藤己微乳噴霧劑的制備及其透皮特性的研究

葉秀波 岑幗英

（1 廣州市海珠區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，廣東 廣州 510240；2 中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510080）

藤己微乳噴霧劑的制備及其透皮特性的研究

葉秀波1岑幗英2

（1 廣州市海珠區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，廣東 廣州 510240；2 中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510080）

目的制備藤己微乳噴霧劑，比較單方青風(fēng)藤微乳噴霧劑和藤己微乳噴霧劑的透皮特性。方法分別提取單方和復(fù)方中生物堿類成分，以吐溫-80和異丙醇為乳化劑，油酸為油相分別制備青風(fēng)藤微乳噴霧劑和藤己微乳噴霧劑。采用改良Franz擴散池，以青藤堿的滲透量為指標，比較二者的透皮性質(zhì)。結(jié)果單方青風(fēng)藤微乳噴霧劑中青藤堿的體外透皮釋藥方程為y=19.489x+2.155（R=0.9982），12h的累積滲透量為239.393μg/mL；藤己微乳噴霧劑中青藤堿的體外透皮釋藥方程為y=31.264x+11.975（R=0.9978），12h的累積滲透量為385.696μg/mL。結(jié)論兩種制劑中青藤堿的均以零級動力學(xué)經(jīng)皮滲透，而且藤己微乳噴霧劑中青藤堿的透皮效果比單方更好。

制備；藤己微乳噴霧劑；青藤堿；透皮特性

1 試劑與材料

LC2000高效液相色譜儀（上海天美色譜儀器公司）、GR-202AND分析天平（日本島津）、TK-12A型透皮擴散試驗儀，7mL立式玻璃擴散池，接口面積為2.92cm2（上海凱諧科技貿(mào)易有限公司）；HJ-3恒溫磁力攪拌器（江蘇醫(yī)療儀器廠）；雷磁pH計（型號：pHS-3C，上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

藤己及單方青風(fēng)藤提取物（實驗室自制）；青藤堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，編號為0774-200905）；油酸、吐溫-80（天津市大茂化學(xué)試劑有限公司）；異丙醇（天津市富宇精細化工有限公司）；甲醇均為色譜純，其他試劑均為分析純。

SPF級大鼠（200～250g），雄性，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號SCXK（粵）20080020。

2 方法與結(jié)果

2.1 青藤堿含量測定方法的建立

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜條件：Diamonsil C18（250mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；流動相為甲醇-水（55∶45），水中加入0.2%的三乙胺；檢測波長265nm；流速1mL/min；柱溫為室溫；進樣量10μL。在此色譜條件下，青藤堿保留時間約為10.8min，陰性對照色譜圖在青藤堿位置無干擾峰，青藤堿峰與其他組分達到基線分離，分離度不低于1.5，理論塔板數(shù)按青藤堿計算不低于5000。

2.1.2 對照品溶液制備及線性關(guān)系考察

精密稱取青藤堿對照品5.6mg，于25mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，制成濃度為224μg/mL的青藤堿對照品儲備液，密封，于4℃冰箱保存。分別精密量取上述儲備液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4mL，分別置于6只25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制系列青藤堿對照品溶液。按上述色譜條件，分別吸取10μL依次進樣。以測得的青藤堿峰面積積分值為縱坐標Y與其濃度為橫坐標X進行線性回歸，獲得標準曲線方程為Y=8231357.2X-2356.4，R=0.9998。結(jié)果表明，青藤堿的質(zhì)量濃度與峰面積積分值在2.24～35.84μg/mL范圍內(nèi)，保持良好的線性關(guān)系。

2.1.3 精密度

取同一對照品溶液，重復(fù)進樣6次，每次10μL，按上述色譜條件測定峰面積，計算RSD為0.26%（n=6），表明精密度良好。

2.1.4 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液分別在0、2、4、6、8、10、12h進樣測定峰面積，結(jié)果RSD=1.81%，說明在12h內(nèi)青藤堿較為穩(wěn)定。

