阿折地平片在健康人體內(nèi)的藥動學(xué)研究

鐘世敬，施愛明，華雯妍，黃明，張全英

（蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，蘇州市 215004）

阿折地平片在健康人體內(nèi)的藥動學(xué)研究

鐘世敬＊，施愛明，華雯妍，黃明，張全英#

（蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，蘇州市 215004）

目的：建立測定人血漿中阿折地平濃度的方法，并進(jìn)行人體藥動學(xué)研究。方法：20名健康受試者隨機(jī)分成2組，分別單劑量口服阿折地平片8mg和16mg，8mg劑量組同時參與完成多劑量給藥試驗。采用液-質(zhì)聯(lián)用法測定人血漿中阿折地平濃度，并計算單劑量及多劑量給藥后的藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果：單劑量口服阿折地平片8mg和16mg后，阿折地平的藥動學(xué)參數(shù)分別為：cmax（1.66±0.45）、（4.25±1.38）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）、（4.00±1.16）h，t1/2（21.3±8.1）、（19.5±4.0）h，AUC0～72（17.9±6.0）、（49.9±17.5）μg·h·L－1。多劑量口服阿折地平片8mg后，阿折地平的藥動學(xué)參數(shù)為：cmax（2.63±1.41）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h，t1/2（32.5±9.2）h，AUC0～72（43.8±26.4）μg·h·L－1，cav（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss（28.4±16.1）μg·h·L－1，波動度（DF）為（1.78±0.49），穩(wěn)態(tài)蓄積比（Rs）為（1.56±0.95）。結(jié)論：本試驗建立的測定方法靈敏、準(zhǔn)確、簡便。阿折地平片單劑量給藥的藥動學(xué)參數(shù)cmax和AUC0～72隨劑量的增加而增加，多劑量給藥后阿折地平在體內(nèi)有一定的蓄積。

阿折地平；液-質(zhì)聯(lián)用法；藥動學(xué)

阿折地平為新一代二氫吡啶類鈣離子阻滯藥，由日本Sankyo公司與Ube公司聯(lián)合開發(fā)成功并于2003年首次在日本上市，商品名為Calblock?[1]。臨床上用于輕度至中度的高血壓治療。其優(yōu)點是可克服其他抗高血壓藥如硝苯地平和尼卡地平等起效過快、效力不持久的缺點，在臨床上是一種很有優(yōu)勢的長效抗高血壓藥。服用后可顯著降低血壓，且對心臟功能無影響，對原發(fā)性高血壓有較好療效。本試驗通過建立測定血漿中阿折地平濃度的液-質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）法，觀察健康受試者口服阿折地平片后血藥濃度的經(jīng)時變化過程，估算相應(yīng)的藥動學(xué)參數(shù)，為臨床安全、合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

API-4000型LC-MS聯(lián)用儀（美國Applied Biosystem Sciex公司）；Agilent 1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Milli Q純水機(jī)（Millipore公司）；Heraus低溫高速離心機(jī)（德國賀利氏儀器公司）；Sartorius BP121S型分析天平（德國賽多利斯公司）。

1.2 試藥

阿折地平片（上海欣生源藥業(yè)有限公司，批號：081201）；阿折地平對照品（四川抗菌素工業(yè)研究所有限公司，批號：20081101，純度：100.06%）；內(nèi)標(biāo)：地西泮對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：171225-200302）；甲醇、乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜及質(zhì)譜條件

色譜柱：SymmetryShield?RP18（100mm×2.1mm，3.5μm）；預(yù)柱：Phenomenex Security GuardTMC18；流動相：甲醇 ∶10mmol·L－1醋酸銨緩沖液（含1%甲酸）＝80∶20；流速：0.3mL·min－1；進(jìn)樣量：10μL；分析時間：2.2min。

電噴霧離子源（ESI），正離子電離模式，多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）的質(zhì)譜（MS）掃描方式，阿折地平和內(nèi)標(biāo)地西泮的母/子離子對分別為m/z584.0→167.1和m/z285.1→193.0；MS參數(shù)：碰撞氣（CAD）6units，氣簾氣（CUR）25units，Gas150units，Gas235units，噴霧電壓（IS）5500V，離子源溫度（TEM）550℃。在此MS條件下，阿折地平和內(nèi)標(biāo)地西泮對照品的準(zhǔn)分子離子的二級全掃描質(zhì)譜圖見圖1。

圖1 二級全掃描質(zhì)譜圖A.阿折地平對照品；B.地西泮對照品Fig1 MS/MS spectrumA.azelnidipine control；B.diazepam control

2.2 受試者選擇

健康受試者20名，年齡20～25歲，體重50.0～74.5kg，體重指數(shù)均在19～24之內(nèi)。受試者試驗前后血尿常規(guī)、肝腎功能以及心電圖均正常，或為異常但無臨床意義。受試者試驗前2周及試驗期間未服用其他任何藥物。試驗期間統(tǒng)一飲食。試驗前，臨床試驗方案經(jīng)蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，并均經(jīng)受試者簽署知情同意書。

