江蘇 揚州 225001）

半枝蓮總黃酮對ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表達的影響

祝娉婷1，卜平1，孫云1，鄭新梅1，張振剛2，張旭東3，孫黨紅3

（1.揚州大學醫(yī)學院中西醫(yī)結合研究所，江蘇 揚州 225001；2.揚州市第一人民醫(yī)院心內科，江蘇 揚州 225001；3.江蘇省蘇北人民醫(yī)院心內科，江蘇 揚州 225001）

目的探討半枝蓮總黃酮對載脂蛋白E基因敲除小鼠AS病變形成早期血脂水平與血清磷脂轉運蛋白（PLTP）、Il-6、C反應蛋白（CRP）表達的影響。方法 載脂蛋白E基因敲除小鼠隨機分為模型組、辛伐他汀組、銀杏葉膠囊組、半枝蓮總黃酮高、中、低劑量組，取正常C57BL/6小鼠為對照組，各6只。除模型組、對照組給予等容量羧甲基纖維素鈉外，其他各組分別給予陽性對照藥與受試藥8周。處死小鼠，ELISA法檢測血脂、PLTP、IL-6及CRP的表達水平。取主動脈制作切片、HE染色，觀察形態(tài)學變化。結果 半枝蓮總黃酮中、高劑量組TG、TC、LDL-C水平明顯低于模型組，高劑量組HDL-C水平高于模型組，半枝蓮總黃酮各組PLTP、IL-6、CPR的表達水平較模型組明顯降低，有統(tǒng)計學意義。PLTP與IL-6水平呈正相關，與CRP水平呈正相關，IL-6與CRP水平呈正相關。結論 半枝蓮總黃酮可通過降低載脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平，升高HDL-C水平，降

低PLTP、IL-6、CPR水平而發(fā)揮抗AS的作用。

半枝蓮總黃酮；載脂蛋白E基因敲除小鼠；血脂；磷脂轉運蛋白；白介素6；C反應蛋白

磷脂轉運蛋白（phospholipid transfer protein，PLTP）是一種脂多糖結合蛋白，參與高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）的代謝和重構。PLTP高表達可以促動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）的發(fā)生發(fā)展［1］。C反應蛋白（creactive protein，CRP）對冠心病有著最強的預測價值，血清白介素6（interleukin-6，IL-6）濃度越高，其發(fā)生冠狀動脈粥樣硬化的風險越高［2，3］，本研究旨在觀察半枝蓮總黃酮（total flavonoids of scutellaria barbata，TFSB）對高脂飼養(yǎng)載脂蛋白E基因敲除（apolipoprotein Egene knockout，ApoE-/-）小鼠 AS病變的影響，旨在通過脂蛋白途徑研究中藥TFSB防治AS的作用機制，為探索AS的治療藥物開辟新靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

11周齡ApoE-/-小鼠36只（北京市維同利華實驗動物中心提供，SCXK京2006-0008），雌雄各半，體質量（22.5±3.2）g。血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、PLTP、IL-6、CPRELISA試劑盒（美國SC公司）。BX51系統(tǒng)顯微鏡（Olympus公司）；JEDA801D形態(tài)學圖象分析系統(tǒng)（江蘇捷達科技發(fā)展有限公司）。TFSB由揚州大學醫(yī)學院藥學實驗室提供。TFSB為醇提法提取，總黃酮含量為24.12%。辛伐他汀40mg/片，5片/盒，杭州默沙東制藥有限公司，批號：100260。銀杏葉膠囊 20mg/片，20片/盒，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號：1052003。