2.1.5 回收率試驗

精密稱取已知含量藤己微乳噴霧劑約0.25mL，共6份，分別精密加入與樣品中青藤堿含量相當?shù)那嗵賶A對照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備供試液，分別進樣10μL，測定青藤堿含量，計算回收率。結(jié)果青藤堿平均回收率為100.10%，RSD=1.74%（n=6），表明本方法準確度良好。

2.2 藤己微乳噴霧劑的制備

2.2.1 藤己總生物堿的提取

[5]生物堿的提取方法，按處方配比分別稱取各藥飲片于圓底燒瓶中，加入6倍量70%乙醇，回流提取2次，每次2h，提取液用紗布壓榨濾過，上清液減壓回收乙醇至無醇味，加適量水稀釋，用1mol/LHCl調(diào)pH至2，冷藏24h，濾過，濾液用1mol/LNaOH調(diào)pH至10，加等體積氯仿萃取4次，合并氯仿液，減壓回收氯仿，并濃縮至相對密度1.30（50℃），真空干燥至恒重，得藤己總生物堿。另取相同量的青風(fēng)藤同法制得青風(fēng)藤總生物堿，備用。

2.2.2 藤己微乳噴霧劑的制備

根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，按處方比例將22.5%吐溫-80和22.5%異丙醇混勻置于具塞平底錐形瓶中，在25℃恒溫磁力攪拌器攪拌下加入1%油酸，取3%藤己總生物堿加入上述混合溶液中，超聲5min，然后按比例滴入水相，在磁力攪拌器下攪拌，制得的黃褐色澄清透明微乳，分裝于噴霧瓶中，即得。單方青風(fēng)藤微乳噴霧劑的制備方法同上。

2.3 藤己微乳噴霧劑離體透皮特性的研究

采用改良的Franz擴散池，有效滲透面積A為2.92cm2，接收介質(zhì)為pH6.8磷酸緩沖鹽（使用前超聲脫氣30min），接收池體積為7mL。分別精密稱取藤己微乳噴霧劑，單方青風(fēng)藤噴霧劑各1.0g置于供給池中，于（32±0.5）℃，200r/min條件下進行實驗，預(yù)平衡60min后，分別于0.5、1、2、4、6、8，10，12h將全部接收液取出（同時補充同溫等量磷酸緩沖鹽），樣液以0.45μm的微孔濾膜濾過，棄去前1mL的初濾液，精密吸取10μL，按2.1項下建立的青藤堿測定方法，測定擴散液中青藤堿的含量，然后按以下公式計算各時間點的單位面積累積透過量（Q，μg/cm2）。

在式中，Cn：第n個取樣點測得的藥物濃度（μg/mL）；Ci：第i（i≤n-1個取樣點測得的藥物濃度（μg/mL）；A：有效透皮面積（2.92cm2）。以Qn對時間t作圖，并對曲線中的直線部分線性回歸，求出直線斜率dQn/dt，即穩(wěn)態(tài)滲透速率Js [μg/（cm2?h）]，結(jié)果見表1和圖1。

圖1 單方青風(fēng)藤和藤己微乳噴霧劑滲透動力學(xué)曲線

表1 復(fù)方青風(fēng)藤與單方青風(fēng)藤噴霧劑透皮曲線方程（零級）

3 討 論

風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，屬于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“痹證”范疇。風(fēng)寒濕邪侵襲機體關(guān)節(jié)，導(dǎo)致氣血運行不暢，經(jīng)絡(luò)阻滯所致合痹，治宜祛風(fēng)除濕，散寒逐痹，活血止痛。藤己方中用青風(fēng)藤祛風(fēng)通絡(luò)，勝濕止痛以為君藥；防己祛風(fēng)散寒、通絡(luò)止痛為臣藥，兩藥合用，共奏祛風(fēng)除濕、散寒痛痹，活血止痛之功，具有較好的免疫調(diào)節(jié)和抗炎鎮(zhèn)痛作用，是一類值得推廣的臨床藥物。

