桑皮素對II型糖尿病模型鼠降血糖作用的研究

金曉明 ，魏 云 ，楊世平

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208；2.湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所，湖南 長沙 410014）

桑皮素對II型糖尿病模型鼠降血糖作用的研究

金曉明1，魏 云2，楊世平2

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208；2.湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所，湖南 長沙 410014）

目的 探討桑皮素對II型糖尿病模型鼠血糖、胰島素、糖化血紅蛋白和糖耐量的影響。方法 根據(jù)中藥新藥研究指南（降糖藥）藥效學實驗要求，選擇正常小鼠（KM小鼠），自發(fā)性糖尿病小鼠（NOD小鼠）及鏈脲霉素加高熱飼料導致的II型糖尿病大鼠，灌胃給予不同劑量的桑皮素，研究其對血糖、胰島素、糖化血紅蛋白的影響。結果（1）桑皮素50.0、25.0、12.5 mg/kg連續(xù)灌胃給藥14 d后，對正常小鼠血糖無明顯影響，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；對NOD小鼠血糖有明顯的降低作用，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（2）桑皮素30.0、15.0、7.5 mg/kg連續(xù)灌胃給藥14 d，對鏈脲霉素加高熱飼料導致的II型糖尿病大鼠有明顯作用，改善糖尿病動物的糖耐量，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；15.0、30 mg/kg組動物血糖濃度、胰島素和糖化血紅蛋白均降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 桑皮素對II型糖尿病模型大鼠血糖有明顯的降低作用。

桑皮素；II型糖尿??；大鼠；血糖；胰島素；糖化血紅蛋白

桑皮素由?？浦参?Morus alba L.)白桑的根皮提取、精制而成。具有清熱潤肺、滋陰補虛、生津止渴的功效，主治陰虛肺熱II型糖尿病。本實驗旨在對桑皮素主要藥效學進行研究，探討其對II型糖尿病模型鼠血糖的影響?，F(xiàn)將實驗方法及結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 按照新藥研究指導原則選用正常小鼠（KM），自發(fā)性糖尿病小鼠（NOD）和化學試劑損傷的模型大鼠作降血糖試驗。故選用下列鼠作實驗研究。KM小鼠：由魯抗醫(yī)藥集團動物中心提供，合格證號：魯動質(zhì)字200008001；Wistar大鼠：山東大學動物中心提供，合格證號：魯動質(zhì)字20001003。NOD小鼠，雌性，7月齡，北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部提供，許可證編號：SCXK(京)2002-0001。實驗動物環(huán)境設施合格證號：魯動環(huán)字200001012號。

1.1.2 藥物及試劑 桑皮素，由湖南普生制藥有限公司提供，純度85%，批號：20000912；拜唐蘋（50 mg/片×15×2）， 由拜耳醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：102241；格列齊特片（80 mg/片×60），山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所制藥廠生產(chǎn)，批號：000204；血糖試劑盒：中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：240181；氯化鈉注射液（500 mL×0.9%），濟南三九益民制藥有限責任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：2002021007；鏈脲霉素（streptoxicin），Sigma 公司生產(chǎn)，日本制藥株式會社分裝，純度99.8%；所用藥物均用氯化鈉注射液配成所需濃度。

1.1.3 儀器 離心沉淀機，LXJ-Ⅱ型，上海第二分析儀器廠生產(chǎn)；lab-star全自動生化分析儀，南京桃源醫(yī)療器械開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.1.4 基礎飼料 由山東大學實驗動物中心提供，高熱量飼料由基礎鼠料加蔗糖、煉豬油和雞蛋充分混勻后，用攪肉機成形、烤熟后用。

