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    微柱凝膠法在不規(guī)則抗體篩檢中的應(yīng)用

    2011-01-26 05:41:28李建武
    中國醫(yī)藥科學(xué) 2011年10期
    關(guān)鍵詞:檢測(cè)

    戴 芳 李建武

    (北京大學(xué)深圳醫(yī)院輸血科,廣東深圳 518036)

    不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner法則的血型抗體,即血清中抗A、抗B以外的其他血型抗體。此類抗體可引起交叉配血困難及遲發(fā)性免疫性溶血性輸血反應(yīng),有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致急性溶血性輸血反應(yīng)。輸血前不規(guī)則抗體篩檢有助于血液選擇,從而有充分的時(shí)間來選擇不含有針對(duì)某抗體的響應(yīng)抗原的血液,防止因?yàn)檩斪⒑心晨贵w相應(yīng)抗原的血液而引起溶血性輸血反應(yīng),保證輸血安全。筆者采用微柱凝膠法對(duì)筆者所在醫(yī)院申請(qǐng)輸血的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查,對(duì)陽性結(jié)果利用譜細(xì)胞同時(shí)采用微柱凝膠法和改良聚凝胺法進(jìn)行鑒定,現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取筆者所在醫(yī)院2007年2月~2010年2月各科室申請(qǐng)輸血的住院患者3279例,其中男1609例,女1670例,年齡1~85歲。留取受檢者不抗凝管靜脈血4mL。

    1.2 儀器和試劑

    西班牙Diana公司提供的全自動(dòng)配血系統(tǒng)儀器、微柱凝膠孵育器、微柱凝膠離心機(jī)、低離子溶液和微柱凝膠Coombs卡;上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供的篩選細(xì)胞Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)和Ⅲ號(hào)及鑒定譜細(xì)胞;珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供的凝聚胺試劑盒。

    1.3 檢測(cè)方法

    1.3.1 微柱凝膠法不規(guī)則抗體篩查 啟動(dòng)全自動(dòng)配血系統(tǒng)儀器,雙擊操作系統(tǒng)圖標(biāo)。先將篩選細(xì)胞Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)和Ⅲ號(hào)用低離子溶液按1∶5稀釋成0.8%濃度,放置于儀器試劑槽中。然后取出微柱凝膠Coombs卡,編號(hào)后放置在儀器卡欄上。把標(biāo)本編號(hào),離心后放置在標(biāo)本槽中。試劑、標(biāo)本放置好后,關(guān)門,在電腦中點(diǎn)擊選擇不規(guī)則抗體篩查程序,程序啟動(dòng)后編號(hào),儀器自動(dòng)稀釋、加樣、溫育、離心及結(jié)果判讀。

    1.3.2 微柱凝膠法不規(guī)則抗體鑒定 篩選為陽性的標(biāo)本用1~11號(hào)譜細(xì)胞采用手工微柱凝膠法進(jìn)行抗體鑒定。先將11套鑒定譜細(xì)胞對(duì)應(yīng)加入標(biāo)記有1~11的微柱凝膠卡中各50μL,然后再各加入被檢血清25μL,同時(shí)取一孔加入受檢者自身紅細(xì)胞和血清作為自身對(duì)照;接著將Coombs微柱凝膠卡置于微柱凝膠孵育器內(nèi)孵育15min;將Coombs微柱凝膠卡置于微柱凝膠離心機(jī)內(nèi),以1000r/min離心10min。取出Coombs微柱凝膠卡,根據(jù)微柱凝膠卡結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)判讀并記錄結(jié)果,最后對(duì)照譜細(xì)胞反應(yīng)格局表判斷出不規(guī)則抗體特異性類型。

    1.3.3 改良凝聚胺法不規(guī)則抗體鑒定 篩選為陽性的標(biāo)本用1~11號(hào)譜細(xì)胞同時(shí)采用改良凝聚胺法進(jìn)行抗體鑒定以作比較。先取11支小試管編號(hào),各加被檢血清2滴,然后每管對(duì)應(yīng)各加入1~11號(hào)譜細(xì)胞1滴,另取一支試管做自身對(duì)照;接著各管加LIM 0.65mL,混勻后再各加Polybrene溶液2滴,并混勻;用離心機(jī)3400r/min離心10s,然后把上清液倒掉,不要瀝干,讓管底殘留約0.1mL液體輕輕搖動(dòng)試管,可看到管底有凝集;最后加入Resuspending溶液2滴,輕輕搖動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果,有凝集判為陽性,無凝集為陰性,根據(jù)譜細(xì)胞反應(yīng)格局表判斷出不規(guī)則抗體特異性類型。