1.2 方法

11周齡小鼠普通飼料適應性飼養(yǎng)1周。隨機分為陽性對照辛伐他汀組（3.3mg·kg-1·d-1）、銀杏葉膠囊組 （150mg·kg-1·d-1）、TFSB設 400、200、100mg·kg-1·d-13個劑量組，每組6只。取11周齡正常C57BL/6小鼠6只為正常對照組。給予高脂飼料（配方：1%膽固醇+5%豬油+5%蛋黃十89%普通飼料）4周后分別灌胃給藥。正常對照組給予等容量羧甲基纖維素鈉（CMC），干預8周。禁食12h，實驗時眼眶取血，分離血清。采用ELISA方法檢測TG、TC、LDL-C、HDL-C、PLTP、Il-6、CRP表達。取主動脈制作石蠟切片，HE染色，光鏡觀察病理改變。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 TFSB對ApoE基因敲除小鼠血清脂質的影響

模型組TC、LDL-C水平明顯升高，TG水平亦明顯升高，HDL-C水平明顯降低，與正常對照組比較，具有顯著性差異（P<0.01，P<0.001），提示造模成功。TFSB可明顯降低TG、TC、LDL-C、升高HDL-C水平，結果見表1。

2.2 TFSB對ApoE基因敲除小鼠PLTP、IL-6、CPR水平的影響

模型組PLTP、IL-6、CPR水平均明顯高于正常對照組。TFSB明顯降低PLTP、IL-6、CPR水平，結果見表2。經(jīng)Linear Regression相關分析，PLTP與IL-6呈正相關（r=0.642，P<0.01），PLTP與CRP呈正相關（r=0.673，P<0.01），IL-6與 CRP呈正相關（r=0.546，P<0.01）。

2.3 TFSB對AS模型小鼠主動脈形態(tài)結構的影響

HE染色后光學顯微鏡下觀察：正常對照組主動脈內膜結構正常，無AS病灶。模型組主動脈管壁內膜明顯增厚，可見隆起如丘狀樣斑塊。TFSB低、中劑量組和內皮細胞結構基本完好，內膜層可見泡沫細胞，較光滑，彈性膜分層欠清楚。高劑量組可見內皮層結構完好，內膜光滑，管壁3層結構分層清楚，形態(tài)結構較模型組明顯改善。

3 討論

脂質轉運蛋白的表達調控在脂蛋白代謝和AS中的作用是國外研究新熱點。PLTP是一種重要的脂質轉運蛋白，能從脂解中的乳糜微粒、極低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）殘粒向HDL轉移磷脂，影響AS的發(fā)生發(fā)展［4］。流行病學研究表明，PLTP活性是預測冠心病的獨立影響因子，PLTP可以作為抗AS的新靶點［5］。CRP是冠狀動脈病變所致的心血管事件獨立的預測因子，CRP水平與冠脈、腦動脈和周圍動脈粥樣硬化密切相關。IL-6是促炎性反應細胞因子，其濃度升高提示冠心病患者病情加重和預后不良［6］。國內文獻尚無通過抑制PLTP表達途徑抗AS的相關研究，也無PLTP、CRP、IL-6的相關性研究。

半枝蓮的主要有效成分黃酮類化合物能抑制脂質過氧化反應、清除自由基、調節(jié)血脂、抑制血小板凝聚、抑制毛細血管通透性增加、抑制脆性增加，抑制AS的形成和發(fā)展。目前對中藥抗AS的研究較少涉及到酶、受體、蛋白轉導通路等信號機制，尚未見半枝蓮及其化學成分通過脂蛋白途徑抗AS的相關報道。

ApoE-/-小鼠即便飼以正常飲食，10周后可見脂質條紋形成，20周后可發(fā)生明顯的動脈粥樣硬化。其原因為載脂蛋白E基因敲除導致肝臟對VLDL、乳糜微粒的攝取、清除障礙，而使高含膽固醇的殘粒在血漿中的堆積引起高脂血癥，引發(fā)動脈粥樣硬化。本研究結果顯示，TFSB作用于ApoE-/-8周后，能夠顯著降低模型小鼠的TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平；能明顯降低CRP、IL-6的表達水平，提示TFSB可能通過抑制動脈粥樣硬化形成過程中炎癥的啟動和致炎因子的激活，延緩其進程，預防和治療動脈粥樣硬化性疾病。研究結果同時顯示，TFSB能降低血清PLTP水平，PLTP水平與CRP、IL-6呈正相關，表明血清PLTP水平與機體慢性炎癥狀態(tài)有密切關聯(lián)，TFSB對PLTP信號通路轉導的調節(jié)機制有待下一步深入研究。

［1］Schlitt A，Bickel C，Thumma P，et al.High plasma phospholipid transfer protein levels as a risk factor for coronary artery disease［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23（10）：1857-1862.

