鹿胎膠囊與軟膠囊緩解小鼠炎性疼痛與痛經(jīng)性疼痛作用的比較研究

魏力，劉聃

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 1100032）

鹿胎膠囊與軟膠囊緩解小鼠炎性疼痛與痛經(jīng)性疼痛作用的比較研究

魏力，劉聃

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 1100032）

目的觀察鹿胎膠囊與鹿胎軟膠囊緩解小鼠腹腔炎性疼痛及痛經(jīng)性疼痛的作用，為臨床應(yīng)用不同鹿胎制劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 通過擬臨床給藥途徑與方法，對(duì)雌性小鼠分別口服給予高、低劑量的鹿胎軟膠囊制劑和鹿胎膠囊制劑，30d后觀察兩種制劑對(duì)醋酸誘導(dǎo)腹腔炎性疼痛及縮宮素誘發(fā)的痛經(jīng)性疼痛、子宮組織病理學(xué)改變與差異。結(jié)果 與疼痛模型組比較，鹿胎高劑量組及低劑量組均可顯著降低醋酸誘導(dǎo)的炎性疼痛小鼠模型及縮宮素誘發(fā)的痛經(jīng)小鼠模型平均扭體次數(shù)，同種藥物的高低劑量組之間的鎮(zhèn)痛效果也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。結(jié)論鹿胎膠囊和鹿胎軟膠囊可有效緩解不同類型病理性疼痛反應(yīng)，且不影響投藥小鼠子宮組織的病理學(xué)改變。

鹿胎；小鼠；炎性疼痛；痛經(jīng)性疼痛

鹿胎具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)止痛、通經(jīng)散寒之功效，可用于治療婦女氣血不足、虛弱羸瘦、月經(jīng)不調(diào)、行經(jīng)腹痛、寒濕帶下等癥狀［1］。鹿胎軟膠囊是在現(xiàn)有組方鹿胎膠囊的基礎(chǔ)上開發(fā)的軟膠囊新型制劑。本研究應(yīng)用醋酸誘導(dǎo)腹腔炎性疼痛小鼠實(shí)驗(yàn)病理模型及縮宮素誘發(fā)的痛經(jīng)小鼠實(shí)驗(yàn)病理模型，對(duì)比觀察鹿胎軟膠囊與鹿胎膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)病理模型小鼠的疼痛緩解作用及子宮組織病理學(xué)改變，探討鹿胎軟膠囊和鹿胎膠囊緩解痛經(jīng)性疼痛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)藥效學(xué)作用及差異，旨在為鹿胎制劑的藥效學(xué)評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品

鹿胎軟膠囊由諾氏制藥（中國(guó)）有限公司提供（批號(hào)：050301），性狀：軟膠囊，內(nèi)容物為棕色至棕褐色的膏狀物。規(guī)格：每粒裝膏狀內(nèi)容物0.65g，相當(dāng)于生藥2.396g。鹿胎膠囊由長(zhǎng)春華興藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)：041201），膠囊劑，內(nèi)容物為棕色粉末，每粒裝藥粉0.3g，相當(dāng)于生藥0.958g?？s宮素注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：041103）、己烯雌酚片（上海信誼康捷制藥有限公司，批號(hào)：041001）冰醋酸（北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司，批號(hào)：20040618）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

10周齡SPF級(jí)雌性未孕昆明種小鼠120只，體質(zhì)量18～22g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2003-0009，試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（遼）2003-0013。飼養(yǎng)條件及實(shí)驗(yàn)環(huán)境：屏障系統(tǒng)環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作，試驗(yàn)動(dòng)物不限食水，每籠10只。實(shí)驗(yàn)室溫度20～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，空氣潔凈度10000級(jí)，晝夜明暗交替時(shí)間12h/12h［執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 環(huán)境及設(shè)施（GB14925-2001）］。

1.3 疼痛模型制備

1.3.1 醋酸誘導(dǎo)腹腔炎性疼痛模型小鼠的制備：腹腔注射0.6%醋酸（0.2mL/只）后，10min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)為20次以上，則證明疼痛模型建立成功。1.3.2 己烯雌酚誘導(dǎo)痛經(jīng)性疼痛模型小鼠的制備：從給藥的28d開始，每日小鼠皮下注射己烯雌酚（4.0mg/kg），第30天灌胃給藥30min后，腹腔注射縮宮素（2U/只）后，10min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)為20次以上，則證明疼痛模型建立成功。

1.4 試驗(yàn)分組

1.4.1 鹿胎對(duì)醋酸誘導(dǎo)腹腔炎性疼痛模型小鼠作用的實(shí)驗(yàn)分組：（1）空白對(duì)照組；（2）疼痛模型組；（3）鹿胎軟膠囊低劑量組（0.059g/mL）；（4）鹿胎軟膠囊高劑量組（0.176g/mL）；（5）鹿胎膠囊低劑量組（0.059g/mL）；（6）鹿胎膠囊高劑量組（0.176g/mL），共 6組，每組10只小鼠。腹腔注射0.6%醋酸（0.2mL/只），記錄10min內(nèi)各組動(dòng)物的扭體次數(shù)。

