高效液相色譜法測定玉米面饅頭中著色劑檸檬黃

劉長勇 羅小玲 郝家勇 羅瑞峰

(農業(yè)部食品質量監(jiān)督檢驗測試中心，石河子 832000)

玉米面饅頭是時下較為流行的粗糧食品，深受廣大消費者喜愛。據(jù)報道，一些地區(qū)不法商販為了牟利，在加工玉米面饅頭時，非法添加合成著色劑檸檬黃。人體食用過量的檸檬黃可造成危害[1-3]。測定檸檬黃的檢測方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜、液相色譜-質譜法、滴定法[4-6]，在這些方法中沒有說明發(fā)酵面食制品饅頭中檸檬黃的測定方法，且國標方法中聚酰胺粉難以將檸檬黃完全吸附，樣品回收率較低[3]。為此筆者做了多次實驗建立了玉米面饅頭中檸檬黃含量的測定方法。該方法簡便、快捷、準確，可滿足檢測要求。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters 2695型，配Waters 2487型紫外檢測器，美國Waters公司；

甲醇：色譜純;

乙酸銨溶液：0.02 mol/L，稱取乙酸銨0.770 8 g，加水定容至 500 mL，過0.45 μm微孔濾膜，再用微波除氣泡后備用；

檸檬黃標準儲備液：1 000 μg/mL，準確稱取干燥的檸檬黃標準品0.100 0 g，加甲醇-乙酸銨(體積比18∶72)使之溶解，定容至100 mL，混勻；

檸檬黃標準使用液：20 μg/mL，準確吸取1 mL檸檬黃標準儲備液加流動相定容到50 mL，混勻。

1.2 色譜條件

色譜柱：Symmetry Shield RP18(3.9 mm×150 mm, 5 μm) ；柱溫：室溫；流動相：甲醇-乙酸銨 (體積比18∶72)，流速為0.6 mL/ min；紫外檢測器，檢測波長：254 nm 。

1.3 樣品處理

稱取制備好樣品5 g(準確到0.01 g)于高型燒杯中，準確加入50 mL流動相，勻漿均質2 min，保鮮膜封口超聲萃取10 min，使色素充分溶出，靜置沉淀，取上層提取液適量離心。取離心上清液過 0.45 μm濾膜。

1.4 測定方法

檸檬黃標準溶液進樣量為4、8、12、16、20 μL，以檸檬黃濃度X為橫坐標、峰面積Y為縱坐標進行線性擬合。樣品提取液進樣量為20 μL。外標法保留時間定性，峰面積定量。

2 結果與討論

2.1 標準品溶劑、流動相比例、樣品提取液的選擇

樣品溶液pH值過高或過低都會降低色譜柱使用壽命并對儀器流動相通道有腐蝕作用[7]。試驗證明，甲醇-乙酸銨(體積比18∶72)對檸檬黃的溶解性可滿足實驗要求，且標準品的峰型和保留時間達到了理想的效果。選擇流動相為樣品提取液直接提取目標物上機測定，達到了雜質與目標組分的良好分離，且避免了提取液與流動相成分不同可能造成的目標物與標準品保留時間的差異，以便更好地定性。該法與國標方法相比更省時、便捷，提高了工作效率。

2.2 標準曲線

按1.4方法繪制標準曲線，檸檬黃標準溶液色譜圖見圖1。檸檬黃的線性回歸方程為Y=1.79×105X-1.66×105，相關系數(shù)r2=0.999 964。結果表明，檸檬黃在4～20 μg/mL濃度范圍內，標準點呈良好的線性關系，不排除適量延伸后仍表現(xiàn)出良好線性的可能。

2.3 精密度與加標回收率

按1.2色譜條件對同一玉米面饅頭樣品平行測定7次，得出測定結果平均值、標準偏差及相對標準偏差，見表1。結果表明，測定結果的相對標準偏差小于 5%，滿足分析化學要求。對不含目標物樣品加標，加標量分別為0.05、0.10、0.20 μg/g，計算回收率，結果見表 2。由表2可見，回收率在95%～100%之間。

圖1 檸檬黃標準液色譜圖

表1 精密度試驗結果(n=7)

表2 回收試驗結果

2.4 樣品測定

標準曲線點為4、8、12、16、 20 μL時，對樣品中目標物含量在40～200 μg/g范圍內，稱樣量為5 g，樣品溶液測定濃度在曲線內；當樣品中目標物含量在小于40 μg/g或大于200 μg/g時，可增減稱樣量、減增定容體積或延伸曲線。樣品色譜圖見圖2。

圖2 樣品色譜圖

3 結語

在筆者實驗室條件下，通過對樣品前處理、色譜條件選擇的探討，建立了高效液相色譜測定玉米面饅頭中檸檬黃的方法。本方法簡單、快速、準確，測定結果令人滿意。

[1] 丁呈華，曹豐璞，楊浩，等.高效液相色譜法同時測定梔子黃、檸檬黃和日落黃色素[J]. 許昌學院學報, 2010,29(9)：101-102.

[2] 王冬妍，楊書寧.高效液相色譜法測定杏罐頭中的檸檬黃、日落黃[J].食品研究與開發(fā)，2010,31(9)：134-135.

[3] 程小會,鄧敬頌.液相色譜法測定果蔬汁中檸檬黃和日落黃方法優(yōu)化[J].化學分析計量, 2010,19(2)：70-71.

[4] GB/T 5009.35-2003 食品中合成著色劑的測定[S].

[5] SN/T 2105-2008 化妝品中檸檬黃和桔黃等乙酸銨溶性色素的測定方法[S].

[6] GB 4481.1-2010 食品添加劑檸檬黃[S].

[7] 陳偉東，王荔，孫冬梅.HPLC法測定肉制品中檸檬黃和胭脂紅含量[J].肉品衛(wèi)生，2000(3):13-14.