1.2 方法［1-4］

1.2.1 動物分組 對KM小鼠、NOD小鼠和Wistar大鼠分別分組如下：（1）KM小鼠 選取體質(zhì)量19～22 g的健康KM小鼠60只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機分成6組，正常組、格列齊特組（80 mg/kg）、拜唐蘋組（25 mg/kg）、桑皮素 50.0、25.0、12.5 mg/kg（下簡稱高、中、低劑量組），每組10只。格列齊特組動物在測血糖前2 d開始給藥，1次/d，共3次。其他組分別灌胃給予氯化納（N.S）、拜唐蘋和桑皮素連續(xù)給藥14 d。各組動物給藥容積均為0.2 mL/10 g。末次藥后1 h由小鼠眼球取血，測空腹血糖值。（2）NOD小鼠 取NOD雌性小鼠50只，按體質(zhì)量隨機分為5組，每組10只，分別為正常組、桑皮素高、中、低劑量組及拜唐蘋組。分別灌胃給予N.S，拜唐蘋25 mg/kg，桑皮素50.0、25.0、12.5 mg/kg，給藥容積為 0.2 mL/10 g，連續(xù)給藥14 d后由眼球取血，測小鼠給藥前后空腹血糖值。（3）Wistar大鼠。取健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量250～300 g，取10只作為正常組，給予基礎飼料；其余50只造模。

1.2.2 模型制備及給藥方法［1-4］將造模用的Wistar大鼠禁食12 h（不禁水），腹腔內(nèi)注射鏈脲霉素30 mg/kg（0.1 mol/L檸檬酸pH 4.2配制成1%溶液，注射時冰浴），連續(xù)3 d，末次注射14 d后將大鼠禁食12 h（不禁水），剪尾采血測定血糖，取血糖值高于11.1 mmol/L的大鼠50只，飼以高熱量飼料。8周后造模動物剪尾取血，按血糖值平均分為以下5組：模型對照組，桑皮素高、中、低劑量組及拜唐蘋組，每組10只。分組后，全部給予正常飼料并給藥，連續(xù)4周。給予鏈脲霉素和高熱量飼料后，可見糖尿病造模組動物毛色枯槁，無光澤，動物自發(fā)活動減少，大便稀，有多飲、多尿、多食的癥狀。模型動物血糖、胰島素和糖化血紅蛋白均顯著增高，與正常組比較均有差異，表明低劑量鏈脲霉素注射后給予高熱量飼料引起高血糖和高胰島素血癥，形成了II型糖尿病模型。

正常組與模型組灌胃給予N.S，桑皮素高、中、低劑量分別灌胃給予30.0、15.0、7.5 mg/kg，拜唐蘋組劑量為15.0 mg/kg，各組給藥容量均為10 mL/kg，每日1次按60 kg成人體表面積換算，每日1次。末次藥前大鼠眼眶靜脈竇采血測空腹血糖（0 h），各組動物再分別給藥，1 h后灌胃給予淀粉溶液（4 g/kg），眼眶采血測定給淀粉后0.5、1、2 h的血糖值，血糖含量用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法測定。糖耐量試驗結束第2天繼續(xù)給藥，第3天乙醚麻醉大鼠，腹主動脈取血測定空腹血糖、血清胰島素及糖化血紅蛋白。

1.3 統(tǒng)計學分析

利用SPSS 11.50統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計，所有計量資料以“”表示，單因素方差分析，組間進行兩兩比較。

2 結果

2.1 桑皮素對KM小鼠血糖的影響

桑皮素高、中、低劑量組連續(xù)灌胃給藥14 d后，小鼠血糖稍有降低，但與正常組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。陽性對照藥拜唐蘋對正常小鼠血糖也無明顯影響。格列齊特80.0 mg/kg給藥后，血糖下降，與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結果見表1。

2.2 桑皮素對II型糖尿病大鼠糖耐量的影響

造模后，各組動物血糖明顯升高，各時間點與正常組比較均有顯著性差異。桑皮素給藥4周后，對大鼠血糖有明顯的降低作用，0 h與模型組比較，15.0、30.0 mg/kg組差異有統(tǒng)計學意義，7.5 mg/kg組有顯著性差異；給予淀粉后，桑皮素組動物血糖明顯低于模型組動物，7.5 mg/kg組給藥后0.5、2 h與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義，7.5 mg/kg組給藥后1 h和15.0、30.0 mg/kg組藥后0.5～2 h血糖值與正常組比，可明顯改善糖尿病動物的糖耐量，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。陽性對照藥拜唐蘋藥后也有明顯的降血糖作用，各時間點血糖值均明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義。結果見表2。