2.3 試驗方案

本試驗采用單周期、開放、平行設(shè)計方法，20名受試者隨機(jī)分為2組，每組10人（男、女各半）。一組受試者于試驗的第1天和第4～9天早晨分別空腹口服阿折地平片8mg/片，qd，250mL溫開水送服，在試驗的第1天和第9天給藥前0h和給藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48、60、72h時由前臂靜脈避光采血4mL，試驗的第7、8天給藥前由前臂靜脈避光采血4mL；另一組受試者于試驗的第1天上午分別空腹口服阿折地平片8mg/片×2，250mL溫開水送服，在給藥前0h和給藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48、60、72h時由前臂靜脈避光采血4mL。采集的所有血樣置肝素化離心試管中，立即避光離心（4℃，3500r·min－1）10min，避光分離血漿，于－40℃冷凍避光保存待測。

2.4 血樣處理

避光精密吸取血漿200μL至1.5mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)（50.0μg·L－1地西泮）溶液50μL，混勻，加乙腈600μL沉淀蛋白，渦旋1min，于16000r·min－1、5℃離心10min，取上清液在“2.1”項色譜及質(zhì)譜條件下避光進(jìn)樣測定，記錄色譜圖及化合物的峰面積，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量。

2.5 測定方法專屬性

在本試驗條件下，空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾阿折地平和內(nèi)標(biāo)的測定，基線噪音小。阿折地平出峰時間在1.1min左右，內(nèi)標(biāo)出峰時間在1.6min左右。本方法具有較高的特異性，能準(zhǔn)確測定血漿中阿折地平的濃度，色譜圖見圖2。

圖2 專屬性試驗的色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+阿折地平對照品+內(nèi)標(biāo)；C.受試者口服阿折地平片8mg 2h后血漿樣品+內(nèi)標(biāo)；Ⅰ.阿折地平；Ⅱ.地西泮Fig2 Chromatograms of specificity testA.blank plasma；B.blank plasma+azelnidipine+diazepam；C.plasma obtained from a volunteer after oral dose of Azelnidipine tablet 8mg+diazepam；Ⅰ.azelnidipine；Ⅱ.diazepam

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取人空白血漿180μL，移至1.5mL塑料離心管中，分別避光加入阿折地平系列標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL，配成含阿折地平濃度分別為0.0200、0.0800、0.300、1.00、3.00、10.0、30.0μg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿樣品，按“2.4”項下方法操作并記錄色譜。以峰面積比值（Y）對血藥濃度（X）作權(quán)重回歸計算，得回歸方程為：Y＝0.0692+0.0007920X（r＝0.9974），權(quán)重系數(shù)＝1/X2。結(jié)果表明，阿折地平血藥濃度在0.0200～30.0μg·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量限為0.02μg·L－1。

2.7 精密度、準(zhǔn)確度及提取回收率

精密吸取人空白血漿180μL，移至1.5mL塑料離心管中，分別避光加入阿折地平質(zhì)控工作液20μL，配成含阿折地平濃度分別為0.050、1.25、25.0μg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿樣品，每種濃度平行制備5個樣本，阿折地平血漿質(zhì)控樣品低、中、高3種濃度（0.05、1.25、25.0μg·L－1）的日內(nèi)RSD在5.1%～10.9% 之間，日間RSD在8.6%～11.9%之間，方法回收率（準(zhǔn)確度）在97.3%～101.6%之間，低、中、高3種濃度質(zhì)控樣品提取回收率分別為92.3%、97.1%和98.9%，符合生物樣品分析要求。

2.8 藥動學(xué)參數(shù)

采用DAS 2.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行藥動學(xué)參數(shù)的計算。

2.8.1 單劑量給藥。20名受試者單劑量口服2種劑量（8mg和16mg）阿折地平片后，用DAS 2.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計分析，平均藥動學(xué)參數(shù)見表1，平均藥-時曲線見圖3。結(jié)果表明，2種劑量阿折地平的tmax和t1/2相近；cmax和AUC隨劑量增加而增加。2.8.2多劑量給藥。10名健康受試者多劑量口服阿折地平片8mg后，在連續(xù)給藥第4天時阿折地平已達(dá)穩(wěn)態(tài)。平均藥動學(xué)參數(shù)見表1；平均藥濃-時曲線見圖3，平均穩(wěn)態(tài)谷濃度-時間曲線見圖4。

表1 20名受試者單劑量及多劑量口服阿折地平片后的藥動學(xué)參數(shù)（n＝10）Tab1 Pharmacokinetic parameters of azelnidipine in 20healthy volunteers after oral single-dose and multiple-dose of Azelnidipine tablets（n＝10）

