補骨防疏煎劑對骨質(zhì)疏松癥大鼠血清骨鈣素的影響

冼華，曹文富（重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶市 401331）

補骨防疏煎劑對骨質(zhì)疏松癥大鼠血清骨鈣素的影響

冼華＊，曹文富#（重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶市 401331）

目的：研究補骨防疏煎劑對骨質(zhì)疏松癥大鼠血清骨鈣素（BGP）的影響。方法：采用維甲酸ig復(fù)制大鼠骨質(zhì)疏松模型，酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清BGP，并觀察骨組織形態(tài)學。結(jié)果：高、中、低濃度補骨防疏煎劑可顯著增高模型大鼠血清BGP含量（P＜0.01），明顯改善模型大鼠骨病理形態(tài)變化。結(jié)論：補骨防疏煎劑可明顯改善模型大鼠的骨質(zhì)疏松癥狀，其機制可能與提高血清BGP水平、改善骨病理變化有關(guān)。

補骨防疏煎劑；骨質(zhì)疏松癥；骨鈣素

骨質(zhì)疏松癥是一種嚴重威脅中老年人健康的常見骨疾病。其特征是骨量減少和（或）骨組織結(jié)構(gòu)破壞，進而骨強度降低，骨脆性增加，引起全身性的骨折[1]。臨床多用鈣劑、活性維生素D、性激素、降鈣素、雙磷酸鹽和氟化物等對其進行治療，雖有一定療效，但費用昂貴、副作用大。中藥補骨防疏煎劑是臨床治療骨質(zhì)疏松的經(jīng)驗方，具有較好療效。為了進一步研究該方的作用機制，筆者利用維甲酸誘導(dǎo)制備大鼠骨質(zhì)疏松模型，并用該方進行干預(yù)治療。結(jié)果顯示，該方能提高骨質(zhì)疏松癥大鼠血清骨鈣素（BGP）的含量，刺激成骨，改善骨破壞。

1 材料

1.1 試藥

補骨防疏煎劑由龜板、熟地、當歸、牛膝、淫羊藿等13味中藥組成，全部藥材均購自重慶桐君閣大藥房，經(jīng)重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院中藥教研室鑒定為真品并制為濃縮液，每1mL含生藥2g；維甲酸（山東良福集團制藥有限公司，批號：20090405）；大鼠血清BGP試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.2 動物

六月齡Wistar大鼠72只，♂，體重190～231g，由重慶醫(yī)科大學動物實驗中心提供（動物合格證號：SCXK（渝）200220001）。普通飼料飼養(yǎng)，自由飲水。

2 方法

2.1 模型的復(fù)制

以維甲酸70mg·kg-1ig復(fù)制骨質(zhì)疏松模型大鼠，每天1次，連續(xù)2周。

2.2 分組與給藥

實驗分為4組，即正常對照（生理鹽水10mL·kg-1）、模型對照（生理鹽水10mL·kg-1）和補骨防疏煎劑高、中劑量（40、20g·kg-1）組。復(fù)制模型成功后ig給藥，每天1次，分別于ig藥物后4、8、12周每組各處死6只大鼠。

2.3 標本的收集

麻醉大鼠，股動脈取血，靜置待血液凝固后分離血清，以2500r·min-1離心后取上清液，備用。處死大鼠后，取其L2椎體和左脛骨上端，去除軟組織后置于4%多聚甲醛固定液中24h，10%EDTA/PBS（pH 7.4）脫鈣后常規(guī)切片。

2.4 骨組織形態(tài)學觀察

將骨組織切片行蘇木精-伊紅染色，光學顯微鏡下觀察骨小梁的形態(tài)結(jié)構(gòu)并照相。

2.5 酶聯(lián)免疫法（雙抗體夾心法）測定血清BGP

以標準品1000、500、250、100、50、0ng·mL-1的吸光度（OD）值在坐標紙上作圖，制備標準曲線。將所有OD值減除空白值后根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)BGP含量。

2.6 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)均使用SAS9.0統(tǒng)計分析軟件及Excel完成統(tǒng)計。計量資料以±s表示；多組資料比較經(jīng)檢驗方差齊同，采用單因素方差分析，隨后的組間兩兩比較采用Studentnewmankeuls檢驗。P＜0.05為差異有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 大鼠骨組織形態(tài)學觀察

維甲酸ig 2周后模型對照組大鼠骨體積、骨小梁厚度與數(shù)目均較正常對照組明顯減少，骨小梁間隙明顯增寬，說明模型復(fù)制成功。用補骨防疏煎劑干預(yù)后，高、中劑量補骨防疏煎劑組大鼠骨體積、骨小梁厚度與數(shù)目均較模型對照組增多，小梁間隙變窄，骨小梁明顯增粗，骨小梁表面成骨細胞明顯增多。大鼠骨組織形態(tài)學切片見圖1。

3.2 大鼠血清BGP的變化

復(fù)制模型2周后，模型對照組大鼠血清BGP顯著高于正常組（P＜0.01），表明骨質(zhì)疏松大鼠模型復(fù)制成功。經(jīng)藥物干預(yù)后，補骨防疏煎劑高、中劑量組大鼠血清BGP值顯著高于模型對照組（P＜0.05）。復(fù)制模型2周后的大鼠血清BGP值見表1；藥物干預(yù)后的血清BGP值見表2。

圖1 病理切片（HE，×100）A.正常對照組；B.模型對照組；C.補骨防疏煎劑中劑量組；D.補骨防疏煎劑高劑量組Fig1 Pathological slice（HE，×100）A.normal control group；B.model control group；C.Bugu fangshu decoction medium-dose group；D.Bugu fangshu decoction high-dose group

