抵抗素蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)及意義

馬金紅，王丹波

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004）

抵抗素蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)及意義

馬金紅，王丹波

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004）

目的檢測抵抗素蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位子宮內(nèi)膜、在位子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測抵抗素蛋白在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況，并分析和比較其表達(dá)是否有差異。結(jié)果 抵抗素蛋白在異位內(nèi)膜的表達(dá)率及強(qiáng)度均高于在位內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜的表達(dá)率及強(qiáng)度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。陽性表達(dá)定位于子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。結(jié)論抵抗素蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病中可能起重要作用。

子宮內(nèi)膜異位癥；抵抗素蛋白；子宮內(nèi)膜；免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜異位癥（endimetriosis）簡稱“內(nèi)異癥”。是育齡期婦女的常見病和多發(fā)病，近年發(fā)病率明顯增高。至今內(nèi)異癥的病因及發(fā)病機(jī)制仍無確切定論。本課題組的前期研究也證明了“在位內(nèi)膜決定論”［1］，而腹腔內(nèi)免疫功能的紊亂、炎癥及多種細(xì)胞因子的分泌失調(diào)，為異位子宮內(nèi)膜存活、種植和生長提供了有利的條件，促進(jìn)了內(nèi)異癥的發(fā)生與發(fā)展。抵抗素是新近發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞因子。最初因其具有抵抗胰島素的作用而被取名為抵抗素，與糖尿病有關(guān)。然而，隨著對抵抗素研究的廣泛開展，發(fā)現(xiàn)人類抵抗素由巨噬細(xì)胞分泌，與炎癥有關(guān)。而內(nèi)異癥是炎癥性疾病，廣泛粘連，許多炎癥相關(guān)細(xì)胞因子在內(nèi)異癥中高表達(dá)［2，3］，由此推測抵抗素與內(nèi)異癥發(fā)生發(fā)展相關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液及血清中抵抗素含量增高［4，5］。本文通過檢測內(nèi)異癥患者在位及異位子宮內(nèi)膜中抵抗素蛋白的表達(dá)，旨在進(jìn)一步探討抵抗素在內(nèi)異癥發(fā)病中的可能作用。

1 對象及方法

1.1 研究對象

選擇2008年10月～2009年12月我院因子宮內(nèi)膜異位癥行開腹或腹腔鏡手術(shù)同時(shí)行子宮切除患者 50例為研究組，年齡 31～50歲（44.19±4.42）歲；體質(zhì)量指數(shù) 19～22（20.65±0.56）。選擇同期在我院因CINIII行子宮切除的患者30例為對照組，年齡31～46歲［（42.56±3.47）歲］；體質(zhì)量指數(shù) 19～24（21.46±0.43）。2組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），體質(zhì)量指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2組基本限制條件為：月經(jīng)周期正常，而且根據(jù)月經(jīng)周期選擇分泌期；至少3個(gè)月未接受激素類藥物治療；無自身免疫性疾病、肝臟疾病、糖尿病或惡性腫瘤；同時(shí)排除了生殖器官發(fā)育不良，術(shù)中證實(shí)無急性炎癥及其他盆腔病理改變。所有患者均經(jīng)臨床和病理確診，并經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集：術(shù)中留取實(shí)驗(yàn)組患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜，對照組子宮內(nèi)膜，所有標(biāo)本常規(guī)用10%甲醛溶液固定，脫水及石蠟包埋，切成4μm厚的石蠟切片染色，光鏡下觀察組織學(xué)形態(tài)，篩選組織標(biāo)本，保證異位病灶中存在異位內(nèi)膜腺體或間質(zhì)細(xì)胞。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法：采用S-P免疫組化法。兔抗人多克隆抵抗素抗體的工作濃度為1∶200。S-P試劑盒購于自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，抵抗素抗體購于美國Santa Cruz公司。陰性對照為PBS液代替一抗，陽性對照為已知陽性表達(dá)作為對照。具體操作步驟按試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.3 結(jié)果判定：抵抗素的陽性染色為子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占面積積分之和進(jìn)行判斷。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。染色面積評分標(biāo)準(zhǔn)：無細(xì)胞染色為0分，≤25%為1分，26%-50%為2分，≥50%為3分。2種評分相加，0-1分為（-），2分為（+），3-4分為（++），5-6分為（+++）。陽性表達(dá)率＝（+～+++級的例數(shù)/各組總例數(shù)）×100%

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行檢驗(yàn)。陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，表達(dá)強(qiáng)度比較用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。

2 結(jié)果

抵抗素蛋白在異位內(nèi)膜的表達(dá)率及強(qiáng)度均高于在位內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜的表達(dá)率及強(qiáng)度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（表 1）。

表1抵抗素蛋白在正常子宮內(nèi)膜及內(nèi)異癥在位、異位內(nèi)膜中的表達(dá)T a b.1T h e e x p r e s s i o n o f R e s i s t i n i n n o r ma l，e u t o p i c a n d e c t o p i c e n d o me t r i a l t i s s u e s Resistin 0-1（-） 2（+） 3-4（++） 5-6（+++）Normal endometrial tissues 30 27 3 0 0 10Eutopic endometrial tissues 50 40 10 0 0 20Ectopic endometrial tissues 50 22 7 10 11 56.0Group n Positive rate（%）

