酵母β-葡聚糖牛奶增強免疫力功能研究

季國志，錢文濤，陳偉，李洪亮，于景華,2

（1.內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司，呼和浩特 011500；2.天津科技大學，天津 300457；3.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，呼和浩特 010018）

酵母β-葡聚糖牛奶增強免疫力功能研究

季國志1,3，錢文濤1，陳偉1，李洪亮1，于景華1,2

（1.內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司，呼和浩特 011500；2.天津科技大學，天津 300457；3.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，呼和浩特 010018）

研究酵母β-葡聚糖牛奶增強免疫力功能。采用B1/Fq代健康雌性小鼠，設(shè)0.08，0.17，0.50 g/kg 3個劑量組（分別相當于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍），以純牛奶配制，低、中、高劑量組質(zhì)量濃度分別為8.0，17.0，50.0 g/L，經(jīng)口每日1次給予小鼠相應(yīng)濃度的受試樣品，連續(xù)給樣1個月，檢測對小鼠體重、胸腺、脾臟器官、ConA誘導的脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化、DNFB誘導的DTH、溶血空斑數(shù)、血清半數(shù)溶血值（HC50）、碳廓清能力、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞、NK細胞活性的影響。結(jié)果表明，細胞免疫功能、體液免疫功能、NK細胞活性均與對照組有顯著差異，認為酵母β-葡聚糖牛奶具有增強免疫力功能。

酵母β-葡聚糖；牛奶；增強免疫力

0 引 言

酵母β-葡聚糖牛奶，是以酵母β-葡聚糖為主要原料的一款功能性牛奶產(chǎn)品。其功效成分酵母β-葡聚糖的免疫特性，近年越來越受到關(guān)注，特別是獲得新資源食品批準后，酵母β-葡聚糖越來越多的被普遍應(yīng)用于食品和保健品中，但目前在乳制品中尚未有過應(yīng)用實例。本項目研究了酵母β-葡聚糖與牛奶結(jié)合后，對小鼠細胞免疫功能，單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性的影響，為明確其作用機理，將其應(yīng)用于乳制品中打下理論基礎(chǔ)。

1 實 驗

1.1 樣品

純牛奶由內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司提供；

酵母β-葡聚糖由安琪酵母股份有限公司提供；乳化穩(wěn)定劑以乳化劑、增稠劑及變性淀粉混合配制。

1.2 動物及分組

按體質(zhì)量隨機組，每組10只，各取4組分別進行二硝基氟苯誘導小鼠DTH實驗、小鼠碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、小鼠抗體生成細胞及半數(shù)溶血值（HC50）實驗、ConA誘導小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化及NK細胞活性實驗等5個實驗項目[1]。

1.3 飼養(yǎng)條件

小鼠在溫度為20～25℃，相對濕度為40%～70%的實驗室屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)。

1.4 劑量

酵母β-葡聚糖牛奶 （酵母β-葡聚糖質(zhì)量分數(shù)32 mg/100 g）的人體推薦劑量250 mL/（人·日），折算成原料粉的人體推薦劑量為1 g/（人·日）（以60 kg體質(zhì)量計），設(shè)0.08，0.17，0.50 g/kg三個劑量組（分別相當于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍）， 另設(shè)0 g/kg組以純牛奶代替受試樣品。受試樣品用純牛奶配制，低、中、高劑量組質(zhì)量濃度分別為8.0，17.0，50.0 g/L，經(jīng)口每日1次給予小鼠相應(yīng)質(zhì)量濃度的受試樣品，小鼠灌胃量為10 mL/kg。連續(xù)灌胃1個月后測定各項增強免疫力功能指標[1]。

1.5 試劑與儀器

DNFB，SRBC，豚鼠血清，印度墨汁，RPMI1640，ConA，MTT，異丙醇，SA緩沖液，都氏試劑，YAC-1細胞，LDH基質(zhì)液。

打孔器，T1000型電子天平，JA2003型電子天平，721型分光光度計，SG-603生物安全柜，EL808酶標儀，二氧化碳培養(yǎng)箱。

1.6 方法

ConA誘導小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗（MTT法）；DNFB誘導小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）（耳腫脹法）；抗體生成細胞檢測 （Jeren改良撥片法）；血清溶血素測定（半數(shù)溶血值）；小鼠碳廓清實驗；小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗（半體內(nèi)法）；NK細胞活性測定（乳酸脫氫酶測定法）[1]。

1.7 數(shù)據(jù)分析

用SPSS10.0軟件對各實驗原始數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，滿足方差齊要求的數(shù)據(jù)資料，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理；對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理[1]。

1.8 結(jié)果判定

在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性4個方面任兩個方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。

“傳統(tǒng)生物刺激素因其原料來源和加工技術(shù)的限制，效果不穩(wěn)定且功能有限?！盨ynergie研究院總監(jiān)Geroge Ebert教授強調(diào)。據(jù)悉，由康樸生產(chǎn)的DeltaChem生物刺激素使用全球頂尖的生產(chǎn)技術(shù)加工海草、腐殖酸、殼聚糖、氨基酸等天然精選材料，通過特種組合的方式達到效能最大化，其獨特的生物發(fā)酵程序保證優(yōu)良穩(wěn)定的肥效。

其中細胞免疫功能測定項目中的兩個實驗結(jié)果均為陽性，或任一個實驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定細胞免疫動能測定結(jié)果陽性。體液免疫功能測定結(jié)果中兩個實驗結(jié)果均為陽性，或任一個實驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定體液免疫功能結(jié)果陽性。單核-巨噬細胞功能測定項目中的兩個實驗結(jié)果均為陽性，或任一個實驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定單核-巨噬細胞功能結(jié)果陽性。NK細胞活性測定實驗的一個以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細胞活性結(jié)果陽性[1]。