表1 復(fù)制模型2周后的大鼠血清BGP值Tab1 BGPlevels in serum 2weeks after modeling

表2 藥物干預(yù)后的血清BGP值Tab2 BGPlevels in serum after treatment

4 討論

目前臨床常用于治療骨質(zhì)疏松的藥物雖有一定療效，但存在副作用大、價格昂貴的弊端，而中醫(yī)藥則為臨床治療骨質(zhì)疏松癥提供了新的方法和思路。中醫(yī)文獻沒有明確提出“骨質(zhì)疏松癥”這一病名，現(xiàn)代多數(shù)學者認為歷代文獻中的“骨痿”與現(xiàn)代醫(yī)學的骨質(zhì)疏松癥極其相似[2]。

補骨防疏煎劑是臨床經(jīng)驗方，臨床觀察提示該方在改善骨質(zhì)疏松癥狀方面有較好療效。其組方原則是補益肝腎、健脾益氣補血，符合中醫(yī)學對骨質(zhì)疏松的病機認識，即腎虛、脾虛、氣血虧虛。方中補骨脂既補腎填精又溫補脾胃，與改善骨質(zhì)疏松癥腎虛脾虛的病理相一致；且現(xiàn)代藥理研究證實，補骨脂具有較強的雌激素樣作用，能促進骨的鈣化[3]。淫羊藿溫補腎陽，對骨骼系統(tǒng)有明顯的調(diào)節(jié)作用[4]。劉海江等[5]研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿能促進犬骨的骨髓基質(zhì)細胞增殖以及促進骨髓基質(zhì)細胞合成堿性磷酸酶，從而促進成骨。于波等[6]也發(fā)現(xiàn)淫羊藿對成骨細胞的生長增殖具有促進作用。此外，研究還發(fā)現(xiàn)淫羊藿可減少破骨細胞的形成，抑制破骨細胞的骨吸收功能以及誘導(dǎo)破骨細胞凋亡，從而發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松的作用[7，8]。李東曉等[9]研究認為，淫羊藿本身或其代謝產(chǎn)物在一定劑量和條件下可誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細胞的成骨分化，其機制與提高相關(guān)成骨因子在體液中的濃度有關(guān)。氣血虧虛在骨質(zhì)疏松的發(fā)病中占有重要地位，本方的另一論治立法基礎(chǔ)即是健脾益氣補血，方中用熟地、黃芪、茯苓等藥健脾益氣補血。盛莉等[10]研究認為，熟地水煎劑可抑制骨吸收，延緩去卵巢大鼠骨量丟失，對骨質(zhì)疏松癥有一定的防治作用?，F(xiàn)代藥理研究認為，黃芪能促進和調(diào)節(jié)免疫功能，促進蛋白質(zhì)合成，并具有防治骨質(zhì)疏松的作用[11]。

BGP是由成熟的成骨細胞合成分泌的非膠原蛋白，其生理功能與骨轉(zhuǎn)換有關(guān)。血中BGP濃度可特異性地反應(yīng)成骨細胞的活性，用于判斷成骨細胞活性受抑制的程度。研究表明[12]，血中BGP水平與骨中BGP水平呈正相關(guān)。測定血清BGP對于評價藥物治療骨質(zhì)疏松癥的療效具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)維甲酸誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松模型血清BGP明顯增高，表明維甲酸導(dǎo)致大鼠骨形成與骨吸收均增加，呈高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松，但骨吸收大于骨形成。這一結(jié)果與研究中大鼠經(jīng)維甲酸ig 2周后其骨組織形態(tài)學的改變一致。而經(jīng)補骨防疏煎劑治療后，大鼠血清BGP含量明顯高于正常對照組和模型對照組，結(jié)合大鼠骨組織形態(tài)學的變化，提示該方能刺激成骨細胞活性，使骨形成活動增強。血清BGP含量的變化直接反應(yīng)成骨細胞的活性，也直接反應(yīng)骨形成率。補骨防疏煎劑對血清BGP的影響出現(xiàn)較早，且隨時間延長其效果越明顯。本研究還顯示，補骨防疏煎劑能明顯改善骨質(zhì)疏松大鼠骨病理性損害。

綜上所述，補骨防疏煎劑能提高血清BGP的含量，增加成骨細胞活性，促進骨的形成，有效改善骨質(zhì)疏松大鼠的骨病理改變，從而對骨質(zhì)疏松起到改善作用。

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Effect of Bugu Fangshu Decoction on BGP in Serum in Osteoporosis Rats

XIAN Hua，CAO Wen-fu
（College of Traditional Chinese Medicine，Chongqing Medical University，Chongqing 401331，China）

OBJECTIVE：To investigate the effect of Bugu fangshu decoction on bone gla protein（BGP）in serum in osteoporosis rats.METHODS：The osteoporosis model was induced by intragastric administration of retinoic acid.BGP in serum were measured by ELISA and morphological changes of bone tissues were observed.RESULTS：High，medium and low concentrations of Bugu fangshu decoction increased BGP levels in serum significantly（P＜0.01），and pathological morphology of bone tissues were improved obviously.CONCLUSION：Bugu fangshu decoction could effectively improve osteoporosis symptom in model rats，which mechanism maybe associated with improving BGP levels in serum and pathological changes of bone tissues.

Bugu fangshu decoction；Osteoporosis；Bone gla protein

R285；R97

A

1001-0408（2011）19-1751-03

＊講師，碩士。研究方向：骨代謝性疾病。電話：023-65712062

#通訊作者：教授，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療內(nèi)分泌代謝病。電話：023-65712060

2010-08-14

2010-12-16）