圖320 名受試者單劑量及多劑量口服阿折地平片8mg后的平均藥-時曲線Fig3 Mean plasma concentration-time curves of azelnidipine in 20healthy volunteers after oral single-dose and multiple-dose ofAzelnidipine tablets（8mg）

3 討論

本試驗采用LC-MS法進(jìn)行血漿中阿折地平濃度的測定，血漿樣品前處理采用乙腈直接沉淀蛋白法。阿折地平為二氫吡啶類藥物，遇光易發(fā)生光歧化反應(yīng)，樣品所有操作都應(yīng)在避光環(huán)境下進(jìn)行。試驗結(jié)果表明，本方法簡便易行、重復(fù)性好，專一性強(qiáng)、靈敏度高，能夠滿足阿折地平血藥濃度測定和藥動學(xué)研究。

圖4 平均穩(wěn)態(tài)谷濃度-時間曲線Fig4 Mean steady state trough concentration-time curves of azelnidipine in 20healthy volunteers

本試驗考察了受試者單劑量和多劑量口服阿折地平片的藥動學(xué)特性，試驗結(jié)果顯示，受試者口服阿折地平片后，測得的血藥濃度個體差異較大。單劑量口服2種劑量（8mg和16mg）阿折地平片后，藥動學(xué)參數(shù)cmax和AUC隨著劑量的增加而增加，2劑量的tmax和t1/2接近，與給藥劑量無關(guān)。多劑量口服8mg阿折地平片達(dá)穩(wěn)態(tài)后，cav為（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss為（28.4±16.1）μg·h·L－1，Rs為（1.56±0.95），表明阿折地平在受試者體內(nèi)存在一定的蓄積現(xiàn)象。

各文獻(xiàn)報道的健康人口服阿折地平片的cmax和AUC差異較大[2～4]，本試驗結(jié)果也與文獻(xiàn)有一定差異，推測主要是阿折地平個體差異較大；另外，各廠家生產(chǎn)的阿折地平有可能存在晶型的差異，可能對其體內(nèi)的吸收也有一定的影響。

[1] 陳愛華，鄔 蓉，陶 霞.阿折地平：一種新型二氫吡啶類鈣拮抗藥[J].中國新藥與臨床雜志，2006，25（12）：946.

[2] 李 立，丁 黎，馬鵬程.阿折地平片的人體藥動學(xué)研究[J].中國藥學(xué)雜志，2008，43（13）：1008.

[3] 鄒建軍，朱余兵，于翠霞，等.液相色譜-質(zhì)譜法測定人血漿中阿折地平的濃度及其藥動學(xué)[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（1）：36.

[4] 梁宇光，高洪志，胡錦超，等.阿折地平在健康人體的藥代動力學(xué)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2008，24（4）：323.

Pharmacokinetic Study of Azelnidipine Tablets in Healthy Volunteers

ZHONG Shi-jing，SHI Ai-ming，HUA Wen-yan，HUANG Ming，ZHANG Quan-ying
（Dept.of Pharmacy，The Second Affiliated Hospital of Soochow University，Suzhou 215004，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of Azelnidipine tablet in human plasma and study the pharmacokinetics of Azelnidipine tablet.METHODS：20healthy volunteers were randomly distributed into 2groups and

a single-dose of Azelnidipine tablet 8and 16mg respectively.The group receiving Azelnidipine tablet 8mg participated in the multi-dose test at the same time.The concentration of azelnidipine in human plasma was determined by LC-MS and the pharmacokinetic parameters were calculated after single-dose or multi-dose administration.RESULTS：The pharmacokinetic parameters of azelnidipine after single dose of Azelnidipine tablet 8and 16mg were as follows：cmax（1.66±0.45）μg·L－1and（4.25±1.38）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h and（4.00±1.16）h，t1/2（21.3±8.1）h and（19.5±4.0）h，AUC0～72（17.9±6.0）μg·h·L－1and（49.9±17.5）μg·h·L－1，respectively.The pharmacokinetic parameters of azelnidipine after multi-dose of Azelnidipine tablet 8mg were as follows：cmax（2.63±1.41）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h，t1/2（32.5±9.2）h，AUC0～72（43.8±26.4）μg·h·L－1，cav（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss（28.4±16.1）μg·h·L－1，DF（1.78±0.49），Rs（1.56±0.95）.CONCLUSION：The method is sensitive，accurate and simple.The values ofcmaxand AUC0～72of Azelnidipine tablet after single-dose administration increase along with the increasing of the dose.And the azelnidipine has accumulated after multi-dose of administration.

Azelnidipine；LC-MS；Pharmacokinetics

R969.1；R972+.4

A

1001-0408（2011）18-1672-03

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0512-67783645。E-mail：sz2000zhongsj@163.com

#通訊作者：主任藥師。研究方向：藥動學(xué)。電話：0512-67783645。E-mail：zqysz11@163.com

2010-08-19

2010-12-29）