3 討論

抵抗素屬于（RELMs）家族，也就是早期發(fā)現(xiàn)的FIZZ（FIZZ）家族，因此抵抗素也被稱為FIZZ3。人的抵抗素基因位于19號染色體，其mRNA全長為476個(gè)堿基，編碼108個(gè)氨基酸殘基組成的抵抗素蛋白。目前人類抵抗素與胰島素抵抗的關(guān)系尚未明確，而人抵抗素主要在外周血單核細(xì)胞中表達(dá)，單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞時(shí)表達(dá)和分泌明顯增加［6］，提示人類抵抗素的作用可能主要與炎癥有關(guān)［7］。子宮內(nèi)膜異位癥是一種免疫有關(guān)的慢性炎癥性疾病，而且與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子與內(nèi)異癥的相關(guān)性也多有報(bào)道，但內(nèi)異癥的炎性反應(yīng)是原發(fā)性改變，還是繼發(fā)性改變？是異位部位的炎癥環(huán)境導(dǎo)致內(nèi)異癥發(fā)生，還是內(nèi)異癥發(fā)生后異位內(nèi)膜的浸潤性生長繼發(fā)炎性反應(yīng)等問題尚不明確。內(nèi)異癥的發(fā)生與機(jī)體免疫功能及腹腔內(nèi)環(huán)境的異常密切相關(guān)。逆流入腹腔的子宮內(nèi)膜組織碎片通過刺激腹膜導(dǎo)致巨噬細(xì)胞的數(shù)量和活性明顯增加，進(jìn)而促進(jìn)炎癥相關(guān)因子的釋放［8］，而抵抗素是單核/巨噬細(xì)胞其中的關(guān)鍵因子之一。子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中抵抗素明顯升高，一方面，抵抗素可以通過其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及促炎性反應(yīng)的作用形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致惡性循環(huán)，改變了腹腔內(nèi)環(huán)境，有利于炎性細(xì)胞在內(nèi)異癥病灶的積聚、炎性反應(yīng)和黏連形成，有利于異位內(nèi)膜的維持和增長。另外，抵抗素分子還可以上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）、VEGF受體和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）和金屬蛋白酶組織抑制因子-2（TIMP-2）的表達(dá)［9，10］，激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶 1/2（ERK1/2）和絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）途徑的磷酸化作用，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移并刺激毛細(xì)血管形成。抵抗素還能激活人內(nèi)皮細(xì)胞，增加內(nèi)皮素-1（ET-1）mRNA的表達(dá)和蛋白的分泌，促進(jìn)血管細(xì)胞間黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）和單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP-1）的表達(dá)［11］。而這些細(xì)胞因子的作用在內(nèi)異癥發(fā)生機(jī)制中的作用已經(jīng)得到公認(rèn)，因此可以認(rèn)定，抵抗素在內(nèi)膜異位癥異位病灶的黏附、侵襲，血管形成方面起著重要作用。抵抗素作為一種炎性因子，可能在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展過程中起著十分關(guān)鍵的作用。

內(nèi)異癥發(fā)生機(jī)制研究中，“在位內(nèi)膜決定論”是近年來較被關(guān)注的理論之一，即內(nèi)異癥發(fā)病與否取決于患者的在位內(nèi)膜基因表達(dá)的差異。但本研究顯示，抵抗素雖然在內(nèi)異癥異位病灶中高表達(dá)，但在位內(nèi)膜中其表達(dá)未見增強(qiáng)，提示內(nèi)異癥中炎性反應(yīng)很可能是繼發(fā)改變，而并非內(nèi)異癥發(fā)生的始動因素，這一結(jié)論尚需擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究證實(shí)。而關(guān)于抵抗素在子宮內(nèi)膜的局部表達(dá)國內(nèi)外尚屬首次報(bào)道。

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（編輯孫憲民，英文編輯劉寶林）

Expression of Resistin Protein in Patients with Endometriosis and Its Significance

MA Jin-hong，WANG Dan-bo
（Department of Gynaecology and Obstetrics，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo examine expression of resistin protein in patients with and without endometriosis.MethodsThe expression of resistin protein was detected in the normal，ectopic，eutopic endometrial tissues in women with andwithout endometriosis via immunohistochemistry SP method.The different expression was analyzed.ResultsThe expression rate and intensity of resistin was higher in ectopic endometrium of patients with endometriosis than that of in the eutopic endometrium group（P<0.05）.However，The expression rate and intensity of resistin of the eutopic endometrium in patients with endometriosis and of that in the endometrium of women without endometriosis was no significant difference （P>0.05）.Resistin staining was located in the cytoplasm of endometrial stromal cells.ConclusionThe expression of resistin in the ectopic endometrium might play a crucial role in the pathogenesis of endometriosis.

endometriosis；resistin；endometrium；immuneohistochemistry

R711.71

A

0258-4646（2011）05-0425-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1813.005

http：//www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1813.005.html

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30471816）；遼寧省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2009225026）

馬金紅（1969-），女，副主任醫(yī)師，碩士研究生.

王丹波，E-mail：wangdb@sj-hospital.org

2011-02-18

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2011-05-1815：25