1.4.2 己烯雌酚誘導(dǎo)痛經(jīng)性疼痛模型小鼠作用的實(shí)驗(yàn)分組：（1）空白對(duì)照組；（2）痛經(jīng)模型組；（3）鹿胎軟膠囊低劑量組（0.059g/mL）；（4）鹿胎軟膠囊高劑量組（0.176g/mL）；（5）鹿胎膠囊低劑量組（0.059g/mL）；（6）鹿胎膠囊高劑量組（0.176g/mL），共 6組，每組10只小鼠。從給藥的28d開始，小鼠皮下注射己烯雌酚（4.0mg/kg），第30天灌胃給藥30min后，腹腔注射縮宮素（2U/只）后，記錄10min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)。

1.5 給藥途徑與給藥方法

各組小鼠連續(xù)灌胃給藥30d，空白對(duì)照組和疼痛模型組灌胃給予蒸餾水；鹿胎低劑量組灌胃給予鹿胎制劑混懸液0.059g/mL（相當(dāng)于生藥0.216g/mL）；鹿胎高劑量組灌胃給予0.176g/mL（相當(dāng)于生藥0.648g/mL）；給藥容積均為10mL/kg。

1.6 子宮病理學(xué)檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組分別隨機(jī)選取3只小鼠，脫椎處死，剪開腹腔，取子宮制備HE染色組織切片，觀察各組小鼠子宮組織病理學(xué)變化，并比較差異。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），兩兩比較采用student-Newman-Keuls法，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鹿胎制劑緩解醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔炎性疼痛作用

空白對(duì)照組無扭體現(xiàn)象出現(xiàn)，疼痛模型組，鹿胎軟膠囊低、高劑量組，鹿胎膠囊低、高劑量組扭體次數(shù)分別為（25.5±10.9）、（14.2±9.0）、（6.3±6.4）、（15.4±5.3）、（8.8±6.0）。與疼痛模型組比較，鹿胎高劑量組及低劑量組均可顯著降低受試小鼠平均扭體次數(shù)（P<0.05），且同種制劑高低劑量?jī)山M間的扭體次數(shù)差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；空白對(duì)照組無扭體現(xiàn)象出現(xiàn)；提示鹿胎兩種制劑均具有劑量依賴性地緩解醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹腔炎性疼痛作用（P<0.05）。

鹿胎軟膠囊的高、低劑量組緩解醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔炎性疼痛作用強(qiáng)度與鹿胎膠囊的相同劑量組間的比較差異均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示等劑量?jī)煞N鹿胎制劑緩解醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹腔炎性疼痛作用強(qiáng)度無明顯差異。

2.2 鹿胎制劑緩解縮宮素誘導(dǎo)小鼠痛經(jīng)作用

空白對(duì)照組無扭體現(xiàn)象出現(xiàn)，疼痛模型組、高劑量組，鹿胎膠囊低、高劑量組扭體次數(shù)分別為（21.3±8.3）、（11.6±7.2）、（5.6±4.0）、（11.9±7.6）、（5.4±3.9）。鹿胎高劑量組及低劑量組均可顯著降低受試小鼠平均扭體次數(shù)（P<0.05），同種制劑高低劑量2組間的扭體次數(shù)差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；空白對(duì)照組無扭體現(xiàn)象出現(xiàn)；提示鹿胎兩種制劑均具有劑量依賴性地緩解縮宮素誘導(dǎo)的痛經(jīng)模型小鼠的疼痛反應(yīng)作用（P<0.05）。

鹿胎軟膠囊高、低劑量組緩解縮宮素誘導(dǎo)的痛經(jīng)模型小鼠疼痛作用強(qiáng)度與鹿胎膠囊的相同劑量組比較差異均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示等劑量?jī)煞N鹿胎制劑緩解縮宮素誘導(dǎo)的痛經(jīng)模型小鼠疼痛作用強(qiáng)度無明顯差異。

2.3 鹿胎對(duì)小鼠子宮病理學(xué)的影響

各處理組小鼠子宮內(nèi)膜完整，內(nèi)膜上皮細(xì)胞呈高柱狀，胞質(zhì)內(nèi)可見大量分泌顆粒，內(nèi)膜下組織疏松，螺旋動(dòng)脈增生明顯，肌層細(xì)胞排列有序，為正常動(dòng)情期小鼠子宮鏡像，未見異常病理改變（圖1）。