［2］Hartford M，Wiklund O，Mattsson L，et al.CRP，interieukin-6，secretory Phospholipase A2group IIA，and intercellular adhesion molecule-1during the early Phase of acute coronary syndromes and long-term follow-up［J］.Int JCardiol，2006：108（l）：55-62.

［3］Hartford M，Wiklund O，Mattsson L，et al.CRP，interieukin-6，secretory Phospholipase A2group IIA，and intercellular adhesion molecule-1in the Prediction of late outcome events after acute coronary syndromes［J］.JIntern Med，2007，262（5）：526-536.

［4］秦樹存，葉平.磷脂轉運蛋白的生物學特性及其與脂蛋白代謝相關疾病的關系［J］.中華老年心腦血管病雜志，2008，10（8）：633-635.

［5］Schlitt A，Liu J，Yan D，et al.Anti-inflammatory effects of phospholipid transfer protein deficiency in mice［J］.Biochim Biophys Acta，2005，1733（2）：187-191.

［6］Han SH，Quan MJ，Koh KK.Beneficial vascular and metabolic effects of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha activators［J］.Hypertension，2005，46（5）：1086.

（編輯 裘孝琦，英文編輯 趙傳勝）

Effect of TFSBon the Expression of PLTP，IL-6，CPRinApoEGene Knockout Mice

ZHUPing-ting1，BOPing1，SUNYun1，ZHENXin-mei1，ZHANGZhen-gang2，ZHANGXu-dong3，SUNDang-hong3
（1.Research Institute of Chinese and Western Integrative Medicine，Medical College of Yangzhou University，Yangzhou 225001，China；2.Department of Cardiology，The First People’s Hospital，Yangzhou 225001，China；3.Department of Cardiology，Northern Jiangsu People’s Hospital，Yangzhou 225001，China）

ObjectiveTo observe the effect of TFSBon the levels of serum lipids and expression of PLTP，IL-6，CRPin ApoEgene knockout mice in the early period of atherosclerosis.MethodsThirty-sixApoEgene-deleted mice were randomly divided into six groups：model group，Simvastatin group，Ginkgo capsule group，and groups with high，middle，low-dose of TFSB（fed with high-lipid forage）.Six mice of C57BL/6were chosed as the control group.Excepting the control and model group （fed with equal CMC），each group was treated with positive control drugs and tested drugs for 8weeks respectively.Serum levels of TG，TC，LDL-C，HDL-C，PLTP，IL-6，CRPwere assayed by ELISAafter the mice were killed.Hematoxylin-eosin staining were used to observe the morphological changes of atherosclerosis.ResultsCompared with model group，levels of PLTP，IL-6，CRPin TFSBgroups were obviously lower while higher level of HDL-Cwas found in group with high dose of TFSBand lower levels of TG，TC，LDL-Cwere found in groups with middle and high dose of TFSB.There is a positive correlativity of PLTPand IL-6，PLTPand CRP，IL-6and CRP.ConclusionTFSBcan lower the serum levels of TG，TC，LDL-C，PLTP，IL-6，CRP，and raise the serum level of HDL-CinApoEgene knockout mice to prevent AS.

TFSB；ApoEgene knockout mice；lipid；PLTP；IL-6；CRP

R543.5

A

0258-4646（2011）05-0394-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1816.026

http://www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1816.026.html

教育部博士點基金項目（20093250120007）；江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新項目（CX09B_320Z）

祝娉婷（1984-），女，助教，博士研究生.

卜平，E-mail：boping@yzu.edu.cn

2011-02-21

網(wǎng)絡出版時間：2011-05-1815:25