嬰幼兒配方食品中阪崎腸桿菌檢驗方法的比較、優(yōu)化和研究

廖連英 羅 琳 鄭曉冰

(汕頭質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所，汕頭 515041)

嬰幼兒配方食品中阪崎腸桿菌檢驗方法的比較、優(yōu)化和研究

廖連英 羅 琳 鄭曉冰

(汕頭質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所，汕頭 515041)

阪崎腸桿菌是乳制品中近幾年發(fā)現(xiàn)的一種致病菌，屬于革蘭氏陰性桿菌，適宜生長溫度為37～43℃，它能引起嚴重的新生兒腦膜炎，小腸結(jié)腸炎和茵血癥，死亡率高達50%以上［1］。目前，微生物學家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報告表明嬰兒配方食品是目前發(fā)現(xiàn)的主要感染渠道［2］。目前，阪崎腸桿菌的檢測方法主要有常規(guī)的生化檢測鑒定法［2，3］、DFI法 (druggan-forsytheiversen 法 )［4］、DNA 環(huán)介導等恒擴增法［5］、普通PCR法和熒光定量PCR法。其中最常見的是普通生化鑒定法［6］(GB 4789.40-2010)和熒光定量PCR法［7］(SN／T 1632.3-2005)。筆者對這兩種方法進行了研究和比較，得到一種簡易可行的阪崎腸桿菌檢測方法，便于各檢驗機構(gòu)和企業(yè)掌握以加強原料和產(chǎn)品的質(zhì)量控制。對相關(guān)企業(yè)進行了調(diào)查，分析阪崎腸桿菌的污染原因，以獲得控制污染的監(jiān)督重點，有效降低阪崎腸桿菌的污染，確保嬰幼兒群體的健康與安全。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

熒光PCR儀：StepOne型，美國ABI公司；

恒溫培養(yǎng)箱：25℃±1℃，LRH-250型（上海一恒科學儀器公司），36℃±1℃，HG303-4A型（南京實驗儀器廠），44℃±0.5℃，LHS-250HC-1型（上海一恒科學儀器公司）；

恒溫水浴箱：HH-60型，44℃±0.5℃，金壇市科興儀器廠；

天平：JJ3000型，感量0.1 g，常熟雙杰測試儀器公司；

無緩沖蛋白胨水（BPW）：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

腸桿菌增菌肉湯（EE肉湯）：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA）：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯：研域（上海）化學試劑有限公司；

萬古霉素：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基：M160591,廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）：250 g，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

生化鑒定試劑盒：M160591,中西遠大科技有限公司；

氧化酶試紙：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；

阪崎腸桿菌質(zhì)控菌株：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2 檢驗程序

(1)GB 4789.40-2010法

GB 4789.40-2010方法流程如圖1所示。

(2)SN／T 1632.3-2005法

SN／T 1632.3-2005方法流程如圖2所示。

2 結(jié)果比較

2.1 檢驗方法比較

(1)GB 4789.40-2010法

①無特殊設(shè)備要求，方法經(jīng)典可行；

②陰性檢樣3 d可出結(jié)果，陽性檢樣4～5 d可出結(jié)果；

③在結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板上或阪崎顯色培養(yǎng)基上會產(chǎn)生假陽性菌，必須經(jīng)生物鑒定方可證實是陰性還是陽性結(jié)果。

(2)SN／T1632.3-2005法

①熒光PCR檢測設(shè)備一次性投入大，后續(xù)的消耗品成本較多，同時還涉及到標準陽性菌株的管理與更新?lián)Q代，對檢驗人員的技術(shù)要求較高；

②一般兩天可出檢驗結(jié)果，雖然靈敏度高，檢測周期短，但也會產(chǎn)生假陽性結(jié)果。對于Ct值在35～40的檢樣，需經(jīng)生化鑒定方可證實是陰性結(jié)果還是陽性結(jié)果。

2.2 檢驗結(jié)果比較

經(jīng)過對兩種檢驗方法的增菌法進行比較，陽性樣品最終在阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)相同(均為藍綠色菌落)和生化鑒定試劑盒鑒定結(jié)果一致(氧化酶陰性、L-賴氨酸脫羧酶陰性、L-鳥氨酸脫羧酶陽性、L-精氨酸雙水解酶陽性、檸檬酸水解陽性、D-山梨醇陰性、L-鼠李糖陽性、D-蔗糖陽性、D-蜜二糖陽性)。