2 結(jié) 果

實驗過程中動物飲水攝食正常，外觀無異常。

表1 酵母β-葡聚糖牛奶對小鼠體質(zhì)量的影響g

2.1 酵母β-葡聚糖牛奶對小鼠體重的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，各劑量組體重增長值經(jīng)方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理。0.08，0.17，0.50 g/kg組與0 g/kg組比較，差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 對小鼠胸腺、脾臟器官的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，胸腺/體質(zhì)量、脾/體質(zhì)量經(jīng)方法齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理，結(jié)果如表2所示。由表2可以看出：0.08，0.17，0.50 g/kg組與0 g/kg組比較，差異無統(tǒng)計學意義。

表2 對小鼠胸腺、脾臟器官的影響

表3 對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響

表4 對DNFB誘導小鼠DTH的影響

2.3 對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，結(jié)果如表3所示。由表3可以看出，0.50 g/kg組加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值顯著高于0 g/kg組。

2.4 對DNFB誘導的小鼠DTH的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，結(jié)果如表4所示。由表4可以看出，0.17 g/kg和0.50 g/kg組耳殼增重顯著高于0 g/kg組。

2.5 對小鼠溶血空斑數(shù)的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，溶血空斑數(shù)經(jīng)方差齊性檢驗，不滿足方差齊性要求，用秩和檢驗進行統(tǒng)計處理，結(jié)果如表5所示。由表5可以看出，0.17 g/kg和0.50 g/kg組溶血空斑數(shù)顯著高于0 g/kg組。

表5 對小鼠溶血空斑數(shù)的影響

2.6 對小鼠HC50的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，結(jié)果如表6所示。由表6可以看出，0.50 g/kg組半數(shù)溶血值顯著高于0 g/kg組。

表6 對小鼠HC50的影響

2.7 對小鼠碳廓清能力的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，結(jié)果如表7所示。由表7可以看出：0.08，0.17，0.50 g/kg組與0 g/kg組比較，差異無統(tǒng)計學意義。

表7 對小鼠碳廓清能力的影響

表8 對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的影響

2.8 對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，吞噬指數(shù)、吞噬百分率經(jīng)sin-1P1/2（P為吞噬率，用小數(shù)表示）轉(zhuǎn)化后經(jīng)方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理，結(jié)果如表8所示。 由表8可以看出：0.08，0.17，0.50 g/kg組與0 g/kg組比較，差異無統(tǒng)計學意義。

2.9 對小鼠NK細胞活性的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的酵母β-葡聚糖牛奶1個月后，NK細胞活性經(jīng)sin-1P1/2（P為NK細胞活性，用小數(shù)表示）轉(zhuǎn)化后經(jīng)方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理，結(jié)果如表9所示。由表9可以看出，0.50 g/kg組NK細胞活性顯著高于0 g/kg組。

表9 對NK細胞活性的影響

3 結(jié) 論

酵母β-葡聚糖牛奶以0.08，0.17，0.50 g/kg連續(xù)給樣1個月，得出如下結(jié)果：

（1）細胞免疫功能。ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗中0.50 g/kg組加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值顯著高于0 g/kg組；DNFB誘導小鼠DTH的實驗中0.17 g/kg和0.50 g/kg耳殼增重顯著高于0 g/kg組。

（2）體液免疫功能。血清半數(shù)溶血值實驗中0.50 g/kg組小鼠血清半數(shù)溶血值顯著高于0 g/kg組；抗體生成細胞檢測實驗中0.17 g/kg和0.50 g/kg組溶血空斑數(shù)顯著高于0 g/kg組。

（3）NK細胞活性。小鼠NK細胞活性測定實驗中0.50 g/kg組NK細胞活性顯著高于0 g/kg組。

因此認為每人每天飲用酵母β-葡聚糖牛奶250 mL具有增強免疫力功能。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范：2003版[S].

Study of enhancing immune function on yeast β-glucan milk

JI Guo-zhi1,3，QIAN Wen-tao1，CHEN Wei1，LI Hong-liang1，YU Jing-hua1,2
（1.Inner Mongolia Mengniu Dairy Industry Co.Ltd.，Hohhot 011500，China；2.Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457，China；3.Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China）

The function of enhancing immune of yeast β-glucan milk was researched.Healthy female mice of B1/Fq was as the research subjects,setting three dose groups with 0.08 g/kg,0.17 g/kg,0.50 g/kg（equivalent to 5 times,10 times,30 times of the recommended intake of human respectively）,low,medium and high dose group concentrations were 8.0 mg/mL,17.0 mg/mL,50.0 mg/mL which were all prepared with pure milk,the mice were given once a day by mouth with the appropriate concentration of tested samples.Then the weight,thymus,spleen organ,ConA-induced spleen lymphocyte proliferation,DNFB-induced DTH,the number of hemolytic plaque,half of hemolytic serum（HC50）,carbon clearance ability,macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes,NK cell activity were detected after one month with the tested samples.The results showed that cellular immunity,humoral immune function,NK cell activity were significantly different with the control group,it can be concluded that the milk containing yeast β-glucan can enhance the immune function.

yeast β-glucan；milk；enhancing immune function

TS252.1

A

1001-2230（2011）07-0022-03

2011-03-16

季國志（1982-），男，碩士研究生，從事食品加工與安全領(lǐng)域的研究。