表1 桑皮素對KM小鼠血糖的影響 （，mmol/L）

表1 桑皮素對KM小鼠血糖的影響 （，mmol/L）

注：與正常組比較*P<0.01。

組 別正常組高劑量組中劑量組低劑量組拜唐蘋格列齊特n 10 10 10 10 10 10劑量(mg/kg)—50.0 25.0 12.5 25.0 80.0空腹血糖值6.48±1.02 6.14±0.73 6.56±0.98 6.59±0.73 6.42±0.84 4.73±0.72*

2.3 桑皮素對II型糖尿病大鼠血糖、胰島素及糖化血紅蛋白的影響

給予桑皮素前，桑皮素各劑量組血糖值和模型組比較差異無統(tǒng)計學意義。連續(xù)給藥4周后，桑皮素各劑量組血糖濃度明顯降低，15.0、30.0 mg/kg組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義，7.5 mg/kg組與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義。但拜唐蘋給藥后有降低血糖濃度的作用，與正常組和模型組比較均差異有統(tǒng)計學意義。

桑皮素給藥后對高胰島素血癥有抑制作用，30.0 mg/kg組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義。桑皮素對糖化血紅蛋白的升高也有明顯的拮抗作用，15.0、30.0 mg/kg組與模型組比較有顯著性差異，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。但拜唐蘋給藥有一定的降低胰島素水平的趨勢，但與正常組比較差異無統(tǒng)計學意義，對糖化血紅蛋白的升高有明顯的抑制作用，與正常組比較有極顯著性差異。結果見表3。

2.4 桑皮素對NOD小鼠血糖和胰島素的影響

桑皮素連續(xù)灌胃給藥14 d后，對NOD小鼠血糖有明顯的降低作用，25.0、50.0 mg/kg組與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義，12.5 mg/kg組與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。拜唐蘋與正常組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

桑皮素連續(xù)灌胃給藥14 d，對NOD小鼠的低胰島素狀態(tài)有一定的改善作用，25.0、50.0 mg/kg組胰島素水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。陽性對照藥拜唐蘋也可升高動物的胰島素水平，與正常組比較有顯著性差異。結果見表4。

表2 桑皮素對II型糖尿病大鼠糖耐量的影響 （）

表2 桑皮素對II型糖尿病大鼠糖耐量的影響 （）

注：與正常組比較△P<0.05，△△P<0.01；與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

血糖值（mmol/L）組 別正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組拜唐蘋n 劑量（mg/kg）10 9 10 10 9 10— —30.0 15.0 7.5 15.0 0 h 6.84±0.34 18.71±3.61△△10.68±1.96**△△11.88±1.99**△△15.143±2.43*△△12.09±2.71**△△0.5 h 10.28±1.12 29.78±2.21△△15.09±3.57**△△17.82±3.42**△△26.29±2.94*△△16.82±2.94**△△1 h 8.43±1.46 29.50±1.55△△14.44±3.77**△△15.91±3.19**△△24.30±3.81**△△15.60±2.70**△△2 h 7.08±0.29 26.20±1.77△v 13.23±2.81**△△15.12±2.70**△△21.98±4.40*△14.48±2.15**△△

表3 桑皮素對II型糖尿病大鼠血糖、胰島素及糖化血紅蛋白的影響 （）

表3 桑皮素對II型糖尿病大鼠血糖、胰島素及糖化血紅蛋白的影響 （）

注：與正常組比較△P<0.01；與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

血糖值（mmol/L）組 別正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組拜唐蘋n 劑量（mg/kg）10 9 10 10 9 10— —30.0 15.0 7.5 15.0藥前值6.26±0.84 16.84±4.41△16.51±3.92△16.47±3.44△16.83±4.74△16.35±5.84△藥后值6.30±1.10 19.32±4.04△10.58±2.36**△12.03±1.98**△15.42±2.30*△12.26±2.75**△胰島素（mμ/L）26.81±13.43 74.43±13.13△59.04±15.71*△66.44±10.88△72.24±9.59△62.53±16.25△糖化血紅蛋白（%）3.12±0.91 8.44±0.53△6.55±0.53**△6.46±0.45**△7.90±0.45△6.48±0.71**△

