VEGF 、MMP-7在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及意義*

趙 莉 王 震 王言奎

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266003； 2.泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院， 山東 泰安 271000)

子宮內(nèi)膜異位癥，即有功能的子宮內(nèi)膜腺體和基質(zhì)在子宮以外的部位生長，最常見的部位是腹腔，其發(fā)病機制仍存在爭議。Sampson的經(jīng)血逆流學(xué)說，即假設(shè)脫落的子宮內(nèi)膜組織通過輸卵管逆流入腹腔而種植于腹膜表面，仍是最為廣泛被接受。而種植過程就是一個侵襲周圍組織，引起細胞外基質(zhì)崩潰和重建的過程，需要蛋白水解酶的參與。種植成功后必須要有新生血管提供血液才能進一步發(fā)展。在這些過程中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)起了重要作用。我們擬通過免疫組化檢測VEGF、MMP-7在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達情況及相關(guān)性，探討其在發(fā)病機制中可能的作用。

1 資料與方法

1.1臨床資料

實驗組：選擇腹腔鏡手術(shù)的內(nèi)異癥患者，年齡27-40歲(34.4±3.73)，術(shù)后病理檢查證實均為子宮內(nèi)膜異位癥。獲得內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜40及異位內(nèi)膜39份 ，異位內(nèi)膜均從卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫取得。按1985年美國生育學(xué)會修訂的內(nèi)異癥分期標準(r-AFS)，全部為Ⅱ-Ⅲ期病例。對照組:取同期因肌間型子宮肌瘤行子宮切除患者32 例(4017 ±215) 年,均無月經(jīng)性狀的改變。患者術(shù)前3 個月內(nèi)無激素及抗EM 藥物治療史。

1.2檢測方法

1.2.1取材 術(shù)中取卵巢異位囊腫組織和其在位子宮內(nèi)膜和同期因肌間型子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)的患者的在位內(nèi)膜,置10 %甲醛液固定,石蠟包埋,4μm 連續(xù)切片,HE 染色后鏡下觀察到典型子宮內(nèi)膜組織為入選標本,分別為研究組的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和對照組的在位內(nèi)膜。

1.2.2MMP7、VEGF 測定: 采用免疫組化SP法檢測MMP7、VEGF ,試劑一抗(即用型兔抗MMP7、VEGF 單克隆抗體) 由北京博奧森生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),SP 免疫組化試劑盒及DAB顯色劑購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司。操作按說明書進行。用已知的標本片做為陽性對照,PBS 代替一抗做為陰性對照。

1.3結(jié)果判定 以黃色和棕黃色為陽性信號。根據(jù)染色強度和顯色細胞比例的綜合評分將染色結(jié)果分為(-)、(+)、(++)3級。①按內(nèi)膜組織的顯色有無及深淺評分:無顯色為0分,淺黃色或黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;②按內(nèi)膜組織的顯色比例評分: <5%為0分, 5% -25%為1分, 25% -50%為2分, >50%為3分。每例標本的積分為[①+②]/2,按積分高低分為: 0 -0. 5分為陰性(-)、0. 5-1. 5分為陽性(+)、1. 5-3分為陽性(++)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10. 0統(tǒng)計軟件處理,計量資料采用t檢驗,計數(shù)資料采用χ2檢驗,檢驗水準均為0. 05。

2 結(jié) 果

2.1MMP-7在組織中的表達

結(jié)果表明, MMP-7在子宮內(nèi)膜中主要分布于腺上皮細胞,陽性信號定位于細胞漿內(nèi),部分定位于胞膜,間質(zhì)細胞中無表達(見圖1、2)。MMP-7在研究組異位內(nèi)膜中的表達率及表達強度均低于在位內(nèi)膜,兩者比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)。研究組異位內(nèi)膜中的表達率與對照組比較,無明顯差異;但表達強度明顯高于對照組,兩者比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0. 05)。見表1。

2.2VEGF在組織中的表達

VEGF陽性表達主要見于子宮內(nèi)膜間質(zhì)血管內(nèi)皮細胞和腺上皮細胞的胞漿(見圖3、4)。卵巢異位內(nèi)膜VEGF表達與同期在位內(nèi)膜相比，表達增高，差異有顯著性(P<0.05)，且明顯高于正常內(nèi)膜(P<0.005)；c、在位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜相比，VEGF表達差異無顯著性(P>0.05)。見表2。

