藥用植物虎皮楠分泌細(xì)胞的觀察

陳倩倩， 唐建陽(yáng)

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所， 福建 福州 350003)

自然界中能夠分泌乳汁的植物極為普遍，植物中的各種分泌細(xì)胞、分泌道、分泌腺起著隔離并貯存乳汁的作用。植物乳汁是植物的次生代謝產(chǎn)物，植物的次生代謝及其產(chǎn)物在植物與環(huán)境互作和整個(gè)生命活動(dòng)中行使著重要的功能。它們構(gòu)成植物體系的一部分，參與植物的逆境脅迫反應(yīng)，在植物防御中起著重要作用[1]。植物乳汁作為植物次生代謝產(chǎn)物，具有抑菌抗蟲(chóng)作用，許多植物的乳汁還具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

虎皮楠(Daphniphyllumoldhami)系金縷梅綱交讓木屬植物，能夠分泌乳汁，含有生物堿、黃酮和三萜等成分，主要化學(xué)成分是生物堿類(lèi)[2]。目前從該科植物中分離到的生物堿已超過(guò)120種[3-6]。該科植物主要有愈合和消炎的作用，可以用來(lái)治療哮喘、風(fēng)濕、發(fā)熱、流行性感冒、腸胃炎、濕疹等，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖也具有明顯的抑制作用[7-8]。杜仲(Eucommiaulmoides)產(chǎn)生杜仲膠的分泌細(xì)胞稱(chēng)為含膠細(xì)胞，田蘭馨等于1990年首次經(jīng)過(guò)變性處理對(duì)杜仲含膠細(xì)胞進(jìn)行了觀察[9]。但目前尚未有虎皮楠分泌細(xì)胞的相關(guān)研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以杜仲含膠細(xì)胞為對(duì)照，對(duì)虎皮楠的分泌細(xì)胞分別作變性和不變性處理，觀察細(xì)胞分布、形態(tài)等生物學(xué)特征，為虎皮楠乳汁相關(guān)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

選取生長(zhǎng)健壯的虎皮楠和杜仲。

1.2 材料的固定

分別采集虎皮楠和杜仲的幼莖部位，用解剖刀切至約0.5 cm×0.5 cm大小,投入FAA中固定。之后用酒精梯度洗脫至無(wú)色，進(jìn)行下步處理。

1.3 變性

脫水后組織在冰醋酸中浸泡后，放入變性劑(溴-碘-冰醋酸試劑)中室溫處理24 h。不做變性處理的材料放置于乙醇中。

1.4 透明

先將材料置于酒精二甲苯混合液，逐漸過(guò)渡到純二甲苯中，每次處理約1 h。

1.5 制作石蠟切片

組織透蠟后進(jìn)行包埋。包埋好的蠟塊進(jìn)行干燥處理。將蠟塊修至大小、角度合適后，用Leica RM2016切片，切片的厚度為7-10 μm。將明膠粘連劑涂于載玻片中央，蒸餾水展片。

1.6 染色

采用鐵釩-蘇木精染色法染色。

2 結(jié)果與分析

顯微觀察顯示，對(duì)照杜仲含膠細(xì)胞經(jīng)過(guò)變性處理后呈紅褐色(圖1A)，說(shuō)明試驗(yàn)方法是可行的。經(jīng)過(guò)變性處理的虎皮楠分泌細(xì)胞(圖1B)和未變性處理的分泌細(xì)胞都被染成紫紅色(圖2A)。

A.杜仲；B.虎皮楠圖1 經(jīng)變性處理的莖部Figure 1 Stem by denaturalization treatment

2.1 分泌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征

虎皮楠幼莖分泌細(xì)胞的橫斷面多為圓形、橢圓形，少數(shù)為卵狀三角形、三角形、半圓形或不規(guī)則形(圖2A)；縱切面多為不規(guī)則的圓柱形(圖2B)，與周?chē)?xì)胞相比較，分泌細(xì)胞較長(zhǎng)。

2.2 分泌細(xì)胞在組織中的分布情況

從圖2A可以看出，虎皮楠的分泌細(xì)胞分布于形成層與皮層之間的組織，形成層以內(nèi)的韌皮部沒(méi)有發(fā)現(xiàn)分泌細(xì)胞，在皮層薄壁組織和靠近形成層的木質(zhì)部部分，分泌細(xì)胞的密度比較大。

A.橫切圖；B.縱切圖圖2 未經(jīng)變性處理的虎皮楠Figure 2 D.oldhami by no-denaturalization treatment

2.3 分泌細(xì)胞在組織中的密度

相同部位取材，放大100倍視野，在同樣面積內(nèi)(直徑0.5 μm)，觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)變性處理的虎皮楠莖部的分泌細(xì)胞數(shù)目為52；未變性處理的分泌細(xì)胞數(shù)量為52.6。表明變性處理前后分泌細(xì)胞的數(shù)目大致相同。

2.4 乳汁成分在細(xì)胞內(nèi)的分布情況

從縱切圖可以看出，虎皮楠分泌細(xì)胞內(nèi)的乳汁呈顆粒狀，聚集貼近細(xì)胞膜分布(圖2B)；而杜仲分泌細(xì)胞中杜仲膠呈束狀分布于細(xì)胞內(nèi)部(圖1B)?；⑵ら橹姆植济芏群途o實(shí)度遠(yuǎn)小于杜仲膠。

3 結(jié)論

虎皮楠分泌細(xì)胞不需要經(jīng)過(guò)變性處理就可觀察到，細(xì)胞呈圓柱狀，分布于木質(zhì)部中，分泌細(xì)胞內(nèi)的乳汁成分呈顆粒狀分布，與杜仲分泌細(xì)胞(杜仲膠)不同。推測(cè)是由于2種分泌細(xì)胞分泌的乳汁成分不同。植物乳汁的成分復(fù)雜，構(gòu)成乳汁的粗分散相的成分可分為7類(lèi)[10]，杜仲膠是一種以反式異戊二烯聚合物為主的硬性橡膠，虎皮楠乳汁所含成分可能沒(méi)有異戊二烯聚合物，而是其它次生代謝產(chǎn)物。因此，用變性劑處理虎皮楠分泌細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生異戊二烯聚合物所特有的硬化反應(yīng)?；⑵ら姆置诩?xì)胞分布于莖部的皮層與形成層之間，這個(gè)部位也是虎皮楠生物堿含量較為豐富的區(qū)域。研究人員已從虎皮楠科植物中分離鑒定出13種骨架類(lèi)型的生物堿128個(gè)[2,11]，其中僅有少數(shù)生物堿對(duì)淋巴瘤細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)的抑制活性[8]。

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