表4 桑皮素對NOD小鼠血糖和胰島素的影響 （）

表4 桑皮素對NOD小鼠血糖和胰島素的影響 （）

注：與正常組比較*P<0.05，**P<0.01。

組 別正常組高劑量組中劑量組低劑量組拜唐蘋0891 0 n91劑量(mg/kg)—50.0 25.0 12.5 25.0空腹血糖值(mmol/L)18.88±4.65 11.46±3.04**11.43±2.75**14.11±3.59*13.47±3.24**胰島素（mμ/L）4.48±2.13 9.14±3.09**10.04±3.21**5.54±2.94 6.39±1.85*

3 討論

本試驗觀察了桑皮素對KM小鼠血糖、NOD小鼠血糖和胰島素以及II型糖尿病模型大鼠糖耐量、血糖、胰島素和糖化血紅蛋白的影響。試驗結果表明：（1）桑皮素各劑量組連續(xù)灌胃給藥14 d，對KM小鼠血糖無明顯影響；（2）桑皮素各劑量組連續(xù)灌胃給藥14 d，對鏈脲霉素加高熱飼料導致的II型糖尿病大鼠有明顯的治療作用，15.0、30 mg/kg組動物血糖濃度、胰島素和糖化血紅蛋白均降低，與模型組比有顯著性或極顯著性差異。同時，桑皮素各劑量組可明顯改善糖尿病動物的糖耐量；（3）桑皮素連續(xù)灌胃給藥14 d，對NOD小鼠血糖有明顯的降低作用，同時可顯著升高動物胰島素水平。

[1]蔡文就,熊曼琪,朱章志，等.實驗性NIDDM大鼠模型及其胰島素抵抗的初步研究[J].廣州中醫(yī)藥大學學報,1997,14（2）:87-91.

[2]劉學政,蕭 鴻.鏈脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的研究[J].錦州醫(yī)學院學報,2001，22(4)：11-13.

[3]徐淑云.藥理實驗方法學（第3版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2006:53-58.

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局，中藥新藥研究指南（藥學、藥理學、毒理學）［S］1994：84.

（本文編輯 彭芝配）

Experimental study of mulberrin on blood glucose of Type II diabetes model rats

JIN Xiao－ming，WEI Yun，YANG Shi－ping
（1.Hunan University of traditional Chinese medicine， Hunan Changsha 410007；2.Pharmaceutical Industry Research Institute in Hunan， Changsha 410014）

Objective The experiment had investigated the results by using mulberrin on blood glucose，insulin，glycated hemoglobin， glucose tolerance of Type II diabetes model rats.Method According to Chinese herbal medicine research guide （oral） pharmacodynamics experiment demands， choose the normal mice （KM mice）， spontaneous diabetic mice （NOD mice）and chain fosomycin heightening urea to heat feed type II diabetes rats，fill the stomach give differentdoses ofmulberry element， research on the blood glucose， insulin， glycated hemoglobin influence.Results 1.The concentration of blood glucose of regular lab rats has no visibly changed（P＞0.05）after using mulberrin of 50.0， 25.0， 12.5 mg／kg by oral administration for 14 days.By contrast， the blood glucose were obviously lower and rates of Insulin were obviously higher（P＜0.05） in NOD rats.2.The concentration of blood glucose of has reduced obviously after using mulberrin of 30.0， 15.0， 7.5 mg／kg）.Compare with the regular group， the rates of Insulin and Glycosylated Hemoglobin were obviously lower（P＜0.05）after using mulberrin of 30，15 mg／kg by oral administration for 14 days.Conclusion Mulberrin has significantly reduced role on blood sugar of type II diabetes model of rats.

mulberrin； Type II diabetes；hamster； blood glucose； insulin； Glycated hemoglobin

金曉明（1961-），男，浙江東陽人，工學碩士，講師，主要研究方向：實驗動物學。

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.05.008.026.03

2011－03－01

湖南省科技廳科研條件創(chuàng)新項目［0C2513］。