    表1 不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布(n)

    2 結(jié)果

    2.1 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

    經(jīng)檢驗(yàn),3279例申請(qǐng)輸血者中檢出不規(guī)則抗體陽性11例,陽性率為0.34%。其中男3例(27.27%),女8例(72.73%),有輸血或妊娠既往史9例,無輸血或妊娠既往史2例。

    2.2 不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果

    手工微柱凝膠法與改良凝聚胺法相比,兩者鑒定結(jié)果一致。不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布見表1。

    3 討論

    受血者體內(nèi)存在不規(guī)則抗體接受含相應(yīng)抗原血液制品時(shí),可能發(fā)生嚴(yán)重的免疫溶血性輸血反應(yīng),重則危及性命[1]。不規(guī)則抗體的產(chǎn)生在輸血人群中所占比例不高,但它是引起遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因。如何對(duì)血源進(jìn)行抗體檢測(cè),選擇合適的血液輸注,從而確保輸血安全變得至關(guān)重要。我國衛(wèi)生部臨床輸血技術(shù)規(guī)范要求對(duì)交叉配血不合時(shí),對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者必須作不規(guī)則抗體篩選實(shí)驗(yàn)[2]。歐美地區(qū)大部分發(fā)達(dá)國家已經(jīng)對(duì)所有獻(xiàn)血員及受血者均進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查工作,以避免由于不規(guī)則抗體導(dǎo)致的輸血不良反應(yīng)發(fā)生。

    近年來發(fā)展起來的微柱凝膠技術(shù)(MGT)是在經(jīng)典的抗人蛋白試驗(yàn)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型檢測(cè)方法,被廣泛應(yīng)用于血型鑒定、交叉配血及不規(guī)則抗體篩查中。微柱凝膠試驗(yàn)是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠介質(zhì)中發(fā)生聚集反應(yīng),利用微柱凝膠的過濾作用和免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng),通過離心技術(shù)將發(fā)生聚集反應(yīng)的紅細(xì)胞阻滯于凝膠之內(nèi),未聚集的紅細(xì)胞則通過微孔過濾到達(dá)微柱的底部從而區(qū)分有無聚集[3]。微柱凝膠技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于全自動(dòng)配血、血型鑒定或不規(guī)則抗體篩查等試驗(yàn),具有靈敏度高,結(jié)果準(zhǔn)確,便于自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。本研究在不規(guī)則抗體鑒定時(shí)還采用了目前技術(shù)成熟的凝聚胺法進(jìn)行比較,檢測(cè)結(jié)果具有一致性。

    本研究中,不規(guī)則抗體篩查陽性率為0.34%,說明不規(guī)則抗體在人群中的檢測(cè)率比較低,與國內(nèi)學(xué)者曹榮祎等報(bào)道相符[4]。被檢出的11例不規(guī)則抗體陽性患者中9例有輸血史或妊娠史,提示反復(fù)輸血或多次妊娠可以使患者受到免疫刺激而產(chǎn)生不規(guī)則抗體。因此,輸血前對(duì)有輸血史、妊娠史的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查非常必要,有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體并可在配血前鑒定此抗體,以獲得充足的時(shí)間來選擇缺乏相應(yīng)抗原的相配合的供者,確保輸血安全。不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果提示大部分不規(guī)則抗體屬于Rh血型系統(tǒng),Rh血型系統(tǒng)是紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的一個(gè)系統(tǒng),Rh血型系統(tǒng)相應(yīng)抗原抗體在體內(nèi)發(fā)生反應(yīng)常可導(dǎo)致溶血反應(yīng)。因此,對(duì)不規(guī)則抗體篩查陽性的受血者,進(jìn)一步做不規(guī)則抗體鑒定后選擇性輸血具有重要的臨床意義。

    [1] 王培華. 輸血技術(shù)學(xué)[M]. 第2版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:222-225.

    [2] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 臨床輸血技術(shù)規(guī)范[S]. 2000-10-01.

    [3] 武峰,劉亞玲. 微柱凝集技術(shù)在血型免疫學(xué)相關(guān)檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].臨床血液學(xué)雜志,2008,21(1):101-104.

    [4] 曹榮祎,劉鳳華,于洪敏. 微柱凝集檢測(cè)不規(guī)則抗體的臨床應(yīng)用[J].臨床血液學(xué)雜志,2010,12(2):149-151.

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