表1 MMP-7在研究組在位、異位內(nèi)膜組織及對照組組織中表達情況

組別 MMP-7-+++合計正常內(nèi)膜154120在位內(nèi)膜*1791440異位內(nèi)膜*1981239合計51212799

圖1 MMP-7 在在位子宮內(nèi)膜的表達.圖2 MMP-7 在異位子宮內(nèi)膜的表達

圖3 VEGF 在異位子宮內(nèi)膜的表達圖4 VEGF 在在位子宮內(nèi)膜的表達

表2 VEGF在研究組在位、異位內(nèi)膜組織及對照組組織中表達情況

組別 VEGF-+++合計正常內(nèi)膜136120在位內(nèi)膜*19111040異位內(nèi)膜*1281939合計44253099

3 討 論

3.1MMP-7在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一組幾乎能降解細胞外基質(zhì)所有成分(如膠原、纖維連接蛋白、蛋白多糖等)的蛋白酶,目前,至少發(fā)現(xiàn)23種MMPs[1],按其作用的特異性底物不同可分為四大類:膠原酶(MMP-1、8、13等)、明膠酶(MMP-2、9)、基質(zhì)溶解酶(MMP-3、7、10、11、12)和型金屬蛋白酶類(MMP-14、15、16、17等)。屬于其中基質(zhì)溶素類的MMP-7于1995年首先從人類直腸癌細胞中分離出來[2],基因位于11q21～q22,由于缺乏與血紅素結(jié)構(gòu)蛋白同源序列而成為MMPs家族中最小成員,但可降解彈性蛋白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、Ⅳ型膠原等多種重要成分。MMP-7目前在腫瘤研究較多,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)是參與癌變細胞轉(zhuǎn)移、侵蝕的重要因子[3],由于EMs的生物學(xué)行為具有類似惡性腫瘤的周圍浸潤、遠處轉(zhuǎn)移和種植的惡性特征,因此MMP-7近年來也成為研究EMs病因?qū)W的靶基因。Parsons等[4]研究發(fā)現(xiàn)激活后的MMP-7具有廣泛的蛋白水解活性且能活化其他MMPs成員MMP-2、MMP-9及滅活serpins(絲氨酸蛋白酶抑制劑)。Shan K等[5]提出MMP-7基因啟動子區(qū)181A/G多態(tài)與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果亦提示異位內(nèi)膜組織中MMP-7的過度表達可以使子宮內(nèi)膜的侵襲性增強。

3.2VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用

VEGF是1989年Ferrara等在牛垂體濾泡星狀細胞體外培養(yǎng)液中首先純化出來的糖類蛋白質(zhì)，是一高度特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂素。Takahashi等[6]認為，內(nèi)膜中被VEGF-A或者其他炎癥因子激活的髓系內(nèi)皮先祖細胞與新血管的形成有關(guān)。異位內(nèi)膜在發(fā)生侵襲種植過程中，必須形成新的血管網(wǎng)絡(luò)。VEGF的含量增高,在自分泌和旁分泌的共同作用下,刺激毛細血管增生,為異位生長的腺上皮細胞提供賴以生存的物質(zhì)基礎(chǔ);促進異位內(nèi)膜增殖和浸潤入盆腔和腹膜內(nèi)組織,形成腹腔的異位灶[7]。本研究表明:在異位內(nèi)膜組織中VEGF的陽性表達率明顯高于正常內(nèi)膜組P<0.01。提示異位內(nèi)膜組織中血管形成活躍,易于異位內(nèi)膜的種植。

3.3MMP與VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展中有協(xié)同作用

異位內(nèi)膜在發(fā)生侵襲種植過程中，必須形成新的血管網(wǎng)絡(luò)，血管生成過程中的內(nèi)皮細胞循環(huán)及血管結(jié)構(gòu)形成均需要ECM的降解和重建，MMPs能夠降解基底膜糖蛋白及細胞外基質(zhì)成分，因此在血管生成中起重要作用。在多種腫瘤中，VEGF的表達與MMPs的表達密切相關(guān)，如乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢漿液性囊腺癌等[8,9]。雖然子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機理眾說紛紜，但MMPs及VEGF在EMs異位病灶的侵襲、轉(zhuǎn)移與血管形成過程中無疑有著重要的作用，探討兩者的表達情況有助于闡明EMs的發(fā)病機制，隨著新藥如MMPs抑制劑和VEGF抑制劑的問世以及在惡性腫瘤中的應(yīng)用，針對MMPs、VEGF的分子靶向治療策略也將有可能成為EMs有效的治療或輔助治療方法。

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