3 討論

鹿胎由紅參、當(dāng)歸、益母草、熟地黃、丹參、香附、龜甲、地骨皮、延胡索、白術(shù)、肉桂、術(shù)香、小茴香、赤芍、甘草、續(xù)斷、蒲黃、川芎、牛膝、鹿茸（去毛）、茯苓、鹿胎粉、阿膠精制而成［2，3］，用于補(bǔ)氣、養(yǎng)血、復(fù)脈、調(diào)經(jīng)散寒、理氣活血、消炎止痛，用于婦女氣血不足，虛弱羸瘦，月經(jīng)不調(diào)，行經(jīng)腹痛，寒濕帶下［4，5］。鹿胎軟膠囊為諾氏制藥（中國(guó)）有限公司在現(xiàn)有組方鹿胎膠囊的基礎(chǔ)上開發(fā)的軟膠囊新型制劑。鹿胎膠囊更改為軟膠囊劑型后，用法相應(yīng)更改為2次/d，每次3粒，相比鹿胎膠囊3次/d、每次5粒的用法，在保證每日服用生理藥量不變的情況下，減少了每日服藥次數(shù)及單次服藥量，藥品使用更為方便；鹿胎軟膠囊通過改進(jìn)制劑工藝在原組方的基礎(chǔ)上，根據(jù)各味中藥所含的有效成分不同，分別采用水提、醇提、濃縮干燥后得相應(yīng)的浸膏，并在浸膏中添加等量的菜油與適量（約2%～4%）的蜂蠟作為輔料制成軟膠囊內(nèi)容物，增加了部分有效成分的溶出度，一定程度上改善有效成分的吸收［6，7］。

國(guó)內(nèi)大部分對(duì)鹿胎類藥品研究很少利用動(dòng)物模型進(jìn)行具體劑量、不同劑量的藥效對(duì)比研究。本次實(shí)驗(yàn)通過擬臨床給藥途徑與方法，對(duì)雌性小鼠分別口服給予高、低劑量的鹿胎軟膠囊制劑和鹿胎膠囊制劑，30d后觀察兩種制劑對(duì)醋酸誘導(dǎo)腹腔炎性疼痛及縮宮素誘發(fā)的痛經(jīng)性疼痛作用及差異，并對(duì)子宮組織病理學(xué)改變予以判讀，結(jié)果表明：鹿胎軟膠囊和鹿胎膠囊均可劑量依賴性緩解醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔炎性疼痛及縮宮素誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性痛經(jīng)病理模型小鼠的疼痛反應(yīng)，二者劑量相同時(shí)作用強(qiáng)度無明顯差異；各投藥組小鼠子宮組織病理學(xué)未見改變。該作用結(jié)果可為其臨床應(yīng)用提供良好的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］楊桂芹，張維睿，鄒興淮.鹿胎制劑對(duì)老年雌性大鼠血清雌二醇濃度和生殖腺指數(shù)的影響［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2008，44（12）：32-33.

［2］朱亞紅.鹿胎膏在人工流產(chǎn)術(shù)后的應(yīng)用［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18（32）：4006.

［3］李毅敏，周連發(fā)，王士賢.復(fù)方益母草膏治療痛經(jīng)藥理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中成藥，2004，26（4）：311-314.

［4］唐旭亮，周愛香，李洪梅，等.內(nèi)異痛經(jīng)顆粒的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（2）：48-51.

［5］凌艷，劉麗華.益母定痛顆粒對(duì)動(dòng)物痛經(jīng)模型的治療作用［J］.實(shí)用全科醫(yī)學(xué)，2002，30（4）：285-286.

［6］李晨，方坤泉，陳水英，等.抗痛經(jīng)沖劑藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2002，17（1）：17-19.

［7］韓大慶，周丹，劉偉，等.三七口服液對(duì)痛經(jīng)的作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2004，20（2）：40-41.

（編輯武玉欣，英文編輯劉寶林）

Comparative Study on Effects of Lutai Capsule and Soft Capsule on Relieving Pains of Abdominal Inflammation and Dysmenorrhea of Mice

WEI Li，LIU Dan
（Department of Obstetrics and Gynecology，The Forth Affiliated Hospital，China Medical University，Shenyang 110032，China）

ObjectiveTo investigate the effects of Lutai capsule and soft capsule on relieving pains and to provide experimental evidence for clinical application of different preparations of deer’s placenta.MethodsBy imitating clinical administration route and method，the mice were taken orally respectively high and low dose of Lutai capsule and Lutai soft capsule.Thirty days later，we observed and compared the effects of two preparations on relieving abdominal inflammatory pain caused by acetic acid and dysmenorrhea induced by oxytocin and on uterus histopathology.ResultsCompared to the pain model group，both the high dosage and low dosage of Lutai can significantly reduce the body torsion speed of inflammatory pain of mice models induced by acetic acid and the dysmenorrhea mice models induced by oxytocin.，and the analgesic effect of the high and low dosage groups is different.ConclusionBoth Lutai capsule and Lutai soft capsule could relieve different types of pathological pain reactions and have no effect on uterus histopathology of mice.

lutai；mice；pains of abdominal inflammation；pains of dysmenorrhea

R711.32

A

0258-4646（2011）05-0387-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1814.012

http：//www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1814.012.html

國(guó)家重大新藥創(chuàng)制平臺(tái)（2009ZX09301-012）

魏力（1962-），女，教授，碩士.E-mail：cmu4h_wl@126.com

2011-01-03

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2011-05-1815：25