微柱凝膠法在不規(guī)則抗體篩檢中的應(yīng)用

戴 芳 李建武

（北京大學(xué)深圳醫(yī)院輸血科，廣東深圳 518036）

不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner法則的血型抗體，即血清中抗A、抗B以外的其他血型抗體。此類抗體可引起交叉配血困難及遲發(fā)性免疫性溶血性輸血反應(yīng)，有時還會導(dǎo)致急性溶血性輸血反應(yīng)。輸血前不規(guī)則抗體篩檢有助于血液選擇，從而有充分的時間來選擇不含有針對某抗體的響應(yīng)抗原的血液，防止因為輸注含有某抗體相應(yīng)抗原的血液而引起溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。筆者采用微柱凝膠法對筆者所在醫(yī)院申請輸血的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，對陽性結(jié)果利用譜細(xì)胞同時采用微柱凝膠法和改良聚凝胺法進(jìn)行鑒定，現(xiàn)將檢測結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院2007年2月～2010年2月各科室申請輸血的住院患者3279例，其中男1609例，女1670例，年齡1～85歲。留取受檢者不抗凝管靜脈血4mL。

1.2 儀器和試劑

西班牙Diana公司提供的全自動配血系統(tǒng)儀器、微柱凝膠孵育器、微柱凝膠離心機(jī)、低離子溶液和微柱凝膠Coombs卡；上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供的篩選細(xì)胞Ⅰ號、Ⅱ號和Ⅲ號及鑒定譜細(xì)胞；珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供的凝聚胺試劑盒。

1.3 檢測方法

1.3.1 微柱凝膠法不規(guī)則抗體篩查 啟動全自動配血系統(tǒng)儀器，雙擊操作系統(tǒng)圖標(biāo)。先將篩選細(xì)胞Ⅰ號、Ⅱ號和Ⅲ號用低離子溶液按1∶5稀釋成0.8%濃度，放置于儀器試劑槽中。然后取出微柱凝膠Coombs卡，編號后放置在儀器卡欄上。把標(biāo)本編號，離心后放置在標(biāo)本槽中。試劑、標(biāo)本放置好后，關(guān)門，在電腦中點擊選擇不規(guī)則抗體篩查程序，程序啟動后編號，儀器自動稀釋、加樣、溫育、離心及結(jié)果判讀。

1.3.2 微柱凝膠法不規(guī)則抗體鑒定 篩選為陽性的標(biāo)本用1～11號譜細(xì)胞采用手工微柱凝膠法進(jìn)行抗體鑒定。先將11套鑒定譜細(xì)胞對應(yīng)加入標(biāo)記有1～11的微柱凝膠卡中各50μL，然后再各加入被檢血清25μL，同時取一孔加入受檢者自身紅細(xì)胞和血清作為自身對照；接著將Coombs微柱凝膠卡置于微柱凝膠孵育器內(nèi)孵育15min；將Coombs微柱凝膠卡置于微柱凝膠離心機(jī)內(nèi)，以1000r/min離心10min。取出Coombs微柱凝膠卡，根據(jù)微柱凝膠卡結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)判讀并記錄結(jié)果，最后對照譜細(xì)胞反應(yīng)格局表判斷出不規(guī)則抗體特異性類型。

1.3.3 改良凝聚胺法不規(guī)則抗體鑒定 篩選為陽性的標(biāo)本用1～11號譜細(xì)胞同時采用改良凝聚胺法進(jìn)行抗體鑒定以作比較。先取11支小試管編號，各加被檢血清2滴，然后每管對應(yīng)各加入1～11號譜細(xì)胞1滴，另取一支試管做自身對照；接著各管加LIM 0.65mL，混勻后再各加Polybrene溶液2滴，并混勻；用離心機(jī)3400r/min離心10s，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1mL液體輕輕搖動試管，可看到管底有凝集；最后加入Resuspending溶液2滴，輕輕搖動試管混合并同時觀察結(jié)果，有凝集判為陽性，無凝集為陰性，根據(jù)譜細(xì)胞反應(yīng)格局表判斷出不規(guī)則抗體特異性類型。