微乳是由表面活性劑、助表面活性劑、水相和油相按適當比例自發(fā)形成的透明或半透明、低黏度、各向同性的熱力學(xué)穩(wěn)定的液-液分散體系。微乳因為對水溶性及脂溶性藥物均具有良好的溶解性，具有較小的表面張力、其粒徑與毛囊孔相近以及能提高易溶性藥物穩(wěn)定性，還具有優(yōu)良的促滲透作用等優(yōu)點，近年來廣泛的應(yīng)用于經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中。付毅華等[6]以卡波姆940（Carbomer）、羥丙基甲基纖維素（HPMC）和聚乙烯毗咯烷酮（PVP）為基質(zhì)，制備祛風(fēng)止痹凝膠劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)祛風(fēng)止痹凝膠劑中的青藤堿的經(jīng)皮特性與本實驗結(jié)果一致，亦符合零級動力學(xué)經(jīng)皮滲透。

從單方青風(fēng)藤及藤己微乳噴霧劑的透皮結(jié)果，可以看出青藤堿在藤己微乳噴霧劑的透皮速率是單方青風(fēng)藤的1.6倍，在藤己微乳噴霧劑的累積滲透量是385.696μg/mL，而在單方青風(fēng)藤噴霧劑的累積滲透量是239.393μg/mL，這說明中藥復(fù)方更加有利于青藤堿的透皮，其中具體的促滲機制還有待進一步研究。

參考文獻

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[2]唐黎明,張素慧,寧煉.復(fù)方青風(fēng)藤膠囊的主要藥效學(xué)研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2007,13(9):50-52.

[3]馬容梅.復(fù)方青風(fēng)藤合劑的臨床應(yīng)用[J].河北中醫(yī),1994,16(6):27-28.

[4]周莉玲,李銳,周華等.青藤堿制劑藥動學(xué)試驗中藥物累積法與血藥濃度相關(guān)性研究[J].中成藥,1996,18(9):1761.

[5]瞿發(fā)林,過偉,董文桑.陣痛寧膠囊中生物堿的提取工藝[J].中國藥師,2009,12(5):591-593.

[6]付毅華,杜華碧.祛風(fēng)止痹凝膠劑的制備及體外滲透性研究[J].醫(yī)學(xué)信息,2009,22(10):2221-2222.

R961.1

B

1671-8194（2011）04-0048-02藤己方是由青風(fēng)藤和防己組成的中藥復(fù)方，具有 風(fēng)濕，通絡(luò)止痛，利水消腫之功，主治風(fēng)濕痹痛，關(guān)節(jié)腫脹或風(fēng)濕麻木。類似的制劑有復(fù)方青風(fēng)藤片劑、膠囊以及合劑[1-3]，然而對于口服的青風(fēng)藤制劑而言，其中主要有效成分口服后存在生物利用度低、半衰期短、有胃腸道不良反應(yīng)、經(jīng)體循環(huán)后到達病變部位藥量少等缺點[4]。噴霧劑是指不含拋物劑，借助手動泵的壓力或其他方法將內(nèi)容物以霧狀等形態(tài)噴出的制劑。噴霧劑攜帶方便，給藥準確，不僅可以發(fā)揮局部作用，同時還可以使藥物達到有效濃度而發(fā)揮全身治療作用。青藤堿（sinomenine，SN）是從中藥青風(fēng)藤中提取的單體生物堿，具有明顯抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用，為本制劑抗風(fēng)濕及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的主要有效成分，在透皮過程中選擇青藤堿為指標成分。方中兩味藥材均以生物堿類成分為主，因此提取藤己方中的生物堿類成分，再將其制備成外用的微乳噴霧劑，并比較了單方青風(fēng)藤與復(fù)方藤己微乳噴霧劑中青藤堿的透皮特性，為其臨床應(yīng)用提供可靠的藥學(xué)依據(jù)。