2.3 方法可行性

經(jīng)過反復試驗得出，對一般檢驗機構(gòu)和普通企業(yè)可采用圖3推薦的方法進行實驗。

此檢驗程序?qū)z驗設(shè)備無特殊要求，方法可靠，所有檢驗試劑均方便購買，對檢驗人員的技術(shù)要求低，一般的檢驗機構(gòu)和食品生產(chǎn)企業(yè)均能做到。

3 對檢出阪崎腸桿菌企業(yè)的調(diào)查分析和建議

3.1 調(diào)查分析結(jié)果

經(jīng)過一年的跟蹤監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)嬰幼兒米粉中阪崎腸桿菌檢出率高于嬰幼兒奶粉。通過對檢出阪崎腸桿菌企業(yè)的調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)感染阪崎腸桿菌的原因主要是(1)生產(chǎn)環(huán)境的衛(wèi)生管理。嬰幼兒配方食品生產(chǎn)環(huán)境要求嚴格，企業(yè)雖然采用潔凈車間進行生產(chǎn)，但是對潔凈車間空氣凈化系統(tǒng)的維護、清理和保養(yǎng)不夠重視，造成空氣凈化系統(tǒng)成為污染源之一，另外對生產(chǎn)后的管道清理不干凈也是污染源之一(如有蟑螂出沒和霉變結(jié)塊)。(2)操作人員的個人衛(wèi)生不嚴格，如沒有嚴格按規(guī)定洗手、更衣、戴帽，穿專用工作鞋進入生產(chǎn)車間。

3.2 建議

(1)生產(chǎn)嬰幼兒配方食品的企業(yè)應(yīng)定期對生產(chǎn)車間的環(huán)境、空氣凈化系統(tǒng)、管道進行清掃、消毒，并嚴格監(jiān)督生產(chǎn)操作人員的衛(wèi)生習慣。

(2)因阪崎腸桿菌是存在于環(huán)境中的一種生物，常見于生產(chǎn)嬰幼兒配方食品的設(shè)施和家居環(huán)境中，因此，為防止開封后的產(chǎn)品受到家居環(huán)境的污染，開封后的產(chǎn)品應(yīng)密封保存于陰涼干燥處。

(3)要安全沖調(diào)嬰幼兒配方食品，首先必須把喂哺或沖調(diào)器具加以清洗和消毒。應(yīng)使用不低于70度的開水來沖調(diào)嬰幼兒配方食品，以殺死阪崎腸桿菌。沖調(diào)好的食品應(yīng)冷卻至可喂哺的溫度，然后立即飲用，若沖調(diào)后2 h內(nèi)仍未被飲用就應(yīng)該倒掉。

(4)為保證我國廣大嬰幼兒群體的健康與安全，建議加大監(jiān)管力度，在嬰幼兒谷類輔助食品和較大嬰兒和幼兒配方食品標準中也應(yīng)增加阪崎腸桿菌指標。

［1］徐文杰，張娟，戴峰，等.陰溝腸桿菌所致食品中毒細菌學及防治對策研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16(9)：132.

［2］高建新，盧兆蕓，肖菊珍.奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法［J］.中國乳品工業(yè)，2009，37(5)：40-43.

［3］高建新，陳海嬰，盧兆蕓.奶粉中一株阪崎腸桿菌的分離鑒定［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2010，37(1)：105-106.

［4］張愛霞，生慶海，張濤.食品中阪崎腸桿菌分析及檢測［J］.中國乳品工業(yè)，2005，33(10)：42-44.

［5］魯曦，師寶忠，王彬，等.LAMP法檢測乳粉中的阪崎腸桿菌［J］.現(xiàn)代食品科技，2010，26(5)：540-543.

［6］GB 4789.40-2010 食品微生物檢驗阪崎腸桿菌檢驗［S］.

［7］SN／T 1632.3-2005 奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法［S］.

鄭曉冰，E-mail：narcissus.b@163.com

2011-08-12