表1 不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布（n）

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

經(jīng)檢驗，3279例申請輸血者中檢出不規(guī)則抗體陽性11例，陽性率為0.34%。其中男3例（27.27%），女8例（72.73%），有輸血或妊娠既往史9例，無輸血或妊娠既往史2例。

2.2 不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果

手工微柱凝膠法與改良凝聚胺法相比，兩者鑒定結(jié)果一致。不規(guī)則抗體陽性患者抗體特異性分布見表1。

3 討論

受血者體內(nèi)存在不規(guī)則抗體接受含相應(yīng)抗原血液制品時，可能發(fā)生嚴(yán)重的免疫溶血性輸血反應(yīng)，重則危及性命[1]。不規(guī)則抗體的產(chǎn)生在輸血人群中所占比例不高，但它是引起遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因。如何對血源進(jìn)行抗體檢測，選擇合適的血液輸注，從而確保輸血安全變得至關(guān)重要。我國衛(wèi)生部臨床輸血技術(shù)規(guī)范要求對交叉配血不合時，對有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者必須作不規(guī)則抗體篩選實驗[2]。歐美地區(qū)大部分發(fā)達(dá)國家已經(jīng)對所有獻(xiàn)血員及受血者均進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查工作，以避免由于不規(guī)則抗體導(dǎo)致的輸血不良反應(yīng)發(fā)生。

近年來發(fā)展起來的微柱凝膠技術(shù)（MGT）是在經(jīng)典的抗人蛋白試驗基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型檢測方法，被廣泛應(yīng)用于血型鑒定、交叉配血及不規(guī)則抗體篩查中。微柱凝膠試驗是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠介質(zhì)中發(fā)生聚集反應(yīng)，利用微柱凝膠的過濾作用和免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)，通過離心技術(shù)將發(fā)生聚集反應(yīng)的紅細(xì)胞阻滯于凝膠之內(nèi)，未聚集的紅細(xì)胞則通過微孔過濾到達(dá)微柱的底部從而區(qū)分有無聚集[3]。微柱凝膠技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于全自動配血、血型鑒定或不規(guī)則抗體篩查等試驗，具有靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，便于自動化、標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點。本研究在不規(guī)則抗體鑒定時還采用了目前技術(shù)成熟的凝聚胺法進(jìn)行比較，檢測結(jié)果具有一致性。

本研究中，不規(guī)則抗體篩查陽性率為0.34%，說明不規(guī)則抗體在人群中的檢測率比較低，與國內(nèi)學(xué)者曹榮祎等報道相符[4]。被檢出的11例不規(guī)則抗體陽性患者中9例有輸血史或妊娠史，提示反復(fù)輸血或多次妊娠可以使患者受到免疫刺激而產(chǎn)生不規(guī)則抗體。因此，輸血前對有輸血史、妊娠史的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查非常必要，有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體并可在配血前鑒定此抗體，以獲得充足的時間來選擇缺乏相應(yīng)抗原的相配合的供者，確保輸血安全。不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果提示大部分不規(guī)則抗體屬于Rh血型系統(tǒng)，Rh血型系統(tǒng)是紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的一個系統(tǒng)，Rh血型系統(tǒng)相應(yīng)抗原抗體在體內(nèi)發(fā)生反應(yīng)常可導(dǎo)致溶血反應(yīng)。因此，對不規(guī)則抗體篩查陽性的受血者，進(jìn)一步做不規(guī)則抗體鑒定后選擇性輸血具有重要的臨床意義。

[1] 王培華. 輸血技術(shù)學(xué)[M]. 第2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：222-225.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 臨床輸血技術(shù)規(guī)范[S]. 2000-10-01.

[3] 武峰，劉亞玲. 微柱凝集技術(shù)在血型免疫學(xué)相關(guān)檢測中的應(yīng)用進(jìn)展[J].臨床血液學(xué)雜志，2008，21（1）：101-104.

[4] 曹榮祎，劉鳳華，于洪敏. 微柱凝集檢測不規(guī)則抗體的臨床應(yīng)用[J].臨床血液學(xué)雜志，2010，12（2）：149-151.